Tests pr

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Tests pré-IMSIQuelles indications? Quelles
conclusions?

• Martine COHEN-BACRIE
• Stéphanie BELLOC
• Paul COHEN-BACRIE
• Isabelle LICHTBLAU
• Anne Marie JUNCA
• Martine DUMONT

SAMPPIL 14 Juin 2011
Laboratoire dEylau . Paris . Neuilly . Cherbourg
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Définitions

• IMSI Intra Cytoplasmic Morphological Sperm
  Injection
• MSOME Motile Sperm Organelle Morphology
  Examination
• UMS ultra morphologie des spermatozoïdes
• TPM test pré IMSI

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Principe de lIMSI

• Système optique permettant dobserver au
  grossissement x 6600 les SPZ mobiles
• Système optique avec contraste interférentiel de
  Nomarski objectif x100 à immersion
• ? sélection des SPZ mobiles typiques sans
  vacuoles en vue de linjection

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Principe du test pré-IMSI (UMS, MSOME)

• Examen diagnostique x 6600 de lultra morphologie
  des SPZ mobiles après migration en GPS
• Observation en 3D et en temps réel des SPZ
  mobiles
• Absence danomalies de la base et de la pièce
  intermédiaire
• Taille/forme de la tête
• Vacuoles (tête)

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Classification

• Observation au fort grossissement des SPZ mobiles
  x 6600
• Observation (si possible) de 200 SPZ mobiles en
  excluant les SPZ ayant des anomalies de la PI et
  du flagelle
• Analyse de la tête du SPZ (critères de Bartoov,
  2002)
• Classification en 4 types
• Type 1 Typiques sans vacuole
• Type 2 Typiques avec vacuoles
• Type 3 Atypiques sans vacuole
• Type 4 Atypiques avec vacuoles

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 TOP  SPERMATOZOIDE 

• Critères de Bartoov (2002)
• TETE
• Forme ovale, lisse et symétrique
• Taille 4,75 0,28µm sur 3,28 0,20 µm
• Vacuoles zéro ou petite vacuole lt 4 surface
  nucléaire
• Absence danomalies de la PI ou de la pièce
  principale du flagelle

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Spermatozoïdes de 2nd choix
Plusieurs Vacuoles ou une grande vacuole
nucléaire
7
7
7
8
N. Sermondade, C. SiferGynécologie Obstétrique
Fertilité 39 (2011) 309314
9
N. Sermondade, C. SiferGynécologie Obstétrique
Fertilité 39 (2011) 309314
10
x6600
x400
X400
X6600
Spermatozoïde de morphologie normale
Données AMP EYLAU
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Têtes spermatiques avec vacuoles de tailles
différentes
Données AMP EYLAU
12
données AMP EYLAU
X 400
X 6600
13
Spermatozoïdes de morphologie normale
données AMP EYLAU
14
1
Tri au fort grossissement x6600 - AMP EYLAU
1
1
2
2
X 400
2
X 6600
Données AMP EYLAU
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Interprétation du TPM

• Nombre suffisant de SPZ mobiles après migration
  pour pouvoir faire lanalyse
• Si moins de 10 de SPZ typiques sans vacuoles ?
  indication dIMSI
• Interprétation doit tenir compte du contexte
  clinique masculin et féminin

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Origine et signification des vacuoles

• Bartoov relie ces vacuoles à des anomalies du
  noyau spermatique
• Origine nucléaire? Origine acrosomique? Origine
  mixte?

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La présence de grandes vacuoles saccompagne

• Augmentation de la fragmentation de l ADN
  (Franco et al,2008 Garolla et al,2008)
• Augmentation de la décondensation de lADN
  (Franco et al,2008 Garolla et al,2008Perdrix et
  al,2011,Boitrelle et al, FFER 2010 )
• Association avec nombreuses anomalies de
  lacrosome (Perdrix et al, 2011)

17
17
18

• Les vacuoles spermatiques sont majoritairement
  dorigine acrosomale
• O Kacem, C Sifer, V Barraud-Lange, B Ducot, et
  al.
• RBM Online 2010 Vol. 20, Issue 1, Pages 132-137
• Le choix en MSOME de SPZ sans vacuoles semble
  correspondre majoritairement aux SPZ ayant fait
  leur RA ce qui pourrait constituer une
  explication à lamélioration des résultats de la
  micro-injection par lIMSI
• amélioration qui ne concerne pas les taux de
  fécondation mais la baisse du taux des fausses
  couches

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• Assessment of acrosome and nuclear abnormalities
  in human spermatozoa with large vacuoles
• Perdrix A, Travers A, Chelli MH, Escalier D, Do
  Rego JL, Milazzo JP, Mousset-Siméon N, Macé B,
  Rives N
• Hum Reprod. 2011 Jan26(1)47-58
• Vacuoles exclusivement nucléaires (observations
  en MET et en microscopie confocale)
• Patients tératozoospermiques augmentation des
  aneuploïdies et de la décondensation de la
  chromatine des SPZ avec de larges vacuoles

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• Large nuclear vacuoles are indicative of abnormal
  chromatin packaging in human spermatozoa
• Franco Jr JG, Mauri AL, Petersen CG, Massaro FC,
  Silva LF, Felipe V, Cavagna M, Pontes A, Baruffi
  RL, Oliveira JB, Vagnini LD
• Int J Androl. 2011 Apr 28

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• Large human sperm vacuoles observed in motile
  spermatozoa under high magnification nuclear
  thumbprints linked to failure of chromatin
  condensation
• Boitrelle F, Ferfouri F, Petit JM, Segretain D,
  Tourain C, Bergere M, Bailly M, Vialard F, Albert
  M, Selva J
• Hum Reprod. 2011 May 2

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Systèmes de réparation

• Chromatin Structure
• H2AFX (H2AX) High H2A histone family,
  phosphorylated after DNA damage,
• DNA damage signalling
• CHAF1A (CAF1) High Chromatin assembly in DNA
  replication and DNA repair

Yves Menezo 2011
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Statistiques 2010

• 17000 spermogrammes spermocytogrammes
• 12000 spermocultures
• 10000 T M S
• 900 tests pré IMSI (9 des TMS)
• 410 avec lt10 SPZ type1
• 6000 IIU
• 4250 FIV
• 2700 ICSI
• 750 IMSI (27 des ICSI)

Données AMP Eylau
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Choix des spermatozoïdes pour lIMSI
Etude collaborative (8 laboratoires) Synthèse
Antoine Béclère N Frydman, L Hesters Bichat
L Delaroche Bondy C Sifer Brest Pasteur J P
Velez Drouot G Cassuto ZTP J Pfeffer Eylau
P M Cohen-Bacrie S Belloc I Lichtblau M Dumont
AM Junca C Thieulin
Statistiques J De Mouzon
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Matériel et méthodes

• Etape 1
• Distribution de 118 photos de spermatozoïdes par
  2 membres du groupe
• Analyse des réponses de 28 biologistes sur le
  choix ou non de chaque spermatozoïde pour une
  IMSI (classification de chaque laboratoire)
• Etape 2
• Analyse collégiale des spermatozoïdes pour
  lesquels le taux de concordance pour le choix
  (retenu pour lIMSI ou non) est lt 80 entre les
  biologistes
• Conclusions du groupe de travail
• Etape 3
• Validation des conclusions par lensemble du
  groupe (en cours)

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Concordance entre les biologistes
Taux de concordance Spz concernés Spz concernés Choix pour lIMSI Choix pour lIMSI
N Non retenu Retenu Retenu
90 67 56,5 56,5 66 1 1
80-89 11 9,3 9,3 10 1 1
70-79 21 15,7 15,7 15 6 6
60-69 10 14,3 14,3 6 4 4
50-59 9 15,7 15,7 6 3 3
Total 118 100 100 103 15 15
PLUS DE 80 DE CONCORDANCE POUR 80 SPZ
OBSERVES (70) et NON RETENUS pour IMSI
27
(No Transcript)
28
(No Transcript)
29
Photos jerome pfeffer
30
Photo guy cassuto Fert ster 2008
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Etape 2

• Analyse des 40 SPZ pour lesquels la concordance
  des réponses lt80
• AU FINAL
• 19 SPZ finalement retenus pour lIMSI
• 21 rejetés par le groupe pour
• Surface vacuolaire gt 4 17 SPZ
• Seule 11
• Association avec anomalie morphologique 6
• Anomalie morphologique seule 4 SPZ

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Indications

• Pas de consensus, aucune publication ne permet de
  répondre à la question des indications
• En pratique, test pré-IMSI utile dans
• Infertilité idiopathique
• Après 2 échecs dimplantation en FIV/ICSI
• Tératozoospermie lt 5 (David modifié)
• Fragmentation de lADN gt 30 (TUNEL)
• Décondensation de la chromatine gt 30 (Aniline
  Blue)
• FCS à répétition
• SPZ type 1 lt 10 argument pour orienter les
  couples vers lIMSI

33
Taux de fécondation en IMSI et ICSISelon les
antécédents dAMP
33
34
Conclusions

• Pas de classifications consensuelles
• Nécessité dune harmonisation inter-laboratoire
  des grilles de lecture et du seuil
• ? Groupe de travail inter-laboratoire
• Des classifications différentes mais des
  résultats AMP modifiés par les types les plus
  péjoratifs (vacuoles)
• La signification des vacuoles nest pas
  totalement élucidée
• Nécessité détudes prospectives pour valider les
  indications
• Le test permet une orientation vers lIMSI qui ne
  peut être réalisée pour toutes les ICSI

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Merci de votre attention

• Remerciements à toute léquipe de techniciens et
  biologistes du centre AMP Eylau
• Et à tous les cliniciens correspondants