Laborat

1
Laboratórna diagnostika ockovaním
preventabilných ochorení
Nováková, E.
NRC HI, RÚVZ v Žiline
Ústav
mikrobiológie a imunológie JLF UK v Martine

• Vakcinacný den SR
• Žilina
• 27.9.2008

2
Priamy dôkaz vyvolávatela

• - baktérie
• v odobratej vzorke z miesta momentálneho výskytu
  - mikroskopicky (tetanus)
• - kultivacne (diftéria,
  pertussis)
• - dôkaz antigénu (v CSM )
• - dôkaz NK (PCR M. tbc,)

3
Priamy dôkaz vyvolávatela - 2

• vírusy zo vzorky odobratej z miesta výskytu
• elektronová mikroskopia
• imunofluorescencná mikroskopia
• dôkaz antigénu (rotavírus), HIT VNT
• dôkaz NK (HPV zo steru krcka maternice)
• - Izolácia vírusu
  -
  pomnoženie (tkanivové kultúry, kuracie embryo,
  bunkové kultúry)
  - identifikácia (CPE,
  mikroskopia, IFA, dôkaz antigénu HIT, VNT)

4
Nepriamy dôkaz vyvolávatela

• Dôkaz protilátok v sére pacienta sérologickými
  reakciami
• Antigén protilátka
• celkové protilátky 2 vzorky s intervalom 14 dní
  s dôkazom signifikantného vzostupu geometrického
  titra protilátok
• protilátky typu IgM, IgG, IgA a ich dynamiky

5
(No Transcript)
6
BCG Mycobacterium tbc

• BCG - Bacillus Calmette Guérin - ockovanie kmenom
  Mycobacterium bovis - skrížená imunita s
  Mycobacterium tbc.
• priama diagnostika ochorenia (v centrách
  
  -- mikroskopicky (predbežná)
  
• -- kultivacne 6-9 tyždnov
• -- PCR skrátenie diagnostiky

7
BCG Mycobacterium tbc

• Stanovenie špecifickej imunity
• urcenie úrovne individuálnej imunity (po
  ockovaní)
• odhalenie latentnej infekcie (pred
  imunosupresívnou terapiou)
• in vivo Mantoux
• in vitro IGRA (Quantiferon)

8
IGRA interferon gama release assayQuantiferon
TB in vitro test na stanovenie špecifickej
bunkami sprostredkovanej imunity

• metóda urcená na detekciu ochorenia a
  monitorovanie
• in vitro stanovenie aktivity CMI v plnej krvi

9
(No Transcript)
10
Bežný postup pri vyhladávaní latentnej tbc
infekcie

• Mantoux in vivo test na stanovenie bunkovej
  špecifickej odpovede po expozícii antigénu PPD
  (spolocný pre M.tbc aj BCG)
• - zátaž antigénom v teréne imunodeficitných
  pacientov
• - možná anergia
• - pamätové bunky po BCG vakcinácii,
• - nízka špecificita, nízka senzitivita,
• - boostrovanie PPD antigénom

11
Iná možnost dôkaz bunkovej imunity in vitro

• Quantiferon / IGRA
• in vitro testovanie špecifickej imunity
• po expozícii plnej krvi pacienta antigénom
  špecifickým pre M. tbc
• budú stimulovat len špecifické pamätové bunky po
  kontakte s M.tbc antigénmi
• bez skríženej reakcie s antigénmi BCG vakcíny
• antigén nie je podaný pacientom vylúcenie
  rizika expozície u imunosuprimovaných
• antigén neboostruje pamätové bunky pacienta

12
Interpretácia Skúmavka s krvou pacienta a M.tbc
antigénom Negat kontrolka vylúci nešpecifickú
sekréciu (napr. po liecbe) Pozit.kontrolka
ukáže schopnost reagovat (negat. u
imunokompromitovaných alebo po terapii)
latentna nešpecif
pozit pozit negat
negat negat pozit negat
negat pozit pozit pozit
negat
negat
negat

.
falošne
13
Porovnanie

• Mantoux in vivo
• reagujú pamätové bb po BCG aj po M.tbc.
  stimulácii
• aplikácia PPD i.d.
• zápal s induráciou v mieste vpichu

• Quantiferon in vitro
• pamätové bb po M.tbc infekcii
• stimulované in vitro
• sekrécia cytokínov
• dôkaz ELISA

14
Corynebacterium diphtheriaezáškrt diftéria
NRC ÚVZ Košice

• Corynebacterium diphteriae - gram pozitívna
  palicka.
• Kultivacné vyšetrenie je dobré upozornit
  laboratórium
• Toxigénny kmen - toxigenicitu kmen získa
  prostredníctvom bakteriofága, nie všetky kmene sú
  toxigénne
• Testovanie toxigenity kmena - Elekov test
  imunodifúzie in vitro

15
Diftéria - imunita

• protektívna antitoxická imunita
  stanovenie
  hladiny antitoxických protilátok IgG (metóda
  ELISA) je dôležité udržovat antitoxickú imunitu
  na dostatocnej úrovni
• 
  -- Schickov kožný test - dôkaz
  neutralizujúcich protilátok - i.d. podaním
  difterického toxínu

16
Tetanus

• G sporulujúca anaeróbna palicka
• Mimo tela prežíva roky ako odolná spóra
• V tele za anaeróbnych podmienok germinuje na
  vitálnu baktériu produkujúcu toxín
• diagnostika obvykle stací klinická
• mikrobiologicky typický obraz v mikroskopickom
  preparáte po germinácii spóry
• kultivacne anaeróbna kultivácia klinicky
  bezvýznamná
• dôkaz toxínu laboratórne na laboratórnych
  myšiach
• alebo imunoanalýzou (klinicky bezvýznamná)

17
Antitoxická imunita dôkazom antitoxických
protilátokDôležité je udržiavat dostatocnú
hladinu antitoxickej imunity
Po prežitom ochorení neexistuje špecifická
imunita nie je dostatocný antigénny stimul -
preockovat
18
Pertussis - cierny kašel

• Bordetella pertussis - gram negatívna palicka
• Diagnostika priama zriedkavo požadovaná
• - velmi
  nárocná (odber, diagnostické pôdy, dlhodobá
  kultivácia)
• -- nepriama aglutinacné
  protilátky z 2 odberov z odstupom 14 dní
• alebo --špecifické
  IgG, IgM , IgA

19
Cierny kašel

• stanovenie imunity
• ELISA IgG
• NRC
• ÚVZ Banská Bystrica
• Konfirmacné vyšetrenie
• PCR

B
20
Hemofilové invázne ochorenia

• Haemophilus influenzae typ b
• Ockovanie nezabráni
  -- infekciám
  horných dýchacích ciest,
  -- prítomnosti H.influenzae na
  sliznici
  -- ochoreniam opúzdranými kmenmi
  typu a, c, d, f
• Diagnostika priama kultivacne z HK (invázne
  ochorenia) a CSM, punktát tkaniva
• --
  mikroskopicky z CSM,
• -- dôkaz
  antigénu z
• !!!nikdy neodoberat vzorku pri epiglotitíde!!!

21
NRC RÚVZ Žilina
Dôkaz protilátok nemá diagnostický
význam stanovenie antiinfekcnej imunity dôkaz
špecifických protilátok metódou ELISA
22
Pneumokokové invázne ochorenia

• Priama diagnostika kultivacne krv na
  hemokultiváciu, CSM, aspirát z plúc
• Streptococcus pneumoniae
• Dôkaz existencie púzdra podla rastových
  charakteristík, Burriho metóda negatívneho
  farbenia
• Urcenie sérotypu polysacharidové púzdro (96
  typov) nepriama aglutinácia špecifickými sérami
  dostupná klinicky nevýznamná (epidemiologicky
  významná)

23
Dôkaz protilátok proti Str.pneumoniae

• Stanovenie špecifických protilátok (proti 23
  antigénom) ELISA postvakcinacné, postinfekcné
• protilátky postvakcinacné typovo špecifické
• chránia predovšetkým pred inváznymi ochoreniami
  (meningitída, pneumónia) Str.pneumoniae daného
  sérotypu
• významný je vplyv kolektívnej imunity na zníženie
  používania antibiotík

24
MMR osýpky, mumps, ružienka

• diagnostika v minulosti klinická
• laboratórna -- sérologický dôkaz IgM
  protilátok
• virologická
  diagnostika vírusu
• Interpretácia výsledkov
  
  špecificita použitých testov,
  --
  nešpecifická stimulácia protilátky produkujúcich
  buniek (u tehotných a v priebehu iných infekcií
• -- laboratórny výsledok je pomocným
• U ockovaných a pri kolektívnej imunite je
  významný klinický obraz a epidemiologická anamnéza

25
NRC ÚVZ Bratislava
26
Skríning intrauterinnej infekcie vírusom rubeolly

• teratogénny úcinok vírusu pri primoinfekcii
  tehotnej - Greggov sy
• vyšetrenie IgM protilátok
  - pozitivita akútne ochorenie
• vcasné Ab po ockovaní
• možnost nešpecifickej polyklonálnej aktivácie a
  pozitivity testu u tehotných
• prítomnost protektívnych IgG v populácii po
  ockovaní

27
Poliomyelitída NRC ÚVZ Bratislava

• Klinická diagnostika konfirmácia izoláciou
  vírusu
• Diagnostika priama zo stolice (nie výter)
• -- nepriama dôkaz
  postvakcinacných alebo postinfekcných protilátok
  (KFT, VN T)

28
(No Transcript)
29

• Hepatitída A
  
  stanovenie protilátok anti HAV total
  (IgMIgG) --
  anti HAV IgM
• IgM akútné ochorenie alebo po 1. dávke OL

30

• Hepatitída B
  
  antiHBs po ockovaní aj po ochorení
  
  -- po ochorení aj anti HBc total
  --
  ochorenie HBsAg, HBcIgM, HBeAg aktívna infekcia

31
Dalšie typy ockovania

• Klieštová encefalitída
  
  diagnostika nepriama ELISA IgM
  -- IgG prekonané ochorenie
  alebo po ockovaní
• Rotavírusová enteritída
  -- diagnostika ochorenia priama
  Latex aglutinácia zo stolice
• -- antiinfekcná a postvakcinacná sa nestanovuje

32
Ockovanie proti chrípke NRC ÚVZ Bratislav

• V. chrípky - typ A alebo B
• v období epidémie je diagnstika klinická
• dôkaz priamy pre epidemiologické úcely a
  identifikáciu vírusu
  virologická
  diagnostika odber výplach z nazofaryngu do
  transportného média
• dôkaz nepriamy IgG, IgM a IgA protilátky
  špecifické pre daný typ chríkového vírusu

33
HPV

• infekcia krcku maternice HPV prekanceróza
• -- diagnostika priama -- ster z krcka maternice
• -- histologické vyšetrenie PAP smear
• dôkaz prítomnosti LR alebo HR HPV genetickou
  sondou (alebo PCR)
• Existencia viacerých typov najviac 16 a 18
  (podla zahranicných štúdií)
• Význam vyšetrenia identifikácia infekcie bez
  klinických prejavov dôležitost preventívnych
  vyšetrení

34
Stanovenie individuálnej imunity

• Prítomnost špecifických protilátok
• po vymiznutí existencia pamätových buniek
• stací booster dávka
• stanovenie existencie anamnestickej odpovede
  ELISPOT
• pri antitoxickej imunite (dostatocná hladina)

35
ELISPOT

• metóda používaná na detekciu sekrécie cytokínov
  (napr. pri vývoji vakcín)
• stanovuje aktivitu špecifických buniek po
  expozícii antigénu in vitro

36
špecifický antigén produkcia cytokínov ich
stanovenie
37
(No Transcript)
38
Dakujem za pozornost