Inmunoensayos

1
Inmunoensayos

• Análisis forense
• Servicio Medico Legal Santiago,Chile
• Ethel Guerrero-Víctor Vidal

2
Test preliminares

• Basados en la exactitud de los hallazgos
  analíticos, un procedimiento analítico puede ser
  considerado preliminar o método concluyente.
• Los métodos de análisis preliminares son útiles
  para propósitos de screening

3
Test preliminares

• Los ejemplos típicos de la categoría
• de métodos preliminares donde no es necesaria
  la instrumentación son
• Test de color y los inmunoensayos
• de panel

4
Test preliminares

• Métodos preliminares que requieren
  instrumentación
• Radio inmunoensayo
• Enzimo inmunoensayo
• Fluorescencia polarizada
• Luminiscencia

5

• El protocolo en el cual es usado un método
  preliminar, requiere de dos pasos cuando un
  resultado es positivo
• Los presuntivos positivos tiene que ser testeado
  para una droga especifica y sus metabolitos por
  cromatografía gaseosa /espectrometría de masas
• Solo esas drogas pueden ser reportadas como
  positivas

6
Valores de corte

• Si se utiliza un inapropiado valor de corte
  (cutoff)
• Si es adoptado un bajo nivel de corte, habrá un
  exceso de resultados negativos analizados por
  GC/MS
• Por el contrario si el cutoff es muy alto en el
  test preliminar, las muestras positivas pueden
  ser reportadas como negativa sin el proceso de
  GC/MS
• Causando al proceso de testeo de drogas una
  técnica ineficiente

7
ADULTERANTES

• La presencia de adulterante comunes y accesibles
  afectan la respuesta del común de los
  inmunoensayos .
• El efecto del adulterante varía con la categorías
  de las drogas testeada y la metodología de
  inmunoesayos usados
• Los adulterantes que causan interferencias
  significativas han sido revisada (1)
• 1.Cody J T, Specimen adulteration in drug
  uranalysis forensic Sci Rew 263,90

8
Adulterantes

• sustancia cantidad método droga muestra
  efecto ref

sustancia cantidad método droga muestra
efecto ref
9
adulterantes

• sustancia cantidad método droga muestra
  efecto ref

10
adulterantes

• sustancia cantidad método droga muestra
  efecto ref

11
adulterantes

• sustancia cantidad método droga muestra
  efecto ref

12
AdulterantesI

• sustancia cantidad método droga muestra
  efecto ref

13
Adulterante II

• cantidad método droga
  muestra efecto ref

14

• sustancia cantidad método droga muestra
  efecto ref

15
adulterantes

• sustancia cantidad método droga muestra
  efecto ref

16
adulterantes

• sustancia cantidad método droga muestra
  efecto ref

17
Adulterantes

• La mayoría de los estudios analizados no han
  comparado los efectos de los adulterantes bajo
  las mismas condiciones
• Dificulta hacer declaraciones generales
  concerniente a la robustez de una metodología
  sobre otra.
• Sin embargo los ensayos de marihuana son más
  susceptibles a los efectos de los adulterantes

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Realidad Médico Legal

• En el departamento de laboratorios de Santiago se
  realizaron 6762 pericias toxicológicas
• de los cuales 33 de estas pericias, no es para
  determinar la causa de muerte, sino para entregar
  más elementos a la investigación
• 1007 corresponden a informes sobre consumo de
  drogas de abuso

19
Análisis toxicológico

• Grupo G1 tanatología
• Diagnóstico de muerte por arma blanca, arma de
  fuego, golpe contundente y atropello
• clínica y sexología forense
• pericias que corresponde a consumo de drogas de
  abuso, psiquiatría forense
• son sometidas a un rastreo de drogas de abuso
  incluyendo alcohol

20
Toma de decisión

• La Administración de Justicia necesita de
  respuestas oportunas
• debido a la gran cantidad de peritajes, se
  tomó la decisión de utilizar la técnica de
  inmunoanálisis, para el rastreo de drogas de
  abuso.
• por GC-MS considerada actualmente el gold
  standar de la técnicas confirmatorias.

21
INMUNOENSAYOS

• en la actualidad la mayoría de los laboratorios
  forenses realizan screening de drogas de abuso
  mediante técnicas de inmunoensayo debido que
  dichas técnicas presentan una elevada
  sensibilidad y son rápidas de usar (10)

22
Orina

• La orina es el fluido biológico preferido para el
  análisis de uso de drogas ilegales y sus
  metabolitos.
• Mientras la tendencia reciente ha sido aplicar
  tecnología de laboratorio a nuevos medios
  biológicos, debería tenerse en cuenta que el
  análisis de orina es una tecnología bien conocida
  en la que la mayoría de los problemas ha sido
  descubiertos y resueltos ,o por lo menos ,
  definido.

23
Orina

• La importante ventaja de la orina para los test
  de detección de drogas es que generalmente esta
  disponible en cantidad suficiente, es fácil de
  recoger y las drogas y sus metabolitos tienden a
  estar presente en concentraciones relativamente
  altas

24
Comparación de inmunoensayo y equivalencia

• Cada analito de los paneles fue evaluado en
  comparación entre panel EMITR y CG/MS
• Todos los resultados fueron confirmados por CG/MS

25
Opiáceos
26
Cocaína
27
Marihuana THC
28
ANFETAMINAS
29
METANFETAMINAS
30

• Cada método de screening tiene sus ventajas y
  desventajas
• Unos u otros pueden ser más económico bajo
  diferentes series de circunstancias
• Cada laboratorio tendrá que considerar esas
  circunstancias y elegir el método que le entregue
  el screening mas eficiente para un grupo de
  drogas en particular

31
SANGRE

• La sangre es considerada como la muestra más útil
  para la identificación de drogas en análisis
  cuantitativo.
• Dado que Las sustancias psicoactivas que se
  testean a menudo abandonan la sangre rápidamente
  esta es más útil para para la identificación del
  consumo reciente
• Generalmente los valores de están en la sangre en
  concentraciones bajas, típicamente en un rango de
  5ng (10-9) -5mg(10-6)

32
sangre

• Existen diversos procedimientos de detección de
  drogas en sangre para las drogas que se abusa más
  frecuentemente
• La CL es una de las técnicas más empleadas, ya
  que es capaz de identificar al mismo tiempo
  diversos compuestos similares
• La GC-MS por si misma permite el análisis de
  sangre pero se debe realizar una derivatización
  para incrementar la sensibilidad

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inmunoensayo

• Los inmunoensayo para las drogas de abuso están
  diseñados para la determinaciones en orina y en
  sangre,
• Es con la sangre con lo que la versatilidad y la
  sensibilidad del RIA y posteriormente del ELISA
  son particularmente ventajosa

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Sangre

• En1978 se publicó la aplicación de inmunoensayo
  a un fluido distinto de la orina (10).desde esa
  fecha la comunidad toxicológica ha manifestado
  interés hacia la aplicación de los inmunoensayos
  a diversas muestras biológicas como suero ,
  sangre total, bilis, humor vítreo y tejidos (11)
• La extensión de los inmunoensayos a las muestras
  de sangre conlleva la modificación de los
  procedimientos utilizados en el análisis de
  orina, por lo que las muestra de sangre total no
  pueden ser analizadas de forma directa.
• Presentan altos niveles de absorbancia que
  interfieren con los medidas a realizar por los
  métodos inmunoenzimaticos, por lo que es
  necesario una preparación de la muestra antes de
  someterla al análisis(12)

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sangre

• Durante estos últimos meses en nuestro
  Laboratorio ha estado desarrollando un método
  para detectar presencia de de drogas de abuso en
  sangre mediante la aplicación de técnica de
  inmunoensayo

36
DROGAS DE ABUSO ESTUDIADAS
37
referencia

• 11.Vogel J, Hednett CNDetection of drugs in
  blood, bile and tssues with an enzyme inmunoassay
  technique, J Anal Toxicol,5307-30981
• 12.Lillsunde P, Michenson L, ForsstronT, KurteT
  SchultzE, Ariniemi K .. Comprehensive drug
  screening in blood for detecting abused drugs or
  drug potencially hazardous for traffic safety.
  Forensic Scien Innt,77,191-210
• 13. Screenig de drogas de abuso en sangre total
  mediante inmunoesayo enzimático CEDIA
  originalmente diseñados para el análisis de orina
  .aplicación en caso forense.R Garcia E Moreno T
  Soriano

38
referencias

• 2. Cody JT Schawarzhopff RImpact of adulterants
  on RIA analysis of urine for drugs of abuse J
  Anal. Toxicol1327789
• 3. Bronner W,Nyman P.,von Minden
  D.Dectectability of phencyandclidine
• 11-nor-D9-tetrahidrocannabinol-9-carboxylic
  acid in adulteratedurineby radioinmunoassay and
  flurescence polarization inmunoassay J Anal
• Toxicol 1436890
• 4. Schawarzhopff R, Cody JT the effects of
  adulterrants agents on FPIAanalysisof urine
  drugs of abuse J Anal Toxicol 171493
• 5. WarnerMInterference of common household
  chemicals i inmunoassay methods for drugsof
  abuse Clin Chem3564889
• 6. MIKKELSEN s l,Ash KO Adulterants
  causingfalse negative in ilicite drugs testing
  Clin Chem34233388
• 7. Schwarts R H, Hayden GF , RiddileMLaboratory
  detection marijuana use Am J D iseases of
  Children 139109385
• 8. Kim HJ ,Cerceo E Interference by NaCl
  with the Emit method od f analysis for drugs of
  abuse Clin Chem 221935,76
• 9. WarnerMInterference of common household
  chemicals i inmunoassay methods for drugsof
  abuse Clin Chem3564889
• 10 iwerse-Bergman A, Schomolldt Direct
  semiquantitative screening of drugs of abuse in
  serum and whole blood by means of CEDIA DAU
  urine inmunoassays J Anal Toxicol, 23247-25699