Antijen

1
Antijen
2
Yeni Inaktif ND Asi Susunun Hikayesi

• AB, newcastlein avrupada kökünün kazinmasini
  amaçliyordu .Bunun üzerine 08/02/1993 de
  Newcastle hastaligina karsi bagisiklik
  olusturmada yeni bir karar aldi.Bu karar
  Newcastle asilarinin standardizasyonu ile
  ilgiliydi.

3
Bu karara göre

• -Canli asilar için ICPI(Intraserebral patojenite
  indeksi) 0,4 den az olan suslar,
• -Inaktif asilar için ICPI 0,7 den az olan suslar
  asi susu olarak kullanilmaliydi.
• Bunun gerekçesi de kanatlinin tasidigi virusun
  asi virusu veya patojen saha virusu olup olmadigi
  ayiriminin yapilabilmesiydi.

4
AB yüksek ICPI ya sahip suslarin kullanimini
yasaklayinca,Merial arastirmacilari bu susun
yerine geçebilecek bir sus bulmak amaciyla
,ICPI 0,7 den daha az olan suslari denemelere
aldilar.Bu denemeler sirasinda önemli bir
sonuca ulasildi.Bu zamana kadar inaktif asilarin
hazirlanmasinda velogenik (çok patojen) suslarin
lentojeniklere göre çok daha iyi koruma
sagladiklari düsünülüyordu.Ancak,denemeler
sonunda en düsük ICPI ya sahip olan Ulster 2C
susunun koruma ve serokonversiyon bakimindan en
iyi sonucu verdigi görüldü.
5
SUS PARTI NO. EPRÜVASYON SONUÇLARI EPRÜVASYON SONUÇLARI HAI ANTIKOR TITRESI HAI ANTIKOR TITRESI ZARARSIZLIK ZARARSIZLIK
SUS PARTI NO. PD50/d Tarih G21de GO Tarih Sonuç Tarih
GB-Texas 0 0C 131 1 02 201 2 0M 451 338 357 864 18.01.90 08.09.91 06.04.92 207 183 279 24.02.90 27.03.91 24.03.92 Tatminkar Tatminkar Tatminkar 08.01.90 27.03.90 19.03.92
Ulster 2C 2 0F 391 2 0H 411 2 0U 511 649 458 880 13.03.92 13.03.92 03.08.92 226 343 557 04.03.92 04.03.92 24.07.92 Tatminkar Tatminkar Tatminkar 03.03.92 03.03.92 09.07.92
GO Geometrik ortalama
6
VIRAL ANTIJENLER VE ÖZELLIKLERI

• -proteinler iyi antijendirler.
• -lipidler lipoprotein veya lipopolisakkar
  it halindeyken iyi antijendirler
• -glikoproteinler iyi antijen
• -viral enzimler zayif antijen
• -nükleik asitler zayif antijen
• -eriyebilir maddeler zayif
• -karbonhidratlar zayif

7
BAZI VIRUSLAR VE IÇERIKLERI
Protein Lipid Genetik Materyal Karbonhidrat
Çiçek 91,60 5,00 3,20 0,20
Marek 70,00 22,00 7,00 1,00
Newcastle 74,00 19,00 1,00 6,00
8
En iyi immunojen

• Yukarida görülecegi gibi en iyi antijen olan(en
  iyi bagisiklik cevabi-antikor) proteinler degisik
  virus gruplarinda farkli miktarlardadir.
• Gayet tabii bu özellik degisik asilara verilen
  cevabin ölçüsü ve süresini de etkileyebilmektedir.
  
• Bu durum,gruplara göre farklilik olusturdugu gibi
  ayni grup içindeki farkli suslara karsi
  gösterilen bagisiklik cevabini da etkilemektedir.

9
NEWCASTLE VIRUSU PROTEINLERI VE ÖZELLIKLERI

• ND virusu F ve H proteinlerine sahiptir.
• F proteini koruyucu antikorlarin olusumunu
  saglarken,
• H proteini hemaglutinasyon antikorlari ni
  olusturur.

10

• Eger F proteini çiçek virusuna yerlestirilir ve
  tavuga verilirse hemaglutinasyon antikoru
  olusmadan bagisiklik saglanmis olur.Yani HI testi
  sonuçlari negatif çikabilir ancak hayvan
  korunuyordur.
• Bu denemeye benzer sonuç, asi adjuvanti
  konsantrasyonunun iyi ayarlanamadigi durumlarda
  da ortaya çikmaktadir.Böyle hallerde de asinin
  bagisiklik olusturma veriminde en ufak bir
  degisiklik olmadigi halde HA antikorlarinin
  olusumu sekteye ugrar ve titre yeterli çikmaz.

11
ANTIJENIK DETERMINANTLAR (EPITOP) VE ÖNEMLERI

• Antijenik determinant , immunojenin en üst ve
  belirgin yerinde bulunan ,immun yaniti uyaran ,
  özel bir bölge veya gruptur.Bunlar antikorlarla
  spesifik olarak birlesir ve antijen antikor
  reaksiyonlarinin özgüllügünü olustururlar.

12

• Bu özel bölgelerin sayisi üzerinde bulunduklari
  molekülün büyüklügü ile orantilidir.
• Protein karekterindeki antijenlerde 4 ila 8 arasi
  amino asitten , polisakkaritlerde ise 3-6
  sekerden olusmaktadir.
• Yapilarina fazla aminoasit bulunduran proteinler
  az bulunduranlardan daha immunojeniktir.
• Yine komplex proteinler(glikoprotein,lipoprotein,g
  likolipoprotenler) daha fazla immunojeniktirler(da
  ha iyi antijendirler).
• Amino asitlerin sayisi kadar türü ve siralanis
  biçimleri (polipeptid omurga)de immunojenitede
  çok önemlidir.

13

• Etkin bir immunolojik uyarim yaratmada molekülün
  büyüklügü (genellike 10.000 daltondan fazla
  olmali) ve buna bagli olarak da antijenik
  determinant sayisinin fazlaliginin rölü çok
  büyüktür.
• Ancak bunun yaninda antijenik determinantin
  kimyasal yapisinin,antijenik molekülün ne kadar
  komplex oldugunun, stabilitesinin , antijenik
  molekülün verilis yolunun ve diger bazi
  faktörlerin rölü vardir.

14

• Bir protein molekülü üzerinde birbirinden farkli
  özellikte antijenik determinantlar bulunabilir
  .Bu determinantlarin her biri ayri B hücresini
  (B-Lenfosit) uyarir.
• Uyarilmis B lenfositlerden plazmidler ve sonuçta
  plazmidlerin sentezledikleri antikorlar meydana
  gelir.
• Antijenik determinantlar arasinda kimyasal
  farklar bulundugu için sentezlenen antikorlar
  ister ayni siniftan(IgG,IgA,IgM,IgD,IgE ) isterse
  alt siniftan olsun (IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA1,IgA2)
  bu antikorlar arasinda biyolojik aktivite
  bakimindan in vivo ve in vitro olarak ayriliklar
  vardir.
• Vucutta çesitli B hücrelerinin uyarilmalari
  sonunda meydana gelen ve degisik aktiviteye sahip
  antikorlara poliklonal antikorlar denir.

15

• Antijenler ,hazirlanmalari sirasinda moleküldeki
  antijenik determinant bölgelerinin saglam ve
  stabil olarak kalmali,asi imali sirasinda bir
  bozulmanin meydana gelmemeli,vucutta normal
  katabolizma faaliyetine maruz kalmadan yani yapi
  ve sekillerinde büyük degisiklikler olusmadan
  önce lenfoid hücrelere (B-ve T- hücreleri)
  ulasmali ve onlar tarafindan taninmalidirlar.
• Aksi taktirde,yani hücrelere varmadan , vucutta
  çok çabuk ayrisan antijenler belirgin bir uyarim
  yapmadan atildiklari gibi makrofajlar tarafindan
  alinip çesitli enzimlerin etkisi ile modifiye
  olanlar yani kimyasal yapisi,antijenik
  determinantlari bozulanlar da lenfoid hücrelerce
  (B ve T hücrelerince) dogal karekterlerinden
  farkli bir biçimde algilanir ve uyarimlari da
  degisik olur.

16

• Muhakkakki ,immunojeniteyi belirleyen faktörler
  sadece antijenin yapisi ile ilgili degildir.
• Adjuvantlarin, asinin canli veya ölü olusunun ,
  asinin verilis yolunun,hayvanlarin genetik
  yapisinin ,yasinin ,cinsiyetinin ,irkinin ,içinde
  bulundugu çevrenin , v.b de rölü büyüktür.

17

• Bütün bunlar ,iyi koruyan bir asi üretmek için
  bilinmesi gerekenlerin ne kadar çok ve asi
  üretmek için seçilmesi gereken teknolojinin ne
  kadar önemli oldugunu göstermektedir.
• Iyi bir asinin ne demek oldugunu basimiza felaket
  gelmeden önce bilmek bizim görevimizdir.

18
INAKTIF ASILARIN ETKISI

• Inaktif asilar uygulandiktan sonraki birkaç gün
  içinde interferon sentezini ( interferonlar ,
  virus ile enfek te hücrede olusan ve buradan
  enfekte olmamis hücrelere geçebilen ve hücrede
  anti-viral protein sentezlenmesini saglayarak,
  virusa karsi direnç kazandiran proteinlerdir.)
  uyararak koruma özelligini gösteririler.Asiya
  bagli özel bagisiklik ise bundan bir süre sonra
  olusur.

19
KLONLANMIS ASI

• Sahadan toplanan suslar önce doku kültürüne
  ekilirler.
• Sonra ayni plak karekteri gösteren alt
  populasyonlar izole edilip ayri ayri doku
  kültürüne ekilirler.
• Daha sonra attenue edilerek bagisiklik verme gücü
  bakimindan deney hayvanlarinda denenirler.
• En yüksek bagisikligi veren alt populasyon asi
  susu olarak kullanilir.

20
SUBUNIT ASI

• Bu asilar Rekombinant DNA teknolojisine göre
  hazirlanirlar.
• DNA üzerinde bulunan ve önemli bir proteinin
  sentezini kodlayan gen çikarilir.Bir tasiyici DNA
  ile birlestirilir ve bir bakteriye(mayaya)
  aktarilir.
• Diger viral asilarda görülen postvaksinal
  reaksiyonlar(saflastirilmasi iyi yapilmamis olan
  viral asilarda görülen pirojenik ve allerjik
  reaksiyonlar,abortuslar) bu asilarda
  görülmez.Ayrica subunit asilarda diger virus
  asilarina göre 100 kat daha fazla yüzey proteini
  bulunmaktadir.

21
YÜKSEK ANTIKOR TITRESI HER ZAMAN YÜKSEK KORUMANIN
ÖLÇÜSÜMÜDÜR?

• Bazi viral hastaliklarda in vitro testlerle
  ölçülen yüksek antikor varligi ile in vivo koruma
  kapasitesi arasinda bir korelasyon
  bulunmamaktadir.Yani serumda antikor titresi
  yüksek çikmasina ragmen, koruma ayni ölçüde
  olmamaktadir.
• O halde bazi viral enfeksiyonlarda , ölçülebilir
  antikorlar, bagisikligin bir kismini
  olusturmakta,T lenfositlerle saglanan hücresel
  bagisiklik ise esas kismi olusturmaktadir.

22

• Örnegin newcastle virusu gibi sindirim ve solunum
  sisteminden vucuda yayilma egilimi gösteren
  viruslar için hem sistemik hem de mukozal
  bagisiklik neticesi olusan antikorlarin önemi
  olmasina ragmen,kan dolasimina girmeyen grip
  virusu gibi etkenlere karsi kanda yüksek titrede
  antikor bulunmasinin önemi yoktur.Bu gibi
  enfeksiyonlarda mukozal bagisiklik daha önemlidir.

23
KROS REAKSIYON

• Bir antijen molekülünde bulunan antijenik
  determinantlarin bir veya birkaçi bazi özellikler
  yönünden diger bir immunojende de bulunabilir.Bu
  ortak antijenik determinantlar nedeniyle,in vitro
  testlerde ,birine karsi olusan antiserum digerine
  karsi da az çok oranda serolojik reaksiyon veriri.

24
SAFLASTIRMA ISLEMI ULTRAFILTRASYONUN ÖNEMI NEDIR
?

• yi filtre edilmis asilarda yabanci protein
  kalintilarina bagli allerjik reaksiyonlar ortaya
  çikmaz.
• Saflastirilmamis herhangi bir yagli adjuvantli
  asinin uygulanmasi bir baska enfeksiyonun
  varligini ortaya çikarmak için yapilan serum lam
  aglutinasyon testlerinde yanlis pozitif
  reaksiyonlarin ortaya çikmasina neden olabilir.
• Örnegin Içinde serum kalintilari bulunan inaktif
  yagli adjuvantli ucuz karma asi ile asilanmis
  bir damizlik sürüde, rutin CRD kontrolü için
  yapilan lam aglutinasyon testleri yanlis olarak
  pozitif reaksiyon verebilir.