Prsentation PowerPoint

1
Choix des conditions expérimentales pour létude
de complexes non-covalents par MS Choix du mode
dionisation - MALDI-MS Echantillon
co-cristallisé avec une matrice (souvent
acide) Dénaturation de léchantillon Les
interactions non-covalentes ne sont pas
maintenues - ESI-MS Echantillon est
introduit sous forme de solution Choix du
solvant approprié au maintien des
interactions non-covalentes
2
Choix des conditions expérimentales pour létude
de complexes non-covalents par MS Choix du
solvant danalyse compatible avec -
lionisation ES - le maintien de la
conformation active en solution (pH, force
ionique, etc.) échange du tampon de
purification contre un tampon compatible avec
lionisation par ES acétate dammonium ( 200 mM)
pH 6,5 7,5 bicarbonate dammonium ( 200 mM)
pH 7,5 8,5
3
Que deviennent les différents types dinteraction
lors du passage en phase gazeuse?
Force (kcal/mol) Type Dans le vide Milieu
aqueux Covalente 90 90 Ionique
80 3 Hydrogène 4
1 Van der Waals 0,1 0,1
Attention!
Les interactions établies par effet hydrophobe
sont détruites en labsence de solvant!!
La MS donne des informations sur les interactions
de type électrostatique
4
Questions fréquemment posées lors de létude de
complexes biologiques non-covalents ? 1.
Y-a-t-il une interaction entre la (les) molécules
X et ma protéine ? 2. Quelle est la
stoechiométrie du complexe formé ? 3.
Linteraction est-elle spécifique ? 4. Peut on
utiliser la MS comme technique de criblage pour
la recherche de nouveaux ligands? 5. Application
Recherche de ligands dune protéine de fonction
inconnue Exemple du récepteur orphelin RORß 6.
Application Suivi de leffet de laddition de
ligands sur la stabilité dun complexe de
corégulation
5
(No Transcript)
6
(No Transcript)
7
(No Transcript)
8
(No Transcript)
9
(No Transcript)
10
Recherche de ligands dune protéine de fonction
inconnue Exemple du récepteur nucléaire RORß
11
(No Transcript)
12
(No Transcript)
13
(No Transcript)
14
(No Transcript)