Presentazione di PowerPoint

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REPLICAZIONE DEL DNA
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Replicazione semi-conservativa
3
Dimostrazione della replicazione
semi-conservativa
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La centrifugazione a 100.000 x g per 50-60 min
genera un gradiente di CsCl ed il bandeggiamento
del DNA
5
(No Transcript)
6
(No Transcript)
7
Biologia molecolare della replicazione del DNA
nei procarioti
8
Replicazione del DNA
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Arthur Kornberg Scoprì la polimerasi I ed il
meccanismo della sintesi del DNA, lavorando con
Escherichia coli

• Sono necessari quattro componenti
• dNTP dATP, dTTP, dGTP, dCTP
• (deossribonucleoside 5-trifosfato)
• (zucchero-base 3 fosfati)
• 2. DNA stampo
• DNA polimerasi I (chiamata anche enzima di
  Kornberg)
• (DNA polimerasi II e III scoperte
  successivamente)
• 4. Mg 2 (ottimizza lattività della DNA
  polimerasi)

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DNA polimerasi
Particolarità funzionali della DNA polimerasi
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Caratteristiche principali della reazione di
sintesi del DNA
DNA polimerasi III catalizza la formazione di un
legame fosfodiestere tra il 3-OH del
deossiribosio dellultimo nucleotide ed il
5-fosfato del dNTP

• Lenergia per la reazione deriva dal rilascio di
  due dei tre fosfati.
• La DNA polimerasi III trova il corretto dNTP
  complementare in ogni passo del processo di
  allungamento.
• Velocità 800 dNTP/secondo.
• Direzione della sintesi 5 ? 3.

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Allungamento del DNA
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Azione della DNA polimerasi III
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• Origine della replicazione
• Lunità di replicazione si chiama replicone e
  possiede una propria origine di replicazione
• Il sito dove inizia la replicazione è chiamato
  forcella di replicazione.
• La replicazione può essere unidirezionale o, più
  frequentemente, bidirezionale.

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• Replicazione semidiscontinua
• I due filamenti di DNA hanno una polarità opposta
  5 ? 3 e 3 ? 5.
• La DNA polimerasi sintetizza DNA solo nella
  direzione 5 ? 3.
• Il DNA è replicato sui due filamenti stampo in
  direzioni opposte
• Filamento leader sintetizzato da 5 a 3 nella
  direzione del movimento della forcella di
  replicazione, la replicazione è continua e
  richiede un solo RNA dinnesco
• Filamento tardivo sintetizzato da 5 a 3 nella
  direzione opposta del movimento della forcella di
  replicazione, la replicazione è discontinua e
  richiede molti RNA dinnesco

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Il filamento leader si replica in modo continuo
Il filamento tardivo si replica in modo
discontinuo, un enzima unisce i tratti di DNA
(frammenti di Okazaki)