Tecniche di preparazione e conservazione degli emocomponenti

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Tecniche di preparazione e conservazione degli
emocomponenti

• Bologna, 11/3/2006

Franco Verlicchi - Centro Trasfusionale
Faenza/Lugo AUSL Ravenna
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Definizioni

• prodotti del sangue
• gli emocomponenti e gli emoderivati
• emocomponenti
• i prodotti ricavati dal frazionamento del
  sangue con mezzi fisici semplici o con aferesi
• emoderivati
• i farmaci plasmaderivati ovvero le specialità
  medicinali estratte dallemocomponente plasma
  mediante processo di lavorazione industriale

Legge 21/10/2005, n 219 Nuova disciplina delle
attività trasfusionali e della produzione
nazionale degli emoderivati
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emocomponenti i prodotti ricavati dal
frazionamento del sangue con mezzi fisici
semplici o con aferesi
Sangue intero
Eritrociti
Leucociti
Piastrine
Plasma
Emocomponenti di 2 livello

• Terapia trasfusionale mirata
• Conservazione idonea di ciascun componente

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(No Transcript)
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Centrifugazione filtrazione
Eritrociti
Leucociti
Piastrine
Plasma

• Quantità raccolta
• Emocomponenti non ottenibili da unità di sangue
  intero

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(No Transcript)
7
(No Transcript)
8
(No Transcript)
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Plasma
Eritrociti
Leucociti
Plasma
Centrifugazione
Piastrine
Piastrine
2000 rpm 5-8 min
Centrifugazione
3500 rpm 15-20 min
Leucociti
Eritrociti
Leucociti
Plasma
Centrifugazione
Piastrine
Piastrine
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Eritrociti

• Emazie concentrate
• Emazie concentrate private del buffy coat
• Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni
  additive
• Emazie concentrate private del buffy-coat e
  risospese in soluzioni additive
• Emazie lavate
• Emazie leucodeplete
• Emazie irradiate
• Emazie congelate
• Concentrato di emazie da aferesi

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Emazie concentrate
2-6 C 35 gg
Emazie concentrate private del buffy-coat
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Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni
additive
2-6 C 42 gg
Emazie concentrate private del buffy-coat e
risospese in soluzioni additive
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Emazie lavate
PNH deficit IgA

• Lavaggi con soluzione isotonica a 4 C
• Proteine lt 0.3 g/unità

2-6 C
Conservare il minor tempo possibile (lt24 h se
apertura del sistema)
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Emazie leucodeplete
Emazie irradiate

• 25-50 Gy

• Filtrazione - Leucociti lt 1x106

2-6 C
Stessa durata del prodotto corrispondente (lt24 h
se apertura del sistema)
Irradiazione entro 14 gg dal prelievo Trasfusione
entro 28 gg dal prelievo
Trasfusione entro 48 ore dallirradiazione
in neonati o iperpotassemia
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Emazie leucodeplete

• Riduzione alloimmunizzazione
• Riduzione infezioni post-operatorie
• Riduzione reazioni trasfusionali non-emolitiche
• Riduzione GVHD
• Riduzione trasmissione patogeni (CMV, CJD)
• Riduzione mortalità post-operatoria
  (cardio-chirurgia)
• Riduzione ospedalizzazione

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Emazie congelate
Glicerolo 15-20
Glicerolo 40
Entro 7 gg dalla raccolta
-60 -80 C
Azoto liquido (-150 C)
Fino a 10 anni
Scongelamento
Deglicerolizzazione
Utilizzare nel più breve tempo possibile
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Leucociti

• Concentrato granulocitario da aferesi
• Cellule staminali emopoietiche periferiche

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Concentrato granulocitario da aferesi
Authors conclusions Currently there is
inconclusive evidence from RCTs to support or
refute the generalized use of granulocyte
transfusion therapy in the most common
neutropenic patient population
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Concentrato granulocitario da aferesi

• Mobilizzazione leucocitaria nel donatore
  (Steroidi o G-CSF)

Conservazione a 20-24C per 24 h Utilizzare nel
più breve tempo possibile

• Granulociti da sangue intero (buffy-coat)
• Utilizzati, prevalentemente in OE pediatrica,
  negli anni 80
• Abbandonati per inefficacia

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Cellule staminali emopoietiche periferiche
Da aferesi

• Uso autologo o omologo
• Preparazione del paziente/donatore
  (mobilizzazione CD34)
• Ciclofosfamide 4 g /m2 (autologo)
• G-CSF s.c. per 4-5 gg
• 1-2 procedure (2-3 ore) in giorni successivi

Congelamento in azoto liquido con crioprotettori
Conservazione a -80C
Scongelamento a 37C e impiego immediato
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Cellule staminali emopoietiche periferiche
Da cordone ombelicale

• Facilità di prelievo
• Necessità meno stringente di HLA-matching
• Ridotta GVHD
• Minore rischio di rigetto (blando condizionamento)

• Ridotto numero di cellule CD34 (pazienti
  pediatrici)
• Espansione in vitro

Congelamento in azoto liquido con crioprotettori
Conservazione a -80C
Scongelamento a 37C e impiego immediato
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Piastrine

• Concentrato piastrinico da aferesi
• Concentrato piastrinico da plasma-piastrinoaferesi
  
• Concentrato piastrinico da singola unità di
  sangue intero
• Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat
• Concentrato piastrinico lavato
• Concentrato piastrinico irradiato
• Piastrine crioconservate (da aferesi)
• Gel piastrinico

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Concentrato piastrinico da singola unità di
sangue intero
Plasma
Centrifugazione
Plasma
2000 rpm 5-8 min
Piastrine
Sangue intero (20-24 C)
Centrifugazione
Leucociti
3500 rpm 15-20 min
Piastrine
Centrifugazione
Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat
Leucociti
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(No Transcript)
25
(No Transcript)
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• Fino a 5 gg dal prelievo
• 20-24 C
• Agitazione continua

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(No Transcript)
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Eritrociti
Leucociti
Piastrine
Plasma

• Concentrato piastrinico lavato
• Concentrato piastrinico irradiato

• Come concentrati piastrinici

• Piastrine crioconservate (da aferesi)

• Congelamento entro 24 ore dal prelievo
• Crioprotettore (DMSO)
• Conservazione 1 anno a -80C, 10 anni a -150C
• Utilizzo immediato dopo scongelamento

• Gel piastrinico

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Concentrato piastrinico da singola unità di
sangue intero
Plasma
Centrifugazione
Plasma
2000 rpm 5-8 min
Piastrine
Sangue intero (20-24 C)
Centrifugazione
Leucociti
3500 rpm 15-20 min
Piastrine
Centrifugazione
Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat
Leucociti
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Gel piastrinico

• Concentrato piastrinico da singola unità di
  sangue intero
• Autologo
• Quantità di sangue intero variabile (30-50 cc)

Aggiunta di calcio e trombina

• Elevato contenuto di fattori di crescita degli
  a-granuli
• Favorisce i processi di riparazione tessutale
• Utilizzato in chirurgia maxillo-faciale,
  ortopedia, trattamento ulcere cutanee

Utilizzare nel più breve tempo possibile
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Plasma

• Plasma fresco congelato
• Crioprecipitato
• Plasma privo di crioprecipitato
• Colla di fibrina
• PLASMADERIVATI
• Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche
• Immunoglobuline
• Uso ev
• Specifiche anti-HBV
• Specifiche anti-tetano
• Fattori della coagulazione

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Plasma fresco congelato

• Separato entro 6 ore (non oltre 18) dal prelievo
• Congelamento a -30 completato entro 1 ora

• Congelato entro 6 ore dal prelievo
• Tipo A (aferesi)
• Tipo B (scomposizione)

• Congelato tra 6 e 72 ore dal prelievo
• Tipo C (scomposizione)

• Albumina
• Immunoglobuline
• ATIII
• FVIII
• FIX
• Complesso protrombinico

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Plasma fresco congelato

• Utilizzo per uso clinico entro
• 24 mesi se conservato ad almeno -25C
• 3 mesi se conservato tra -18C e -25C

• Scongelato a 30-37C con idonea strumentazione
• Utilizzato nel più breve tempo possibile
• Entro 24 ore se conservato a 0-4C

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• Scongelamento a 1-6C

Plasma fresco congelato
Crioprecipitato FVIII, FXIII, vWF, fibrinogeno,
fibronectina Plasma privo di crioprecipitato
(cryosupernatant) vWF metalloproteasi (ADAMTS13)
Ricongelamento entro 1 ora 24 mesi se conservato
ad almeno -25C 3 mesi se conservato tra -18C e
-25C
Utilizzato nel più breve tempo possibile Entro 24
ore se conservato a 0-4C
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(No Transcript)
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Colla di fibrina

• Crioprecipitato (autologo)
• Calcio trombina

• Facilitazione della cicatrizzazione delle ferite
  chirurgiche
• Azione favorevole sullemostasi

Utilizzato nel più breve tempo possibile
Congelamento 24 mesi se conservato ad almeno
-25C 3 mesi se conservato tra -18C e -25C

• Crioprecipitato
• Piastrine congelate
• Calcio trombina

Gel criopiastrinico
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Emoderivati (Plasmaderivati)

• Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche
• Immunoglobuline
• Uso ev
• Specifiche anti-HBV
• Specifiche anti-tetano
• Fattori della coagulazione

• Metodiche di precipitazione/purificazione
• Metodi fisici (crioprecipitazione)
• Metodi fisico-chimici (etanolo - Cohn)

• Metodiche cromatografiche
• Gel-filtrazione
• Cromatografia a scambio ionico e interazione
  idrofobica
• Cromatografia ad affinità

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Emoderivati (Plasmaderivati) Riduzione rischio
infettivo

• Quarantena

donazione
esami
Fase finestra

• Pathogen inactivation technology

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Pathogen inactivation

• Trattamenti al calore
• Pastorizzazione
• Trattamento al vapore
• Dry heat

• Trattamenti sovente-detergente
• TriNButylPhosphate Tryton X100
• Trattamento al vapore
• Dry heat

• Nanofiltrazione

• Trattamento al blu di metilene

• Amatosalene - UV

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Pathogen inactivation

• Perdita di proteine
• Costo
• Tossicità sul ricevente
• Danno alle cellule

• Alchilanti (S-303, PEN110)
• Riboflavina

Eritrociti

• Psoralene - UV
• Riboflavina - UV

Piastrine