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TRABAJO PRACTICO N? 2 CONTRACCION MUSCULAR

• EL MUSCULO COMO EL TEJIDO DE MAYOR CONSUMO
  ENERGETICO DEL ORGANISMO
• ESTUDIO DEL SISTEMA DE CONTRACCION DE LAS FIBRAS
  MUSCULARES

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• OBJETIVO PRINCIPAL
• Examinar la estructura de la fibra muscular y
  estudiar el requerimiento químico necesario para
  la contracción muscular, en términos de fuentes
  de ENERGIA ORGANICA e IONES INORGANICOS

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MIOFIBRILLA
MIOFILAMENTOS
FILAMENTOS GRUESOS DE MIOSINA
FILAMENTOS FINOS DE ACTINA
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RELACION ENTRE FILAMENTOS FINOS Y GRUESOS
UNIDAD FUNCIONAL EL SARCOMERO
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CICLO DE CONTRACCION MUSCULAR
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Ciclo de contracción animado
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DISEÑO EXPERIMENTAL Y METODOLOGIA
PREPARACIONES PREVIAS AL TP
1) DISECCION DE MUSCULO ESTRIADO (ESQUELETICO)
MUSCULO FLEXOR PSOAS MAYOR DE CONEJO.
2) INCUBACION EN 50 (V/V) DE GLICEROL / H2O A
0ºC DURANTE 24 HORAS.
3) EL MUSCULO SE TRANSFIERE A UNA SOLUCION (5 mM
EDTA 5 mM EGTA 1 mM DTT) CON AGENTES QUELANTES
DE LOS IONES CALCIO Y MAGNESIO, OVERNIGHT,
REALIZANDO DURANTE ESE LAPSO VARIOS LAVADOS Y
REEMPLAZO DE LA SOLUCION PARA ELIMINAR LOS IONES.
4) HOMOGENEIZACION DEL TEJIDO Y OBTENCION DE
PEQUEÑOS FRAGMENTOS DE FIBRAS MUSCULARES.
DESARROLLO DEL TP
5) CADA GRUPO DE ALUMNOS RECIBIRA UN TUBO
EPPENDORF CON TEJIDO MUSCULAR DISGREGADO.
6) MONTAJE DE TEJIDO Y OBSERVACION AL
MICROSCOPIO DE LA ESTRUCTURA MUSCULAR.
IDENTIFICACION DE LA UNIDAD FUNCIONAL, EL
SARCOMERO. ESQUEMA Y DESCRIPCION DE LOS
COMPONENTES, OBSERVANDO DESDE EL OBJETIVO 10X
HASTA 100X (ACEITE DE INMERSION)
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9) PARA LAS SOLUCIONES I y II, OBSERVAR EN
OBJETIVO 40X Y DETERMINAR QUE OCURRE CON LA
ESTRUCTURA DEL SARCOMERO DESCRIPTA INICIALMENTE
(VER FIGURA 2 EN LA GUIA) . NO HAY QUE MEDIR
LOS SARCOMEROS
10) PARA LAS SOLUCIONES III a VI ANALIZAR EL
PROCESO DE CONTRACCION Y DETERMINAR SI SE
MODIFICA EL LARGO DE UN SARCOMERO (en ?m),
ESTIMADO PREVIAMENTE EN EL TEJIDO CONTROL. MEDIR
NUEVAMENTE 5 SARCOMEROS CONSECUTIVOS EN AL MENOS
3 MIOFIBRILLAS DIFERENTES UTILIZANDO LAS
REGLETAS. ESQUEMATIZAR CADA CASO Y COMPARAR CON
EL CONTROL. MEDIR LOS SARCOMEROS EN
OBJETIVO 100X
INCORPORAR TODOS LOS DATOS A LA TABLA DE
RESULTADOS
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(No Transcript)
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INFORME a) Calcular el largo medio de un
sarcómero en estado relajado (control) y
esquematizar. b) Determinar, en base a lo
observado, cual es el efecto de las soluciones I
y II sobre la estructura del sarcómero.
Esquematizar los efectos de ambas soluciones,
comparando con esquemas de miofibrillas control,
en estado relajado. Indicar, de ser posible, que
tipo de filamento (fino o grueso) es afectado por
cada solución. c) Analizar el efecto de cada una
de las soluciones III a VI sobre la contracción
de las miofibrillas. Determinar el largo promedio
de un sarcómero para cada solución de perfusión,
indicando el efecto más probable de cada una de
ellas sobre la contracción de la miofibrilla.
Puede clasificar el grado de contracción muscular
como ninguno, leve, moderado o fuerte, siempre
comparando con el estado relajado del portaobjeto
control, que se tomará como referencia. Analizar
estadísticamente los datos de todo el turno.
Graficar los datos obtenidos (largo del sarcómero
en función de las soluciones utilizadas). A
partir de este análisis, proponga la composición
más probable de cada una de las soluciones de
perfusión III a VI (en este punto recuerde el
objetivo del práctico)
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Contracción Muscular en Psoas Mayor de Conejo