Quimotripsina

1
(No Transcript)
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4
Quimotripsina
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8
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9
COMPLEMENTARIDADE ENTRE DIIDROFOLATO REDUTASE ES
SEUS SUBSTRATOS
Amarelo tetraidrofolato Vermelho NADP
10
BASTÃO-ASE
DGM contribuido pelas interações entra e enzima e
o estado de transição
11
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(No Transcript)
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(No Transcript)
15
(No Transcript)
16
Cinêtica Enzimática Michaelis-Menten
17
k1 kcat E S ?? ES ? E
P k-1 V kcatES Assumir que
dES/dt 0 k1ES k-1ES kcatES
0 Etot E ES Vmax kcat x Etot KM
k-1/k1
18
Vo VmaxS kcatxEtotxS KmS
KmS
19
(No Transcript)
20
Diagrama Lineweaver-Burk (Duplo-reciprocal)
21
(No Transcript)
22
(No Transcript)
23
(No Transcript)
24
INIBIÇÃO COMPETITIVO substrato e inibidor
competem para o mesmo sítio
kcat
Km
a 1 I/KI
Vo VmaxS/(aKm S)
25
a 1 I/KI
Vo VmaxS/(Km aS) Quando SgtgtKm, Vo
Vmax/a
INIBIÇÃO NÃO-COMPETITIVO substrato e inibidor
competem para sítios diferentes inibidor
somente liga ao complexo ES
26
Vo VmaxS/(aKm aS)
27
Diagrama Lineweaver-Burk para inibição competitiva
a 1 I/KI
28
Diagrama Lineweaver-Burk para inibição
não-competitiva
29
Diagrama Lineweaver-Burk para inibição mista
30
ativa inativa
EH ? E H pKa 3,5
31
inativa ativa
inativa
EH22 ? EH H ? E 2H pKa 6,0
pKa 9,0
32
Quimotripsina
33
Quimotripsina
vermelha ser195, asp 102, his57
34
Quimotripsina
vermelha ser195, asp 102, his57
35
Sítio ativo de quimotripsina
36
(No Transcript)
37
(No Transcript)
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40
(No Transcript)
41
(No Transcript)
42
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(No Transcript)
45
HEXOQUINASE
Sem glicose Com glicose
46
(No Transcript)
47
Inibição Feedback
48
Alosteria curva sigmoidal de uma enzima
homotrópica o substrato age como uma moduladora
positiva
49
Alosteria curvas sigmais de uma enzima em
que moduladoras positivas e negativas modificam
K0.5 sem modificar Vmax.
50
Alosteria curvas sigmoidais de uma enzima em
que moduladoras positivas e negativas modificam
Vmax Sem modificar K0.5 (menos comum).
51
(No Transcript)
52
(No Transcript)
53
(No Transcript)
54
Estrutura da mioglobina (153 aminoácidos, MW
16700 Da)
55
Estrutura básica das Porfirinas
4 anels de pirrole conectados por pontes de C-
56
HEME Prorporfirina IX
57
HEME
58
His próximal
59
P L ? PL Ka PL/PL 1/Kd q
PL/PLP
60
P L ?? PL Ka PL/PL 1/Kd q
PL/PLP Ka constante de associação, Kd
constante de dissociação 1/Ka Fração de
sítios ocupados q q PL/PLP q
KaPL/KaPLP q KaL/KaL1 q
L/L1/Ka q L/LKd equação tipo x
y/(yz) descreve uma hipérbola Quando
LKd1/Ka, q 0,5 (50 dos sítios
ocupados)
61
Curva de ligação de oxigênio a mioglobina P50
0,26 kPa

• fração dos sítios ocupados com ligantes
• L/LKd
• 02/02 02 50
• p02/p02P50

62
Ligação de oxigênio a heme
63
Ligação de monôxido de carbono a heme
64
Aminoácidos chaves de mioglobina que interagem
com heme e O2
His distal
His proximal
65
(No Transcript)
66
Conservado em todas as globinas Conservado
nas três estruturas
67
Interações entre subunidades em hemoglobina
Contatos a1-b1 mudam pouco quando O2 liga
Contatos a1-b2
68
Contatos a1-b2 no estado T
69
INTERAÇÕES IÔNICAS NO ESTADO T da Hb
70
(No Transcript)
71
(No Transcript)
72
Ligação de oxigênio a hemoglobina
Curva hiperbólica de Ligação de baixa afinidade
Curva sigmoidal de Ligação cooperativa
Curva hiperbólica de Ligação de baixa afinidade
73
Dois modelos moleculares para explicar ligação
cooperativa
T
R
Modelo sequencial
Modelo MWC Monod, Wyman Changeux (simultânea)
74
Efeito Bohr (Christian, pai e médico não Niels,
filho e físico)
Hb O2 ? HbO2 HHb O2 ? HbO2 H Logo nos
tecidos internos onde H é alto, H liga a Hb e
causa a dissociação de O2. H e O2 ligam em
sítios diferentes -O2 liga no Fe do grupo
heme -H liga em vários grupos de aminoácidos que
estabilizam o estado T (baixa afinidade para
O2) ie His146() ..... Asp94(-)
Sangue no pulmão
Sangue nos tecidos internos
75
CO2 H2N----(a-amino da cadeia) ? H
-O2C-NH----
terminal carbamino
Contribui para o efeito Bohr
BPG alta em hemácias HbO2 BPG ? HbBPG O2
76
HbO2 BPG ? HbBPG O2
No nível de mar, a diferença entre pO2 nos
pulmões e nos tecidos permite o sangue soltar
40 da sua capacidade de O2 nos tecidos. Em
altitudes altas, o forneciemnto de O2 diminuiria
para 30 de capacidade sanguina.... Para
compensar, a BPGaumenta e a afinidade da Hb
para O2 cai, resultando no aumento de fornecimeno
de O2 para os tecidos até 40 de sua capacidade.

77
O estado T da Hb tem um sítio para BPG (cargas
positivos em azul)
78
O estado R da Hb perdeu seu sítio para BPG
79
Hemácias normais
80
Variação de formas de hemácias em anemia
falsiforme
81
Anemia falsiforme uma doença molecular Glu6 ?
Val na cadeia beta
82
Glu6 ? Val na cadeia beta resulta num superfície
hidrofóbico que promove associação entre
moléculas para formar filamentos e fibras