Estudo de Bioequival

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• Estudo de Bioequivalência com Metodologias não
  Tradicionais
• ( Métodos Não Cromatográficos)
• Luciano Miranda
• Especialista Científico Imunoensaios
• Abbott Laboratórios do Brasil Ltda

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Tecnologia Axsym FPIA x MEIA
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DESCRIÇÃO DO ANALISADOR
AxSYM
Centro de controle do sistema
Suporte para células matrix
Centro de procesamento
Centro de amostras
Centro de suprimentos
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FÁCIL DE UTILIZAR
AxSYM

• Manutenções
• 15 minutos diarios
• 30 minutos semanal e mensal
• Procedimentos extremamente simples
• Software amigável e atualizado
• Monitor com tela táctil
• Capacidade de urgência real

Fácil de aprender, fácil de operar, plataforma
ideal para aplicações de rotina e investigações
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SISTEMA CENTRAL DE INFORMAÇÃO
AxSYM

• Lista de carregamento de amostras
• Revisão de resultados
• Reporte/seleção de resultados
• Transferencia de resultados por lote ou em tempo
  real
• Imprimir resultados do paciente
• Armazena e arquiva resultados
• Revisão de calibração

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Tecnologias AxSYM

• MEIA Inmunoensaio Enzimático por Micropartículas
• Ensaio desenhado para efetuar determinações de
  analitos de alto peso molecular (moléculas
  grandes)
• Ensaio Não Competitivo
• FPIA Imunoensaio de Polarização Fluorescente
• Esta tecnología foi desenhada para fazer
  determinações de moléculas pequenas.
• Todas as moléculas que se encontram dissolvidas
  em líquido, se encontram em rotação, e sua
  velocidade de rotação depende de seu tamanho
• Ensaio competitivo

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MEIA Tecnologia não competitiva
Os ensaios não competitivos tipo sandwich se
adaptam para formatos de 1 passo, 2 passos e 3
passos
A concentração do analito é diretamente
proporcional ao sinal de fluorescência medida
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FPIA Tecnologia

• Ensaios COMPETITIVOS DE UM PASSO
• Análise competitiva homogênea - Desenhado para
  poder analizar moléculas muito pequenas (como é o
  caso das drogas, alguns esteróides, alguns
  aminoácidos como homocisteína)
• FPIA é uma análise competitiva
• Reativo Contém o mesmo analito a medir marcado
  com Fluoresceína
• A reação se prende a uma solução, e o complexo
  não requer passo de lavado para separar o
  complexo

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FPIA Tecnologia
Ensaios FPIA de dois passos Estão desenhados para
melhorar a sensibilidade dos ensaios Um primeiro
passo se junta com o excesso de Anticorpos e
permite suficiente tempo de incubação Um segundo
passo permite a união do antígeno marcado com as
imunoglobulinas presentes
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FPIA Tecnologia

• FPIA
• O módulo óptico mede as trocas de polarização
  quando são expostos a luz polarizada
• As moléculas com traçador não unidas ao complexo
  não emitem luz polarizada
• As moléculas com traçador unidas ao complexo
  emitem luz polarizada
• Um sinal de luz elevada indica baixo nível de
  analito na amostra do paciente

• FPIA Menos antígeno marcado unido é indicador
  de mais antígeno presente na amostra
• A quantidade de antígeno presente na amostra é
  inversamente proporcional ao sinal de luz
  polarizada registrada

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FPIA Tecnologia
A Fluorescência ocorre devido a um marcador
fluorescente. Este absorve a energia da luz em
490 nm e libera essa energia em um comprimento de
onda mais alto (520 nm) como luz fluorescente.
490 nm
520 nm
xxxxxxxxxxxxxxx
F
Fonte de Luz
Ag ligado Fluoresceína
Detector de Luz em 520 nm
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FPIA Tecnologia
Moléculas grandes rotacionam mais lentamente em
solução do que moléculas pequenas. Este
princípio pode ser usado para distinção entre uma
pequena molécula de antígeno-fluorescente (AgF),
que possui rotação rápida, e os complexos maiores
Ac-AgF, que possuem uma rotação mais lenta em
solução.
490 nm
490 nm
Luz despolarizada
Luz polarizada
Ag ligado Fluoresceína
Complexo Ac-AgF
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Ensaio de 2 passos para evitar efeito Hook

• Formato de dos passos

exceso do analito se lava
Incubação

Lavagem
Fase sólida con Anti-Analito
Analito
Excesso de analito
Complexo Anticorpo-Analito




Lavagem

Sinal de luz


Incubação





Resultado Correto

Conjugado se une ao complexo Anticorpo-Antígeno e
forma sandwich

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Dterminação de Levotiroxina (T4 Total)

• O ensaio AxSYM T4 Total é utilizado como um
  auxiliar na avaliação e monitoramento de estado
  da tireóide
• A tiroxina é um hormônio que contém iodo com
  aproximadamente 777 daltons onde é secretado pela
  glândula da tireóide
• É responsável em nosso organismo em torno de 90
  de iodo ligado à proteína em circulação
• Valores elevados de determinações de T4 Total
  são encontrados em pacientes com
  hipertireoidismo
• Servem para monitoramento de pacientes que fazem
  o tratamento desta patologia.

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AxSYM

• Centro de Amostragem
• Amostra, solução de pré-tratamento e tampão são
  pipetados em uma cavidade de reaction vessel
• Alíquota é transferida para uma das cavidades da
  célula da reação
• A solução de pré-tratamento remove o T4 dos
  sitios de ligação na TBG, pré-albumina e
  albumina
• Esta reaction vessel é transferida para o centro
  de processamento onde são realizadas outras
  etapas com agulha específica para evitar
  contaminação.

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AxSYM

• Centro de Processamento
• Uma segunda alíquota da reação é trasnferida
  para uma das cavidades do traçador ( MUP )
• O analito T4 e o traçador marcado competem pelos
  receptores na molécula do anticorpo
• A intensidade da luz fluorescente polarizada é
  determinada pelo ssistema óptico FPIA.

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Calibradores

• Seis calibradores standard
• Concentração de T4 Total (µg/dl) 0 3 6 12
  18 e 24.

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Controles

• AxSYM T4 Total Controles (Nº 7A55-10)
• 3 frascos (8 mL cada) de Controles AxSYM T4
  Total, contendo tiroxina preparada em soro humano
  processado não reativo para HBsAg, RNA do HIV-1
  ou Antígeno do HIV-1, anti-HCV e
  anti-HIV-1/HIV-2, produzindo as seguintes faixas
  de concentrações
• Concentração de T4 Total
  Intervalo
• Frasco µg/dL
• Baixo 4,5
  3,3 5,7
• Médio 8,0
  6,6 9,4
• Alto 15,0
  12,5 17,5

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Parâmetros do Ensaio

• 1 Long Assay Name (English) Total_T4
• 6 Abbrev Assay Name (English) Total_T4
• 11 Assay Number 245
• 12 Assay Version
• 13 Calibration Version
• 14 Assay File Revision
• 15 Assay Enabled gtON
• 17 Assay Type FPIA
• 18 Standard Cal Reps gt2
• 19 Master Cal Repsgt2
• 20 Cal Adjust Reps 0
• 21 Cal A Concentration 0.00
• 22 Cal B Concentration 3.00
• 23 Cal C Concentration 6.00
• 24 Cal D Concentration 12.00
• 25 Cal E Concentration 18.00
• 26 Cal F Concentration 24.00

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Parâmetros do Ensaio

• 27 Master Calibrator 1 Concentration 0.00
• 28 Master Calibrator 2 Concentration 18.00
• 43 Default Dilution Protocol gtUNDILUTED
• 44 Default Calibration Method gtStandard Cal
• 45 Selected Result Concentration Units gtµg/dL
• 46 Selected Result Decimal Places gt2
• 62 Blank I-Max background intensity
• 63 Min tracer-Min background intensity
• 73 Low Limit-Normal/Therapeutic Range lower limit
  gt 0.00
• 74 High Limit-Normal/Therapeutic Range upper
  limit gt 0.00
• 75 Low Extreme Value gt 0.00
• 76 High Extreme Value gt 0,00
• 91 Low Range Undiluted
• 92 High Range Undiluted

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Sensibilidade

• A sensibilidade do Ensaio AxSYM T4 Total foi
  calculada como sendo de 1,05 µg/dL (n 65
  execuções).
• Essa sensibilidade é definida como a concentração
  a dois desvios-padrão no AxSYM T4 Total
  Calibrador A (0,0 µg/dL) e representa a mais
  baixa concentração determinável de T4 que pode
  ser diferenciada de zero.

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Especificidade

• A especificidade do Ensaio AxSYM T4 Total foi
  determinada através do estudo da reação cruzada
  com a triiodotironina (T3). Ao se determinar a
  razão das concentrações de T4 para T3, que
  corresponde ao ponto médio.

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• Obrigado!
• Luciano.miranda_at_abbott.com