Transfert d

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Transfert dun phénotype dun organisme à un autre
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Introduction

• On veut introduire un plasmide contenant la
  séquence dADN codant pour la protéine GFP dans
  des bactéries pour quelles acquièrent les
  caractéristiques de fluorescence de la GFP.

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Extraction et modification du plasmide
Extraction du plasmide de la bactérie
Insertion des gènes codant pour la fluorescence
(GFP) et pour la résistance à la kanamycine
1 ADN Génomique 2 Plasmides
GFP
Gène de résistance à la Kanamycine
On extrait le plasmide contenant une part de
lADN de la bactérie. Il est utilisé comme outil
génétique car il est facilement manipulable.
On insère dans le plasmides la séquence dADN
codant pour la protéine GFP et celle codant pour
la résistance à la Kanamycine. La kanamycine sera
ajoutée au milieu de culture des bactéries afin
de tuer toutes celle qui nont pas intégré le
plasmide et ne sont donc pas résistantes à
celle-ci
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Obtention de bactéries compétentes
Ajout des plasmides
Bactéries contenant le plasmide modifié
On rajoute ensuite du milieu LB puis on fait
incuber les bactéries à 37 pendant 30 minutes
afin de les laisser proliférer.
Bain Marie
CaCl2
Bactéries
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Le CaCl2 crée des pores dans la paroi des
bactéries afin dy laisser pénétrer les plasmides.
On crée un choc thermique pour refermer les pores
de la paroi
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Etalement des bactéries
On étale les bactéries obtenues précédemment sur
un milieu LB contenant de la kanamycine. La
kanamycine détruira toutes les bactéries nayant
pas le plasmide résistant à lantibiotique et
donc pas la GFP. Cela permet donc de ne
sélectionner que les bactéries ayant intégré le
plasmide contenant lADN qui code pour la GFP.
Milieu LB
Contenant Ampiciline
Contenant Kanamycine
Témoin
Bactéries
Contenant le plasmide codant pour la GFP et
résistante à la kanamycine.
Sans plasmide et résistante à la kanamycine.
Contenant un plasmide non modifié
On laisse incuber les bactéries durant la nuit.
Lampiciline a détruit les bactéries car elles ne
possédaient aucune résistance à un antibiotique.
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Récupération des plasmides

• Pour sassurer de la présence des plasmides
  contenant lADN codant pour la GFP, on tente de
  les récupérer à lintérieur des bactéries.

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• On lyse les bactéries de façon à récupérer les
  plasmides. Puis, après plusieurs réactions
  enzymatiques, on récupère la section du plasmide
  codant pour la GFP.

qui isolent la section dADN codant pour la GFP.
Action des enzymes
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Afin de vérifier que la section dADN récupérée
est bien celle codant pour la GFP, on coule
ensuite un gel dagarose dans lequel on compare
la migration des plasmides avec celle dun
marqueur sous une lampe UV.
Bande correspondante au plasmide
Marqueur
Bande correspondante à la section codant pour la
GFP
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• Réalisé par
• - HELICK Julien
• TANI Emilie
• GRARD Jérôme
• BOTZANOWSKI Thomas
• CERAULO Hugo