Les Bacillus

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Les Bacillus
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Aspect microscopique
Bacilles Gram
présentant une spore
À lEF mobiles le plus souvent par ciliature
péritriche

• Distinction de trois groupes
• Bacillus à spore ovale non déformante,
• Bacillus à spore ovale déformante,
• Bacillus à spore ronde déformante

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Observation au MEB
Forme végétative bacilles à bouts arrondis
Forme de résistance spore dans un environnement
favorable permet le développement dun nouveau
Bacillus.
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Bacillus anthracis
Observation microscopique

• Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large),
• Gram ,
• Formant une spore ovalaire centrale non
  déformante.
• immobiles
• capsulé

Caractères biochimiques AAF, glucose , non
exigeant, VP (caractère de la classification
des Bacillus), gélatinase , uréase -, maltose ,
saccharose

• Il élabore une toxine comprenant trois facteurs
  agissant en synergie
• facteur I ? oedématogène
• facteur II ? immunogène
• facteur III ?létal

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Les milieux de culture des Bacillus
Gélose à lamidon
Gélose nutritive à 1 damidon de riz ou de pomme
de terre
Ensemencer par une strie centrale à partir dune
suspension bactérienne. Ou en faisant 5 ou 6
dépôts döse sur la gélose
Incuber 24 heures à 37C
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Gélose à loeuf
Gélose trypticase-soja à 10 de jaune dœuf
stérile
Ensemencer par une strie centrale à partir dune
suspension bactérienne. Ou en faisant 5 ou 6
dépôts döse sur la gélose
Incuber 24 heures à 37C
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Milieu TCA
Source N
Composition
Peptone trypsique de caséine 20 g Chlorure de
sodium 5 g Sulfite de sodium 0,5 g Cystine
0,5 g Rouge de phénol 0,017 g Gélose 2,5
g ED qsp 1 L
Sources minérales
Source de C et N
Indicateur de pH
pH 6,8 à 7
Ensemencement

• Régénérer les milieux 20 min au BM à 100C.
• Refroidir les tubes à 45C.
• Incorporer le sucre désiré pour une concentration
  finale de 1 (10g.L-1).
• Solidifier les milieux sous leau froide.
• Ensemencer par piqûre centrale.
• Incuber 24 heures à 37C.

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Milieu de Mossel
Composition
Source N
Extrait de viande 1 g Peptone 10
g Mannitol 10 g Chlorure de sodium 10 g
Rouge de phénol 0,025 g Agar 12 g
ED qsp 1 L
Sources de carbone
Sources minérales
Indicateur de pH
pH 7,1

• Au moment de lemploi, ajouter à 90 mL de milieu
• 10 mL de jaune dœuf dilué au ½ dans de leau
  physiologique
• 1, 2, 5 ou 10 mL de polymyxine à 1 mg/mL
  (Inhibiteur)

Cest un milieu disolement sélectif des
Bacillus de lespèce Bacillus cereus à partir des
aliments ou des selles.
Ensemencement

• Isolement par la technique des quadrants.

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Gélose au lait
Gélose blanche à 2,5 à 3 dagar en solution dans
leau dans laquelle on ajoute la même quantité de
lait stérile.
Ensemencer en faisant 5 ou 6 dépôts döse sur la
gélose
Incuber 24 heures à 37C
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Lecture des milieux
Gélose à lamidon
Recouvrir de lugol la gélose après culture
Pas de coloration noire autour des cultures
absence damidon ? il a été hydrolysé par les
bactéries, test positif
Coloration noire autour des cultures présence
damidon ? test négatif
Lecture directe Éclaircissement du milieu de
culture ? les bactéries ont hydrolysé les
lécithines du jaune dœuf , test positif
Gélose à lœuf
Pas de changement du milieu ? test négatif
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Gélose Mossel
Colonies rouges entourées dun halo opaque et
blanchâtre ? suspicion de Bacillus cereus,
LECITHINASE
Colonies rouges ? pas dutilisation de mannitol
par les bactéries ? MANNITOL -
Présence dun halo hydrolyse des lécithines par
une lécithinase, en choline soluble et
diglycéride insoluble qui précipite dans le
milieu en formant un trouble.
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Gélose au lait
Lecture directe après culture
Halo clair autour de la culture ? hydrolyse de la
caséine, test positif
Pas de modification du milieu autour de la
culture ? test négatif, la caséine nest pas
hydrolysée.
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Correction du TP
1er jour
N impair Bacilles en chaînette Gram
N pair Bacilles en chaînette Gram
présence dune spore déformante dans le bacille.
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2nd jour
N pair présence dune spore centrale ovoïde
déformante
Coloration des spores au vert de Malachite
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Lecture du VF
N impair culture en surface ? AS
1ère orientation bacilles Gram , mobiles,
catalase , VP, non exigeants,(sporogène), AS ?
orientation vers le genre Bacillus.
N pair culture dans tout le tube ? AAF
1ère orientation Bacilles Gram , mobiles, VP,
non exigeants, sporogènes, AAF ? orientation vers
le genre Bacillus.
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Lecture des milieux CTA
N impair
xylose
arabinose
glucose
Virage de lindicateur de pH ? xylose
Virage de lindicateur de pH ? arabinose
Virage de lindicateur de pH ? glucose
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N pair
xylose
arabinose
glucose
Pas de virage de lindicateur de pH ? xylose -
Pas de virage de lindicateur de pH ? arabinose -
Virage de lindicateur de pH ? glucose
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Lecture de la gélose à lamidon (npair et impair)
Pas de coloration autour de la culture ? absence
damidon qui a été hydrolysée par l?-amylase des
Bacillus.
Lecture de la gélose au lait (npair et impair)
Présence dun halo déclaircissement autour de la
culture ? de la caséine a été hydrolysée par les
protéases des Bacillus.
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Lecture de la gélose à lœuf
n pair
Présence dun halo clair autour de la culture ?
les lécithines ont été hydrolysées par la
lécithinase des Bacillus.
n impair
Pas de modification autour de la culture ? les
lécithines nont pas été hydrolysées.
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Lecture de la gélose de Mossel
n pair
Colonie rose ? pas dutilisation du mannitol par
les Bacillus ? MANNITOL -
Présence dun halo clair autour de la culture ?
les protéines du jaune doeuf ont été hydrolysées
par les protéases des Bacillus.
Présence dun halo opaque autour de la culture ?
les lécithines ont été hydrolysées par la
lécithinase des Bacillus.
Suspicion de Bacillus cereus
Identification de lespèce Bacillus présentant
divers enzymes (?-amylase, lécithinase,
protéases), glc , xylose-, arabinose -, culture
caractéristique sur Mossel ? Bacillus cereus.
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Lecture de la gélose de Mossel
n impair
Colonie jaune ? Utilisation du mannitol par les
Bacillus ? MANNITOL
Absence dun halo opaque autour de la culture ?
les lécithines nont pas été hydrolysées par les
Bacillus.
Il sagit dun Bacillus autre que Bacillus cereus
Identification de lespèce Bacillus présentant
divers enzymes (?-amylase, protéases), glc ,
xylose, arabinose ? Bacillus subtilis (tableau
p 132 du livre).