Cromatograf

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Cromatografía
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Fase estacionaria
Fase móvil
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Clasificaciones de cromatografía

• Según el tipo de fase móvil y de fase
  estacionaria
• Según el formato y la geometría de la fase
  estacionaria
• Según el tipo de interacción entre la fase
  estacionaria y los solutos
• Según el tipo de flujo empleado
• Según el tipo de modificaciones en la fase móvil
• Según el método de detección
• Según la finalidad del experimento

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Según el tipo de fase móvil y de fase estacionaria
Fase estacionaria Fase móvil
Sólido Líquido
Sólido Gas
Líquido adsorbido Líquido
Líquido adsorbido Gas
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Según el formato y la geometría de la fase
estacionaria
Fase estacionaria Formato
Por ejemplo Sílice Placa fina
Por ejemplo Sílice Columna
Por ejemplo Sílice HPLC-NP
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Según el tipo de interacción entre la fase
estacionaria y los solutos
Interacción Cromatografía
Carga carga Intercambio iónico
Dipolos Fase Normal Fase Reversa
Hidrofóbica Efecto hidrofóbico
Diversa pero específica Afinidad
Enlaces covalentes IMAC
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Según el tipo de flujo empleado
Flujo por Cromatografía
Gravedad En columna
Capilaridad En papel Capa fina
Fluido a presión HPLC Gases
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Según el tipo de modificaciones en la fase móvil
Gradiente de Polaridad
Gradiente de Concentración
Gradiente de pH
Gradiente de Temperatura
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Según el método de detección
Detección por
Espectroscopías diversas IR, UV-Vis, Fluorescencia, MS
Propiedades físicas Índice de refracción Conductividad Ionización
Reactividad Revelado y derivatización
A tiempo fijo A distancia fija Rf Tiempo de retención Volumen de elución
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Según la finalidad del experimento
Separación y purificación Preparativa
Separación, cuantificación y caracterización Analítica
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La pregunta más importante

• En qué son distintas las sustancias que deseo
  separar?
• Ejemplos con proteínas

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1.- Carga eléctrica

• Cromatografía de intercambio iónico
• Fase estacionaria
• Resina con grupos funcionales iónicos
• (ej. R-NH3, RNR3, R-COO-, R-SO3-)
• Fase móvil
• Solución acuosa
• Parámetros a modificar
• Fuerza iónica, pH

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2.- Hidrofobicidad superficial

• Cromatografía de efecto hidrofóbico
• Fase estacionaria
• Resina con grupos funcionales hidrofóbicos
• (ej. R-?)
• Fase móvil
• Solución acuosa con (NH4)2SO4
• Parámetros a modificar
• Concentración de (NH4)2SO4

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3.- Afinidad por iones metálicos

• Cromatografía de afinidad por iones metálicos
  inmovilizados (IMAC)
• Fase estacionaria
• Resina con grupos funcionales quelantes de
  metales
• (ej
• Fase móvil
• Solución acuosa
• Parámetros a modificar
• Concentración de ligandos para iones
• metálicos, ej imidazol

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4.- Afinidad por ligandos específicos

• Cromatografía de afinidad
• Fase estacionaria
• Resina con ligandos específicos (ej. sustratos,
  antígenos)
• Fase móvil
• Solución acuosa
• Parámetros a modificar
• Concentración de ligandos (competencia)
• Fuerza iónica

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5.- Radio hidrodinámico (tamaño)

• Cromatografía de exclusión (no es
  cromatografía)
• Fase estacionaria
• Resina porosa
• Fase móvil
• Solución acuosa
• Parámetros a modificar
• Volumen de elución