CELLULE STAMINALI MESENCHIMALI

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CELLULE STAMINALI MESENCHIMALI
Cellule staminali adulte multipotenti
Fonti delle MSCs
Capacità di aderire a superfici di plastica
Capacità di differenziare Adipociti osteociti
cellule muscolari Altroneuroni, epatociti

• Espressione di markers specifici
• POSITIVI CD90 CD73 CD105 CD44 CD29 HLA-ABC
• NEGATIVI CD34 CD45 CD14 HLA-DR

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FONTI DI MSCs
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IL SANGUE CORDONALE COME FONTE DI MSCs

• tessuto di scarto
• presenza di staminali mesenchimali ed
  emopoietiche
• MSCs da UCB hanno le stesse caratteristiche di
  quelle isolate da midollo
• uso autologo ed allogenico
• dibattito tra ricercatori sullaccessibilità
  alle MSCs difficoltà disolamento
• meno MSCs rispetto midollo e Whartons jelly

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B.A.M.C.O. Banca Autologa-Allogenica Mantovana
del Cordone Ombelicale
Obiettivo tutelare sempre il diritto della
madre a conservare il proprio sangue del cordone
ombelicale per uso autologo e al tempo stesso
garantire la possibilità di donare tale sangue
per uso allogenico
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Arrivo sacca sangue cordonale

• Calcolo del volume netto di sangue cordonale
  raccolto
• Peso lordo sacca peso sacca ( tara 28 g)
  peso netto sacca
• Peso netto sacca / peso specifico sangue (1.05
  g/ml) volume sacca con anticoagulante
• Volume sacca con anticoagulante volume
  anticoagulante (20 ml)
• volume netto sangue cordonale

Aliquota per la ricerca attenzione a NON
pregiudicare mai la conservazione del sangue
raccolto sia per uso autologo che allogenico!
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Prelievo 0,5 ml per emocromo e analisi
multiparametrica al citofluorimetro
CENTRIFUGAZIONE IN GRADIENTE DI DENSITÀ CON
HISTOPAQUE-1007
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Cellule mononucleate
SELEZIONE NEGATIVA DELLE CELLULE
Utilizzo di biglie paramagnetiche rivestite di Ab
CD34. Selezione negativa delle MSCs in quanto
tali cellule non esprimono CD34.
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COLTURE CELLULARI
IMDM 10FBS bFGF 10ng/ml ITS 50 mg/ml
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I dati forniti dallemocromo e dallanalisi
multiparametrica al citofluorimetro sono stati
utilizzati per calcolare la di MSCs sulla
frazione di cellule mononucleate nel sangue e
dopo estrazione con Histopaque. La procedura di
gating applicata è stata
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RISULTATI
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RISULTATI
Efficienza di estrazione (42,19 16,37)
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RISULTATI
Allaumentare del volume di sangue cordonale
raccolto aumenta la quantità di MSCs-like
presenti. In proporzione la resa destrazione con
Histopaque rimane la stessa.
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RISULTATI
La percentuale di MSCs-like diminuisce nel sangue
intero con laumentare del tempo trascorso tra
raccolta e lavorazione. I tempi migliori per
lestrazione con Histopaque sono tra 5 e 15 h.
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RISULTATI
Si ottengono colture dal 13 dei cordoni
analizzati, percentuale che sale al 33,3 se si
considerano solo i cordoni di peso gt 90g.
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CONCLUSIONI

• Lanalisi multiparametrica al citofluorimetro
  dimostra la presenza di cellule MSCs-like sia nel
  sangue cordonale che nella frazione di cellule
  mononucleate da esso ottenute.
• Con lestrazione mediante centrifugazione in
  gradiente di densità non si perdono MSCs-like,
  anzi in alcuni casi aumenta la .
• Allaumentare del volume di sangue raccolto
  aumenta la di MSCs-like.
• Si ottengono colonie di MSCs-like solo da
  cordoni molto abbondanti, generalizzando con
  volume gt 40 ml.
• I tempi migliori per la lavorazione del sangue
  cordonale sono tra 5 e 12 ore MA sono state
  ottenute colonie di MSCs-like da un cordone
  lavorato di 24 h dopo la raccolta.?
• La coltura di MSCs-like è difficoltosa.

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Cautela nel generalizzare i nostri risultati
perché ottenuti su un ristretto numero di cordoni
e su volumi ridotti in alcuni casi Infatti
sempre, in ogni caso, sono stati tutelati i
diritti della madre e del neonato e la
possibilità di donare il sangue cordonale per uso
allogenico.
Probabilmente se ci fosse la possibilità di
lavorare tutto il sangue di una sacca idonea al
congelamento la di cordoni ombelicali da cui si
ottengono colonie di cellule MSCs-like
aumenterebbe.
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