PRCTICO N 1

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PRÁCTICO N 1

Técnicas para el estudio de microorganismos del
suelo
Objetivo Conocer las técnicas básicas para el
análisis microbiológico del suelo

• Normas prácticas para el muestreo de suelo
• Técnicas para el cultivo de microorganismos
• Técnicas de observación al microscopio
• Métodos de aislamiento y conservación

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Normas prácticas para el muestreo de suelo

• Diseño de muestreo
• Cantidad de muestras topografía y heterogeneidad
  del lote
• Forma de muestreo cultivo, sistema de labranza
• Profundidad 0 20 cm
• Acondicionamiento de las muestras
• Preparación de las muestras en laboratorio

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Cantidad de muestras topografía y
heterogeneidad del lote
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Forma de muestreo cultivo y sistema de labranza
Siembra directa
Labranza convencional
Rastrojo de maíz
Rastrojo de soja
Suelo laboreado
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Forma de muestreo profundidad
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Acondicionamiento de las submuestras
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Preparación de las muestras en laboratorio
Oreado
Mínimo 24 hs.
Tamizado
Embolsado y Rotulado
Conservación
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Técnicas para el cultivo de microorganismos

• Requerimientos para el cultivo de microorganismos
  en laboratorio
• Condiciones de asepsia esterilización
• Medios de cultivos
• Condiciones ambientales

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Condiciones de asepsia esterilización

• Esterilización eliminar todos los organismos
  vivos
• Métodos de esterilización
• Calor húmedo y seco
• Radiación
• Filtración
• Productos químicos

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Calor húmedo Autoclave
Combinación de calor, presión y humedad Para
sustancias acuosas Temperatura de esterilización
121C - 20 minutos
A gas con regulación manual
Eléctrica con regulación automática
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Calor seco Horno de esterilización
Para materiales estables al calor (vidrio,
metal, porcelana etc.)
Vista exterior
Temperatura de esterilización 160 C Tiempo 2
hs
Vista interior
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Otros métodos de esterilización
Radiación UV superficies, aire y agua
Filtración soluciones lábiles
Filtro

• Agua Oxigenada
• Alcohol etílico
• Hipoclorito
• Formol
• Bicloruro de mercurio

Productos químicos mesada, manos, tapones, etc.
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Medios de cultivos

• Definición mezcla balanceada de requerimientos
  nutritivos para el crecimiento de microorganismos
• Tipos
• Generales
• Selectivos
• Composición química fuente de carbono, fuente
  de nitrógeno, fuente de energía, base mineral y
  factores de crecimiento
• Características líquidos o sólidos agentes
  solidificantes

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Composición de medios de cultivos
Medio selectivo Fijadores de Nitrógeno
Medio general
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Preparación de medios de cultivo
Pesar componentes sólidos
encender
colocar el componente a pesar
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Disolver con agua destilada hidratar
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Regular pH pHmetro
soluciones reguladoras
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Preparación de medio sólido
medio líquido
medio agarizado
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Fraccionar y acondicionar para esterilizar
Fraccionamiento de medio líquido
Fraccionamiento de medio sólido (en caliente)
Acondicionado para esterilizar
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Esterilizar en autoclave
Medios en Pico de flauta
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Visualización de microorganismos porta objeto
enterrado
Suelo en estudio
Riego
Portaobjeto enterrado
Incubación
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Cultivo de microorganismos del suelo en medio
líquido
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Tamaño del lote
0-20 cm. con rastrojos
Cantidad de muestras
Profundidad
Topografía
Composición
n submuestras
Guardar en conservadora
Una muestra
Preparación de muestras en laboratorio
Oreado
Tamizado
Envasado y Rotulado
Conservación en heladera
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Práctico 2
Práctico 1
Aislamiento
Medio de cultivo
Observación

• Esterilización
• Autoclave - horno
• Radiación
• Filtración
• Productos químicos

• Composición química
• Base mineral
• Fuente de carbono
• Fuente de energía
• Agua

Preparación de medios

• Líquidos
• Pesar drogas
• Disolver con agua destilada
• Regular pH
• Fraccionar

• Sólidos
• Pesar drogas
• Disolver con agua destilada
• Regular pH
• Agarizar
• Fundir
• Fraccionar

Esterilización en autoclave
Siembra de suelo
Incubación
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Actividades

• Preparación de muestras de suelo en laboratorio
  tamizar, embolsar y rotular.
• Visualización de microorganismos de suelo
  enterrar un portaobjeto.
• Cultivo de microorganismos de suelo colocar una
  alícuota de suelo en medios general y selectivo
  enterrar un portaobjeto.
• Visita al Laboratorio de Microbiología Agrícola
  F.C.A