Mikrobioloski preparati - PowerPoint PPT Presentation

1 / 21

About This Presentation

Title:

Mikrobioloski preparati

Description:

Mikrobioloski preparati Mikrobioloski preparati mikrobioloske preparate pravimo u cilju posmatranja MO (morfologija, struktura, oblik, raspored celija, pokretljivost ) – PowerPoint PPT presentation

Number of Views:137

Avg rating:3.0/5.0

Slides: 22

Provided by: Nina258

Category:

more less

Transcript and Presenter's Notes

Title: Mikrobioloski preparati

1
Mikrobioloski preparati
2
Mikrobioloski preparati

mikrobioloske preparate pravimo u cilju
posmatranja MO (morfologija, struktura, oblik,
raspored celija, pokretljivost)
Preparat moze da bude
Nativni preparat - posmatranje zivih MO
Fiksirani preparat

3
Nativni preparat

posmatranje zivih MO (pokretljivost)
nedostatak-slaba vidljivost, mogucnost infekcije,
jednokratna upotreba
procedura pripreme
Na predmetnicu se stavlja uzorak (u slucaju tecne
kulture stavlja se kap suspenzije, u slucaju
cvrste podloge u kap vode unosi se materijal iz
kulture)
Pokrovnica
mikroskopiranje

4
Fiksirani preparat

prednosti-visekratna upotreba, ne postoji
mogucnost infekcije, posmatranje strukture,
oblika i morfologije
procedura pripreme
Nanosenje suspezije na predmetnicu i pravljenje
razmaza
Susenje na vazduhu
Fiksiranje (provlacenjem kroz plamen) kako bi
ubili MO i fiksirali ih za predmetnicu
Bojenje preparata
Mikroskopiranje

5
Pravljenje razmaza
6
Fiksiranje preparata
7
Bojenje preparata

Prosto bojenje - koristi se 1 boja
-uocavanje oblika i rasporeda celija
-boje koje se primenjuju kristal violet,
safranin,
metilensko plavo
Slozeno bojenje - koristi se 2 ili vise boje
-uocavanje morfologije i strukture celije
-tipovi slozenog bojenja bojenje po Gramm-u,
bojenje acido-alkoholrezistentnih bakterija
,bojenje kapsula, bojenje endospora , bojenje
nukleinskih kiselina, bojenje flagela

8
Mikrobioloske boje

organska jedinjenja koja boje odredjene celijske
strukture
Prema poreklu dele se na
prirodne safranin (safran), lakmus (lisajevi)
vestacke (anilinske boje)
soli koje prilikom pravljenja vodenih rastvora
disosuju
bazno katjonske boje (kristal violet,
safranin)
kiselo anjonske boje, negativno bojenje (eozin)
neutralno-neutralno crveno

9
Mikrobioloske boje

Svaka boja mora da sadrzi dve grupe
hromoformnu (nosilac karaktera boje, NO2)
auksohromnu (el. disocijacija, OH, NH2)

10
Prosto bojenje

Procedura
Pravljenje razmaza
Susenje (na vazduhu)
Fiksiranje
Bojenje
-kristal violetom (na predmetnicu staviti
filter hartiju i na nju naneti boju, nakon 1-2
min ukloniti filter hartiju, preparat isprati
vodom, osusiti filter hartijom, mikroskopiranje)
-safraninom-postupak je identican, filter
hartiju nije neophodno stavljati na preparat pre
bojenja

11
Procedura prostog bojenja
12
Slozeno bojenje-bojenje po Gramm-u

1884. danski histolog Christian Gram razvio metod
bojenja u cilju diferencijacije bakterijskih
celija i nukleusa eukariotskih celija
diferencijalna slika (identifikacija Gr i Gr-
bakterija)
na osnovu razlike u gradji cel. zida Gr
bakterije boje se ljubicasto, dok se Gr-
bakterije boje crveno
metoda se zasniva na sukcesivnoj primeni
kristal violeta (osnovna boja)
lugola (ucvrscivac) rastvor I u KI
etanola (obezbojivac) 70 ili 95
safranin (suprotna boja)

13
Procedura bojenja po Gramm-u

Nakon pravljenja razmaza, susenja na vazduhu i
fiksiranja pristupa se proceduri bojenja
preparata
bojenje kristal violetom 1-2 min (neophodno je
staviti na preparat filter hartiju)
lugol 1-2 min
ispiranje vodom
ispiranje etanolom 5-10 sec
ispiranje vodom
bojenje safraninom 1-2 min
ispiranje vodom, susenje filter hartijom,
mikroskopiranje

14
Procedura bojenja po Gramm-u
15
Procedura bojenja po Gramm-u
nakon pravljenja razmaza, susenja na vazduhu i
fiksiranja pristupa se proceduri bojenja preparata
inicijalno se boje kristal violetom kako Gr tako
i Gr- bakterije
u reakciji kristal violeta i joda obrazuje se
nerastvorljivi kompleks
Gr bakterije imaju deblji mureinski sloj u
celijskom zidu, nepropustljiv za alkohol i boje
se ljubicasto
Gr- bakterije imaju tanji peptidoglikanski sloj u
celijskom zidu, propustljiv za alkohol koji
rastvara i izvlaci kompleks boje i joda
16
Sporulacija

neke bakterije tokom rasta, procesom sporogeneze
formiraju endospore
rezultat nepovoljnih uslova zivotne sredine,
najcesce u uslovima limitiranosti nutrijentima
(C, N najznacajniji)
karakteristike spora odsustvo metabolicke
aktivnosti, rezistentnost prema fizickim i
hemijskim ciniocima (t, UV, boje, hemijska
jedinjenja, susa) zbog prisustva egzosporijuma
(proteinski omotac)
u povoljnim uslovima procesom germinacije formira
vegetativnu celiju
jedna bakterijska celija najcesce formira samo 1
sporu
strukture koje sluze za prezivljavanje, a ne za
razmnozavanje

17
Sporulacija

rezistentnost na toplotu pripisuje se
dehidriranom stanju i kalcijum dipikolinatu
gradja spore jezgro, zid, korteks, omotac,
egzosporijum
proces sporulacije odvija se u najmanje 7 faza
tipovi sporulacije
1. bacilarni-spora manjeg dijametra od celije
(terminalno, subterminalno ili centralno
postavljena)
2. klostridijalni-spora veceg dijametra od
celije (centralno ili subterminalno
postavljena)
3. plektridijalni-spora veceg dijametra od
celije (terminalno postavljena)

18
Bojenje endospora po Schaeffer-Fulton-u

zbog specificnih fizickih i hemijskih
karakteristika spore tesko usvajaju mikrobioloske
boje (uocavaju se kao bezbojne intracelularne
tvorevine kod prostog i bojenja po Gramm-u)
zagrevanjem preparata zid spore postaje
propustljiv za boju, nepropustljivost zida
omogucava da prilikom obezbojavanja alkohol ne
prodire u sporu i ona ostaje obojena za razliku
od drugih vegetativnih oblika bakterija

19
Bojenje endospora po Schaeffer-Fulton-u

Nakon pravljenja razmaza, susenja na vazduhu i
fiksiranja, pristupa se bojenju preparata
Procedura bojenja
Bojenje malahitno zelenom bojom (5) 2min,
neophodno je koristiti filter hartiju
Zagrevanje predmetnice na plamenu 3-5min (boja
treba da isparava, ali ne da kljuca), kada ispari
veci deo boje doda se nova kolicina
Ukloniti filter hartiju i ispirati vodom
Bojenje safraninom 3-5min
Ispiranje vodom, susenje filter hartijom,
mikroskopiranje
Spore se boje zeleno, a vegetativne celije crveno