Slayt 1

1
Çesitli Tümör Hücrelerine, Spirulina
platensis'den Ekstre Edilen Ca-Spirulan,
Fikosiyanin ve Ham Ekstraktin Etkisinin in vitro
Ortamlarda Incelenmesi
1Doç. Dr. Ismet GÜRHAN, 2Yrd. Doç. Dr. Sacide
PEHLIVAN, 3Ars. Gör. Köksal KÜÇÜKAKYÜZ, 1Doç. Dr.
Meltem CONK DALAY 4Dr. Memduh Sami TANER, 3Yrd.
Doç. Dr. Güven ÖZDEMIR, 5Biyokim.Ebru MANAV
1Ege Üniversitesi Mühendislik Fakültesi
Biyomühendislik Bölümü 2Ege Üniversitesi Fen
Fakültesi Biyoloji Bölümü Moleküler Biyoloji
Anabilim Dali 3Ege Üniversitesi Fen Fakültesi
Biyoloji Bölümü Temel ve Endüstriyel
Mikrobiyoloji Anabilim Dali 4Ege Üniversitesi Tip
Fakültesi Nükleer Tip Anabilim Dali 5Ege
Üniversitesi Bilim Teknoloji Uygulama ve
Arastirma Merkezi (EBILTEM)
Amacimiz Mavi-yesil alglerden olan Spirulinadan
elde edilecek Ca-Spirulan, fikosiyanin ve total
ekstraktinin organizma disi sistemlerde, kültür
ortamlarinda, çesitli tümör hücrelerine
anti-kanser etkilerinin kültürel ve moleküler
boyutlarda incelenmesidir.
Spirulina Nedir? Spirulina platensis, dünyada
ticari olarak üretilen ve Türkiyede de 2000
yilinda tamamlanan EBILTEM destekli bir
Üniversite-Sanayi isbirligi projesi sonucunda
özel sektör (EGERT) tarafindan piyasaya sürülen
bir siyanobakteridir.
ÇALISMANIN AKIS SEMASI
Spirulina platensis üretimi Spirulina platensis
EBILTEM bünyesinde bulunan pilot tesislerde
üretilip kurutma islemine tabi tutulacaktir
Tümör Hücre Kültürlerinin Karakterizasyonu i-Steri
lite mikoplazma, bakteri, virus, fungus ii-Üreme
özellikleri
Etken maddeler ile hücre kültürlerine testler A-
Canlilik Oraninin Belirlenmesi XTT dye reduction
assay uygulanacaktir. B- Transformasyon indeksi
Iki tabakali yumusak agar teknigi uygulanacaktir.

• Bu Çalismayi Neden Düsündük?
• Mevcut literatür tarandiginda Spirulina spp.nin
  anti-tümör ve antioksidan özelligi ile ilgili bir
  çok çalisma ile karsilastik. Bunlardan
  bazilarindan kisaca bahsedecek olursak
• Spirulina platensisten izole edilen
  Ca-Spirulanin B16-BL6 melanoma, Colon 26 M3.1
  carcinoma ve HT-1080 fibrosarcoma
  hücrelerinin Matrigel/fibronectin kapli filtreler
  üzerinden invazyonunu inhibe ettigi saptanmistir.
  (T. Mishima et al.)
• Spirulina platensisin suda çözünen ekstrakti
  0,08-50 mg/ml konsantrasyonlari arasinda doza
  bagimli olarak HeLa hücrelerindeki herpes simplex
  virus type 1 (HSV-1)in replikasyonunu inhibe
  etmistir. (K. Hayashi et al.)
• Spirulina platensisten ekstre edilen
  fikosiyanin human chronic myelogenous
  leukemia-blast crisis K562 hücrelerinin
  büyümesini doza bagimli olarak inhibe
  etmistir.(Y. Liu et al. )
• Spirulina maximanin metanol ekstraktinin in
  vitro ve in vivo sistemlerde bir miktar
  antioksidan koruma sagladigi gösterilmistir.
  (M.S. Miranda et al.)
• Spirulina platensisten izole edilen
  Ca-Spirulanin bazi zarfli viruslarin (Herpes
  simplex virus type 1, human cytomegalovirus,
  measles virus, mumps virus, influenza A virus,
  HIV-1) replikasyonunu inhibe ettigi
  saptanmistir.(K. Hayashi et al.)

A- Flovsitometri Hücre kültürlerinin DNA
içerigini belirleyecek hücre siklusu analizini
yapabilmek amaciyla uygulanacaktir. B- ELISA ile
apototik hücre ölümünün belirlenmesi ELISAPLUSkit
(Boeringer, Almanya) kullanilarak C- DNA
fragmentasyonu Elde edilen DNA fragmentleri
elektroforez islemine tabi tutulacak ve jel UVde
incelenecektir.
Reaktivasyon (Yeniden üreyebilme) kontrolu Etken
maddeler ile muamele edilen hücre kültürlerinin
bu etki kalktiktan sonra tekrar üreyebilme
oranlarini belirlemek amaciyla uygulanacaktir. Bu
nokta literatürlerde eksiklik olarak göze
çarpmaktadir.
i- Enzim analizi Süperoksit dismutaz (SOD),
askorbat peroksidaz , peroksidaz , katalaz
enzimlerinin aktiviteleri tespit edilecektir. ii-
Gen Ekspresyonu Total DNA izole edilerek cDNAya
çevrilecektir. cDNAlar üzerinde hücre yasam
çemberinde önemli kontrol görevi olan p53, bcL-2,
c-myc, p21 ya da PCNA genlerinin en az 2
tanesinde gen ekspresyonu olup olmadigi, var ise
ekspresyon miktarinin kontrol hücrelerle
karsilastirmasi yapilacaktir.
Istatistik degerlendirme Bulgular Tesadüf
bloklari faktöryel deneme deseni yöntemi ile
degerlendirilecektir.

• Referans
• Mishima T, Murata J, Toyoshima M, Fujii H,
  Nakajima M, Hayashi T, Kato T, Saiki I, 1998,
  Inhibition of tumor invasion and metastasis by
  calcium spirulan (Ca-SP), a novel sulfated
  polysaccharide derived from a blue-green alga,
  Spirulina platensis. Clin.Exp.Metastasis, 16,
  541-550
• Hayashi K, Hayashi T, Morita N, Kojima I, 1993,
  An extract from Spirulina platensis is a
  selective inhibitor of herpes simplex virus type
  1 penetration into HeLa cells. Phytotherapy
  Research, 7, 76-80
• Liu Y, Xu L, Cheng N, Lin L, Zhang C, 2000,
  Inhibitory effect of phycocyanin from Spirulina
  platensis on the growth of human leukemia K562
  cells. Journal of Applied Phycology, 12, 125-130
• Miranda M.S, Cintra R.G, Barros S.B.M, Filho
  J.M, Antioxidant activity of the microalga
  Spirulina maxima, 1998. Brazillian Journal of
  Medical and Biological Research, 31, 1075-1079
• Hayashi T, Hayashi K, Maeda M, Kojima I, 1996,
  Calcium Spirulan, an Inhibitor of enveloped virus
  replication, from a blue-green alga Spirulina
  platensis. J. Nat. Prod., 59, 83-87