Fernanda Rocha

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HIV X Imunoterapia
Fernanda Rocha Gustavo Garcia Tiago Medina
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HIV- Vírus da Imunodeficiência Humana

• HIV- (human imunodeficiency virus)
• Familia Retroviridae
• Gênero Lentivirus
• HIV-1 (Subtipos de A-J)
• HIV-2
• Sintomas
• Semelhante gripe comum

Partículas do HIV-1 na superfície de macrófagos
infectados
3
(No Transcript)
4
(No Transcript)
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Cinética da infecção pelo HIV
Abaixo de 200 células/ml Muito vulnerável,
tratar imediatamente Entre 200 e 350 células/ml
Vulnerável, deve ser iniciado o tratamento Entre
350 e 500 células/ml Pouco vulnerável, pode
começar a critério médico Acima de 500
Saudável, não precisa começar o tratamento.
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Formas de terapias para o controle da infecção
viral
Nature Biotechnology 25, 1395 - 1402 (2007)/ Ann
Intern Med. 1996 Apr 1124(7)654-63.
7
Sistema Imune versus Infecção Viral
Nature Reviews Immunology 10, 11-23 (January 2010)
8
Propagação do HIV
9
Pontos de intervenção por drogas antivirais
Nature Biotechnology 25, 1395 - 1402 (2007)
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Resposta imune durante infecção viral
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-100µg/kg de IL7 por 9 dias
12
-ATR 100µg/kg de IL7 por 26 dias
13
8dpi 10µg de IL7 ou PBS por 2 semanas
14
-3 ou 10 µg/kg de IL-7 3x/semana por 16 dias
15
(No Transcript)
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IL-7 administration drives T cell-cycle entry and
expansion in HIV-infection
Objetivo Verificar a atividade biológica da IL-7
recombinante humana administrada em pacientes
infectados com HIV.
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A rhIL-7 é tóxica para pacientes infectados com
HIV?
A concentração de 30 mg/kg de rhIL-7 é a máxima
tolerada pelos pacientes.
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Qual o perfil farmacocinético da rhIL-7 após seu
único inóculo subcutâneo?
rhIL-7
Dose única
0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 4, 8, 12, 24, 48 e 72h
plasma
ELISA
Os níveis de IL-7 no plasma aumentaram de modo
dependente da dose. O perfil farmacocinético
torna-se não linear com o aumento da dose.
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Como os linfócitos circulantes se comportam após
administração de rhIL-7?
rhIL-7
Dose única
0, 1, 2, 4, 14, 28 dias
PBMC
Citometria de Fluxo
Uma única dose de IL-7 induziu um aumento no
número de linfócitos T CD4 e CD8 circulantes.
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A administração da IL-7 induziu o aumento
linfocitário de alguma sub-população específica?
rhIL-7
Dose única
0, 1, 2, 4, 14, 28 dias
PBMC
Citometria de Fluxo
O aumento de linfócitos foi predominante entre os
linfócitos T de memória central.
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A administração de rhIL-7 induz proliferação de
linfócitos?
rhIL-7
Dose única
Ki67 ? proteína nuclear expressa em todas as
fases do ciclo celular, exceto na fase de repouso
0, 1, 4, 14, 28 dias
Linfócitos
Proliferação celular
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rhIL-7 induz proliferação e ativação de
linfócitos?
A administração de rhIL-7 induziu os linfócitos T
a entrarem em ciclo celular, exceto a
subpopulação de células T reguladoras.
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A administração de rhIL-7 induz ativação de
linfócitos?
rhIL-7
Dose única
0, 1, 4, 14, 28 dias
Linfócitos
Ativação celular
A administração de rhIL-7 induziu ativação dos
linfócitos T no mesmo período que eles iniciaram
ciclo celular.
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Qual o efeito da rhIL-7 sobre as células T CD8
específicas ao antígeno viral?
rhIL-7
Dose única
Tetrâmero Peptídeos Citomegalovirus Epstein-Ba
rr virus Influenza virus HIV
0, 4, 28 dias
PBMC
Citometria de Fluxo
Uma única dose de rhIL-7 aumentou o recrutamento
não seletivo de células T CD8 de memória
específicas ao antígeno em ciclo celular.
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Qual o efeito da rhIL-7 sobre os linfócitos B?
CD21low
CD21high
Imatura
Transição
rhIL-7
Dose única
0, 4, 28 dias
PBMC
O número de células B circulantes não foi alterado
Citometria de Fluxo
A administração de rhIL-7 induziu a emergência de
células B de imaturas para uma fase de transição.
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3-30mg/kg
A IL-7 possui um perfil favorável para o
desenvolvimento terapêutico para pacientes com
HIV ou outras linfopenias.
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Objetivo Investigar o potencial terapêutico da
IL-7 na infecção crônica pelo LCMV, na tentativa
de reverter a exaustão celular.
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O tratamento com IL-7 aumenta o número de células
no baço durante a infecção com LCMV?
Infecção com o clone 13 - LCMV
C57BL/6
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
Quantificação do número de células no baço em
diferentes dias
Houve aumento de linfócitos T CD4, T CD8 e
linfócitos B após tratamento com IL-7
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O tratamento com IL-7 aumenta o número de células
T CD8 específicas para o LCMV?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
Remoção do baço (Marcação com tetrâmero)
Citometria células TCD8 específicas para
TetGP33, TetGP276 e TetNP396
A IL-7 promoveu o aumento de células T CD8
específicas para o LCMV
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O aumento no número de células também é observado
em outros órgãos?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Fígado
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
29 dia
Citometria para TCD4 e TCD8 totais e específicas
para os tetrâmeros
Histologia do fígado
Após o tratamento com IL-7, houve aumento no
infiltrado de células totais e específicas para o
vírus no fígado, cérebro, pulmões e rins
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O aumento no número de células obtidas após o
tratamento com IL-7 se traduz em ganho funcional?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
29 dia
Citometria células TCD4 e TCD8 específicas para
o vírus
As células T CD4 e TCD8 expandidas pela IL-7 são
funcionais.
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... Células T de camundongos infectados com o
clone 13 de LCMV possuem altos níveis de PD-1
(Barber et al., 2006).
Os níveis de PD-1 nas células T estão diminuídos
após o tratamento com IL-7?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
29 dia
FACS - Expressão de PD-1 nas células TCD4 e TCD8
O tratamento com IL-7 diminuiu a expressão de
PD-1 nas células T CD4 e T CD8
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Camundongos tratados com IL-7 eliminam
eficientemente o vírus?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
Titulação viral em vários dias Contagem de
placa viral
A IL-7 facilitou a eliminação viral dos
reservatórios crônicos (baço, fígado, rins e
cérebro)
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Quais citocinas estão elevadas durante o
tratamento com IL-7?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
Dosagem de citocinas séricas - ELISA
Citocinas do padrão Th1 e Th17 estão aumentadas
durante o tratamento com IL-7. IL-10 aumenta após
a eliminação do vírus
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O tratamento com IL-7 induz dano tecidual
decorrente da resposta imune inflamatória?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
Dosagem de AST e ALT no soro
O tratamento com IL-7 não aumenta os níveis
séricos das enzimas indicativas de dano hepático
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A produção de IL-22 está aumentada durante o
tratamento com IL-7?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
29 dia
Dosagem de IL-22 no soro - ELISA
O tratamento com IL-7 também aumenta a produção
sérica de IL-22
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O dano hepático limitado foi consequência do
efeito citoprotetor da IL-22?
A IL-22 produzida durante o tratamento com IL-7
impede os danos celulares no fígado
38
O tratamento com IL-7 altera o número de células
T reguladoras?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas
FACS Tregs no baço e no fígado
O número absoluto de Tregs aumenta após o
tratamento com IL-7, mas a frequência está
diminuída em relação ao número total de células T
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A depleção de Tregs durante o tratamento com IL-7
altera o número de células T totais e específicas
para o LCMV?
A depleção de Tregs aumentou o número de células
T CD4 e T CD8 totais e específicas para o vírus.
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O aumento de células T em animais depletados de
Tregs está relacionado com aumento de IL-2?
Dosagem de citocinas no soro
A maior produção de IL-2 induzida pelo tratamento
com IL-7 promove o aumento no número de células T.
41
A depleção de Tregs durante o tratamento com IL-7
provocou danos hepáticos?
Dosagem de AST no soro
A depleção de células T reguladoras não provocou
danos hepáticos
42
Socs3 é expresso durante a infecção crônica por
LCMV?
Infecção crônica com o clone 13 - LCMV
Infecção aguda - cepa Armstrong de LCMV
OU
Sorting das células T
Western Blotting Expressão de Socs3
Socs3 é altamente expresso na infecção crônica
causada por LCMV
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O tratamento com IL-7 inibe a expressão de Socs3
durante a infecção crônica por LCMV?
Infecção com o clone 13 - LCMV
8 dia
Tratamento com IL-7 ou PBS por 5 dias
Sorting das células T
Western Blotting Expressão de Socs3
A expressão de Socs3 nas células T foi inibida
após tratamento com IL-7
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Socs3 é o principal inibidor da resposta imune
contra a infecção crônica por LCMV?
Infecção com o clone 13 - LCMV
Infecção com o clone 13 - LCMV
Socs3wt/wtLck-Cre-
Socs3fl/flLck-Cre
Remoção do baço
FACS Células TCD8 específicas para NP396, GP276
e GP33
Socs3 inibe a resposta imune específica contra o
LCMV
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As células T permanecem funcionais após a deleção
condicional de Socs3?
Infecção com o clone 13 - LCMV
Infecção com o clone 13 - LCMV
Socs3wt/wtLck-Cre-
Socs3fl/flLck-Cre
Remoção do baço
FACS Células TCD4 e TCD8 produtoras de citocinas
As células T CD4 e TCD8 continuam funcionais na
ausência de Socs3
46
O vírus é eliminado de órgãos reservatórios na
ausência de Socs3?
A deficiência de Socs3 propiciou a eliminação
viral de vários órgãos reservatórios
47
Conclusão