Listeria

1

• Dr. Cihat Rifat YILMAZER

2

• 1985 yilinda ABD ve Isviçrede Listeria
  Monocytogenes bulasmis yumusak peynir türlerinin
  tüketilmesine bagli olarak ölümlerin görülmesi,
  bu bakteriye önem verilmesine neden olmustur.

3
Hücresel Özellikleri

• Gram
• Sporsuz
• Kapsülsüz
• Hareketli
• 25 derecede karakteristik hareketli Takla Atar
  Tarzda (Corinebakteriden ayiran )
• 20ºCde üretildiginde pritrik flagella olusturur
  ve hareketlidir. 37ºC de hareketsizdir. ( Normal
  florada ayiriminda )Diger türler hareketlidir.
• Çok düsük derecelerde üreyebilen
• Fakültatif anaerob, aerob, mikroaerofilik

4
(No Transcript)
5
(No Transcript)
6
Morfoloji

• Tek tek
• Çift
• Çomakcik
• V, Y veya
• Kisa zincirler seklinde

7

• Genç kültürlerde korinebakterilere çok benzeyen
  kokoid formdadirlar.
• Zorunlu hücre içi paraziti 
• L.monocytogenes dar bir Beta hemoliz olusturur. (
  L. seeligeri ve L. ivanovii de hemolizin üretir.
  )

8
Hücre Içi Parazitler
9

• F\doktora\bakteriyoloji\Listeria\listeria
  monocytogenes bacteria.gif

10
Kültürel Özellikleri

• Serumlu glukozlu, kanli glukozlu tryptose agar
  gibi kati besiyerlerinde iki gün içerisinde
  parlak, seffaf, yuvarlak ( semsiye tarzi )
  S tipi  küçük ve gri koloniler
• Eski kültürlerde R tipi koloniler olustururlar.

11
(No Transcript)
12
Spesifik Besiyerleri

• Potasyum tellüritli veya kalium rodanitli glukoz
  serumlu triptoz agar,
• Tiyoglikolatli veya beyinli besi yeri,
• Glukoz, talyum asetat, nalidiksik asit, furasin
  içeren serumlu triptoz agar.
• Buvyon kültürü sivi besiyerleri içine karaciger,
  serum, kan, glukoz içerisinde homojen
  bulanikliklik olustururlar.
• Listeria türleri mavi yesilimsi renk veren düz
  kenarli, yari-saydam ve hemolizli koloniler
  yaparak ürerler. 

13

• Alinan örnekler Tiyoglikolat buyyon  besiyerine
  çift ekim yapilir. Ekimlerin biri 37 Cde digeri
  4 Cde inkübe edilir.
• 37 Cdeki buyyondan iki gün sonra Koyun kanli
  agara pasaj yapilir ve üreme olmazsa on gün sonra
  tekrar pasaj yapilir. 
• Eger üreme yok ise 4 C derecede inkübe edilen
  diger ekimden her hafta pasaj yapilarak
  inceleme iki aya kadar devam ettirilir.

14

• Nisin ve pediosin gibi bakteriyosinler L.
  monocytogenes'in gelisimini engellemektedir.
• EMS sik uygulanir.
• L. Monocytogenes için tavsan gözünde Anton Testi
  yapilabilir. (Tavsan veya kobay konjunktivasina
  2-3 damla damlatilan bakteri süspansiyonu 3-5 gün
  içinde keratokonjunktivite neden olur. )
• Potasyum sorbat ( 0,2) ve sodyum benzoat (
  0,1), 13 oC'ta ve pH 5,0'de bakterinin gelisimini
  inhibe etmektedir.
• Polimiksin B ye dirençlidir.
• CAMP testi ( )
• (Staf. Aureus ile çapraz ekim)

15
(No Transcript)
16
(No Transcript)
17
Biyokimyasal Reaksiyonlar

• Karbonhidratlarin ( glukoz, maltoz,
  laktoz)bazilarindan asit olusturur ama gaz
  olusturmaz. (Oksidatif-fermentatif metabolizma )
• Oksidaz , mannitol ( - ),
• Katalaz ( ) ( Sreptokoklardan ayiran )
• pH ortami optimal 6.0- 8.0 arasindadir.
• Metil Red, Voges-Proskauer ve katalaz
  reaksiyonlari ( ),
• 6 NaCl de üreme,
• Indol, oksidaz ve üre reaksiyonlari (- ).

18
(No Transcript)
19
SEROLOJI

• Listeria türleri somatik (O) ve flagellar (H)
  antijenlerine göre 4 serotipe ayrilmislardir.
• Daha sonra yapilan çalismalarda ise 1/2a, 1/2b,
  1/2c, 3a, 3b, 3c, 4a, 4ab, 4b, 4c, 4d, 4e,
• 5,7,6a, 6b gibi degisik serotipler tespit
  edilmistir (Mc Lauchlin, 1987 Graves ve ark.,
• 1999).

20

• L. monocytogenes 4b serotipi en önemli patojenik
  sus olarak saptanmistir.(1/2a ve 1/2b serotipleri
  de )
• Hücre duvarlarindaki teikoik asit
  tiplendirmelerine göre farklilik gösterirler.
• (N-acetylglucosamine de galactose and glucose
  içerir. )

21

• 1/2a serovarinin 4 oC'ta iki antilisterial
  bakterosine karsi 4b'den daha dayanikli oldugu ve
  bunun tersi olarak da 4b serovarinin 4 oC'taki
  depolama sonrasi 60 oC'taki isil isleme 1/2a
  serovarindan daha dayanikli oldugu bulunmustur.
• Buna ilaveten 4b serovarinin 4 oC'taki
  depolamadan sonra insan vücut sicakligi olan 37
  oC'a transferinde 1/2a serovarindan daha kisa lag
  fazina ve daha yüksek patojeniteye sahip oldugu
  bildirilmistir.

22

• Ayni serotipin farkli türlerde de olmasi nedeni
  ile serotiplendirme identifikasyon degil, daha
  ziyade hastalik etmeninin hangi serotipte
  oldugunun belirlenmesi için uygulanir.
• Listeria türlerinde bulunan A, B, C ve D
  flagellar antijenlerinden en yaygin olarak
  bulunan B antijenidir.
• Patojen olmayan türlerin (L. innocua ve L.
  seeligeri), L. monocytogenes ile bir veya daha
  fazla ortak antijeni bulunmaktadir.

23

• Serolojik tani kullanilmamaktadir. Hastalik
  esnasinda listeriolizin O için antikorlar olusur
  ise de tanida deger tasimamaktadir.
• Staf ve Strep Fecalis ile benzer antijenik
  özellikler nedeniyle çapraz rxn verirler.
• Moleküler tani içi PCR, LCR ve RFLP gibi
  yöntemler kullanilmaktadir.

24
Patojenik Özellikleri

• Bakteri fakültatif intrasellüler
  patojendir.Infektivitesi yüksek, patojenitesi
  düsüktür.Klinik belirtiler alinan bakteri
  miktari ile iliskilidir.
• Fagosite edilen bakterinin fagozom etrafindaki
  membrani parçalayarak stoplazmaya geçmesini
  saglar ve bakteriyi fagositozdan korur.

25

• L. monocytogenes'in neden oldugu
  listeriozisin mekanizmasi tam olarak
  açiklanabilmis degildir ancak L. monocytogenes'in
  ß-Listeriolizin adi verilen bir hemolisin
  üretimine bagli olarak patojenite gösterdigi
  bilinmektedir.
• Listeriolizin, hücrelerin sitoplazmik
  membranlarinda porlar açarak hücrenin
  geçirgenligini bozan ve parçalanmasina neden olan
  toksik bir maddedir.
• L. monocytogenes, kültürlerde trypsine
  duyarli, diyalize olmayan, termolabil ve
  antijenik karakterde hemolisin sentezler.
• Bu hemolisinin üretimi ile lipaz üretimi
  arasinda bir iliski oldugu ve sadece virulent
  suslarin lipolitik oldugu gösterilmistir.

26

• Yüzey proteinleri internalin sayesinde epitel
  hücrelerinde bulunan ve L.monocytogenes için
  reseptör görevi gören bir glikoprotein olan
  E-cadherine tutunur.
• LpeA olarak tanimlanan bir membran lipoproteini
  fagositik olmayan hücrelere girisi hizlandirir.

27

• Fagositoz sonucu bakteri fagolizozom içine
  alinir.
• Fagolizozom içindeki düsük pH, bakterideki
  listeriolizin-O ( ekzotoksin, yasayan hücrelerden
  )ve iki farkli fosfolipaz C enziminin
  salgilanmasini uyarir. ( por olusturan Sitolizin
  )
• Bu enzimler fagolizozom zarini eriterek
  bakterinin sitoplazma içine kaçmasina yardimci
  olur. ( bagisik yanittan kaçis hücreden hücreye
  dogrudan yayilim )

28

• Bakteri sitoplazma içinde çogalirken bakteriyal
  bir protein olan ActA sayesinde hücrenin aktin
  polimerizasyonunu uyarir ve hücre zarina dogru bu
  aktin kuyruk ile tutunur.
• Daha sonra membranda filopod olarak
  isimlendirilen bir çikinti olusur. Bu çikinti
  etrafta bulunan epitel hücresi, makrofaj ve
  hepatosit gibi hücreler tarafindan içeri alinir.
• Listeria yeni hücrenin içine geçer ve döngü
  tekrar baslar. Böylece bakteri hücre disinda
  bulunan antikor, kompleman ve polimorfonükleer
  hücrelerden kurtularak enfeksiyonu devam ettirir.

29
(No Transcript)
30
Infective focus in the liver of mice 7 days after
infection with L monocytogenes. Note the
granulomatous reaction characterized by central
accumulation of epitheloid cells (macrophages)
and the presence of some dark, round cells
(lymphocytes) in the periphery.

• Diger bir çok mikroorganizma gibi demir Listeria
  için çok önemlidir. Listeria sideroforlar
  olusturarak transferrinden demir alabilir.

31
PATOGENEZ

• Adherans. Fagositik hücrelere (e.g., macrophages)
  and nonfagositik hücrelere (e.g., enterocytes).
• Invazyon. Endositozla, listerianin yüzeyinde
  bulunan internalin adli proteinle .
• Endozom Olusumu ve Ortadan Kaldirilmasi.
  Listeriolizin adli virülans faktör endozomal
  membranda porlar açar. Listeria sitoplazmaya
  geçer.
• Replikasyon ile enfekte hücrede bakteri çogalir.
• Lokal Hücre içi Diseminasyon. Listerianin bir
  ucundaki enfekte hücrelerin actin ile polimerize
  olmasi ile actin kuyruklari ile listeria hücre
  membranina dogru ilerler.
• Listeriopodlarin Olusumu Hücre içerisine
  alinmasiyla yikim döngüsü baslar.
• Dissemination genellikle kan yolu yayilimlidir.

32

• Ilk basamak fagosite ve nonfagositer hücrelere
  tutulum ve içerisine yayilim iledir. (
  enterocytes, fibroblasts, dendritic cells,
  hepatocytes, endothelial cells, M cells, and
  macrophages )
• Internalin adli yüzey proteininin etkisi ile,
  Listeria hücre duvarindan yeni bir organizasyona
  sebep olur ve olusturdugu vakuol ile hücre
  içerisinde girisini saglar.
• Hücre sitoplasmasina hizlica listeriolysin O
  (LLO) salgilayarak geçer. ( streptolysin O ve
  diger por olusturan sitokinler benzeri etki
  gösterir )

33
(No Transcript)
34

• Kültürde, enfekte hücrenin içerisindeki L.
  Monocytogenes hareketi görülmektedir.Actine
  baglanan bir immunofloresan antibody
  kullanilmistir. Kuyruklu yildiz seklindeki aktin
  kuyruklari, bakteri hücrede hareket ettikçe onu
  izlemektedir.

35
IMMUNITE

• Çok az bölümü Humoral olup, büyük bölümü Hücresel
  Bagisiklik Sistemince olusturulur.
• Antijen spesifik CD4 and CD8 T hücreleri
  enfeksiyona cevap vermede ve bagisiklik kazanmada
  önemlidir.
• Gida sanayisinde Listeria türleri ve özellikle L.
  monocytogenes için faj içerikli preparatlarin
  kullanimi giderek yayginlasmaktadir. Fajlar,
  konakçiya spesifik olup, hedef bakteriyi bir
  anlamda yok etmektedir.

36

• Listeria suslari Enterococcus faecalis, S.
  aureus, S. epidermidis, E. coli, Corynebacterium
  pyogenes, B. subtilis, Citrobacter, Pseudomonas
  ve Salmonella türleri gibi bazi bakterilerle bir
  takim küçük antijenik fraksiyonlari paylasirlar.
• Bunlarin disinda Seeliger ve ark., L.
  monocytogenes'te çogu Gram pozitif bakteride
  ortak olarak bulunan Rantz tipi bir antijen
  oldugunu bildirmislerdir. Bu nedenle listeriozis
  semptomu göstermemis ama daha önce bu
  bakterilerle karsilasmis kisilerin serumlarinda
  yüksek oranda yalanci L. monocytogenes antikor
  titreleri görülebilmektedir. Bu durum, hastaligin
  aglütinasyonla tanisinda yanilmalara neden
  olmaktadir.

37

• Hasta serumunun S. aureus veya S. epidermidis ile
  absorbe edilmesi bazi çapraz reaksiyonlarin
  önlenmesine yardimci olmaktadir.
• Tripsin kullanilarak hazirlanan antijenlerle de
  çapraz reaksiyonlarin azaldigi gösterilmistir.

38
Listeria Türleri

• L. monocytogenes,
• L. innocua,
• L. seeligeri,
• L.ivanovii,
• L. Welshimeri,
• L. Murrayi ( L. Grayi subs. Grayi )
• L. grayidir.
• Bunlar içinde sadece Listeria monocytogenes
  insanlara patojendir.
• Listeria ile çalisilmasi zor ve tehlikelidir.

39

• L. monocytogenes genis bir alana yayilmakta ve
  su, silaj, lagim suyu, mezbaha atiklari,saglikli
  ve mastitisli ineklerin sütleri, insan ve hayvan
  diskisinda oldugu gibi pek çok yerde
• bulunabilmektedir. Toprakta saprofittir. (Farber
  ve Peterkin, 1991).
• L. monocytogenes süt ve ürünleri, sigir ve domuz
  eti ile fermente sucuk gibi et ve ürünleri, turp,
  lahana gibi taze ürünler ile deniz ürünlerinden
  ve gidalarin hazirlandigi ortamlardan izole
  edilmistir

40

• Listeria monocytogenesin oldukça yüksek
  sicakliklara dirençli oldugu,
• buzdolabi sicakliklarinda da çogalabildigi,
• nemli ortamlarda birkaç ay,
• tuzlu ve kuru ortamlarda ise iki yila yakin
  yasayabildigi bilinmektedir.

41

• Anadolu'nun degisik yörelerindeki çig sütlerin
  18.2'inde L.monocytogenes varligi belirlenmistir.
• Tüketime hazir gidalar arasinda özellikle izgara
• tavuk, kokoreç, izgara balik, midye tava,
  donmus çig Inegöl köfte L. monocytogenes, L.
• innocua ve L. welshimeri içermeleri nedeniyle
  riskli gidalar arasinda bulunmustur

42
(No Transcript)
43
ENFEKSIYONLAR

• Listeria monocytogenes önemli derecede bir
  patojendir. Insanlarda menenjit, septisemi,
  konjuktivit, deri ve mukoza lokalizasyonlari ve
  kan tablosunda monositoza neden olmaktadir.
• Gida tüketildikten 12 saat sonra ates, karin
  kramplari, diyare, yorgunluk, bas agrisi ve
• kusma ile seyreden gastrointestinal bir sendrom
  meydana gelmekte ve Listeriyal menenjit
• ve bakteriyemi gibi daha ciddi durumlar ancak
  günler veya haftalar sonra ortaya çikmaktadir.

44
(No Transcript)
45
(No Transcript)
46
(No Transcript)
47

• Intestinal ve vesical listeria Sindirim
  sisteminin subklinik enfeksiyonlari en sik
  rastlanan formdur.
• Septisemik Listeriyozis Dalak, karaciger ve
  sindirim sisteminde fokal nekroz baslica
  lezyonlardir.
• Abortus Nötrofil veya makrofajlar tarafindan
  fagosite edilen bakteri kana geçer.Abortus
  gebeligin son üçte birinde görülür.
• Nörolojik Sistemde Listeriosis Klinik olarak en
  sik rastlanan formdur. Daire tarzinda dönme
  hareketi, unilateral (tek tarafli) facial
  paraliz, korneal opasite, koma ve ölüm en
  belirgin klinik bulgudur.

48
Ayirici Tani

• Enterotoksemi (Cl. perfringens)Beyin
  apseleriBrusellozisVibriozisKetozisBradzot
  (Cl. septicum)Siçrama (louping ill)
  hastaligiKuduzViral ensefalitisCoenurus
  cerebralis (CCN)

49
(No Transcript)
50
(No Transcript)
51
(No Transcript)
52
(No Transcript)
53
(No Transcript)
54

• Connatal listeriosis
• multiple abseli sepsis ve infantlarda bir çok
  organda granülomlar ile karakterizedir.
  (granulomatosis infantiseptica).

55
(No Transcript)
56
(No Transcript)
57
(No Transcript)
58
TEDAVI

• Amoxicillin,
• Penicillin G (ampisilin),
• Co-trimoxazole ( i.v. ).

59
(No Transcript)
60
Kaynaklar

• 1. The Desk Encyclopedia of Microbiology
• ( Moselio Schaeehter )
• 2. Essential Microbiology ( Stuart HOGG )
• 3. Medical Microbiology (Jawetz, Melnick
  Adelberg)
• 4. Medical Microbiology ( Samuel Baron )
• 5. Medical Microbiology (Kayser, Bienz, Eckert,
  Zinkernagel)
• 6. Microbiology Immunology (Subhash, Chandra,
  Parija)
• 7. Medical Microbiology ( Sherris )
• 8. www.mikrobiyoloji.org
• 9. Çesitli Güncel Biyoloji, Veterinerlik, Gida
  Mühendisligi Makaleleri ve Tezleri

61
(No Transcript)
62
(No Transcript)