Brucelosis

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Brucelosis

• B. melitensis? sp. mas frecuente, Mediterráneo,
  Golfo de Arabia, India, Asia, Latinoamérica y
  regiones de México
• B. abortus ? distribución mundial
• B. suis ? Norteamérica, Latinoamérica(la más
  común en Argentina)
• B. canis ? Latinoamérica, Europa Central y Japón

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BrucelosisDistribución en Argentina

• B. melitensis ? ganado caprino, centro del país
  provincias del noroeste del país y precordillera
  de los Andes
• B. abortus y B. suis ? ganado vacuno y porcino,
  región pampeana y mesopotámica
• 10000 a 20000 personas adquieren la infección
  anualmente ( 33 a 66 casos c/ 1000000 hab )
• Se estima que en Argentina están infectados el 18
  de los bovinos, entre el 40 y el 95 de los
  caprinos (según la zona) y entre un 15 y 20 del
  ganado porcino

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Seroprevalencia en Argentina

• Banco Central de Sangre (Corrientes). Período
  1/1/2002- 31/7/2005
• 35.388 muestras de sangre
• Huddleson ? gt 1/40 ? exclusión del donante
• 494 muestras con serología ( 1.4)

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Seroprevalencia en Argentina

• Otros estudios
• Período 1987-2002? 0.94 ( prevalencia a nivel
  Nacional)
• Banco de Sangre de la Ciudad de Buenos Aires, año
  2002 ? 0.46 al 0.60
• No está legislado el Dx serológico específico
  para detectar B. canis
• Vacunación obligatoria de los animales
  susceptibles por resolución 375/82 de la Sec de
  Agricultura y Ganadería de la Nación

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Brucella spp

• Gran capacidad de supervivencia en el ambiente
• Sobreviven por muchos años en restos de animales
  congelados
• Sensibles al calor
• Sensibles al UV (5 min)
• Son sensibles a los desinfectantes

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Supervivencia de Brucella en el medio ambiente
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Brucelosis

• Infección en animales cabras, ovejas, vacas,
  cerdos, perros, búfalos, renos.
• En animales preñados ? prolifera en el útero y en
  las glándulas mamarias? aborto
• Infección humana

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Vías de transmisión

• contacto directo con tejidos de animales
  infectados ( piel erosionada, conjuntiva o mucosa
  nasal)
• Ingestión de carnes o productos lácteos
  contaminados
• Inhalación de organismos aerosolizados
• Inoculación ( vacunas vivas o muestras
  contaminadas ) a través de piel sana.

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(No Transcript)
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Brucella spp

• Familia Brucellaceae
• 6 especies B. abortus ( vacas) con 7 biovares
• B. melitensis ( cabras,
  ovejas) con 3
• biovares
• B. suis (cerdos) con 5
  biovares
• B. canis ( perros)
• B. ovis (carneros)
• B. neotomae ( ratas)
• B. ovis y B. neotomae? no
  infección
• humana

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Brucella Taxonomía

• Clase alfa-Proteobacteria
• Sub-Grupo alfa- 2
• Orden Rhizobiales
• Familia Brucellaceae ( junto con Ochrobactrum y
  Micoplana)

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Brucella spp ubicación taxonómica
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Factores de virulencia

• LPS ? determinantes antigénicos A y M, ausentes
  en B. canis.
• No exotoxinas
• Microorganismos intracelulares
• B. melitensis y B. suis ? sp más virulentas
• B. abortus y B. canis ? infección de comienzo
  insidioso, síntomas más leves y complicaciones
  menos severas

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Fisiopatogenia

• Fagocitosis por PMN y evasión de los mecanismos
  de defensa
• Transporte a través del SRE ( hígado, bazo y MO)
• Multiplicación intracelular, muerte celular y
  liberación de los microorganismos.
• Diseminación hematógena y a órganos clave
• Manifestación clínica

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Presentación clínica

• Período de incubación 2 a 3 semanas (1 sem a 2 o
  3 meses )
• Comienzo de los síntomas ( abrupto o insidioso)
• Fiebre, sudoración nocturna, escalofríos,
  malestar.
• A menudo dolor de cabeza, mialgias y artrargias,
  linfoadenopatía, hepato y esplenomegalia,
  manifestaciones cutáneas

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Presentación clínica

• Fiebre ondulante (cíclica) durante la tarde y
  noche por 2 a 3 semanas
• Puede evolucionar a la cronicidad
• Complicaciones que afectan varios sistemas(
  esquelético, SNC, TR, TGI, cardiovascular y
  piel).

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Presentación clínica

• Complicación más frecuente? compromiso articular
  y óseo
• Artritis y sacroileítis ? infección aguda en
  pacientes pediátricos
• Espondilitis, OM vertebral y abscesos
  paravertebrales ? infecciones crónicas en
  pacientes adultos

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Presentación clínica

• Neurobrucelosis
• Infecciones pulmonares ? neumonitis, empiema y
  derrame pleural
• Compromiso hepático ? granulomas caseosos ( o no
  ) y microabscesos

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Presentación clínica

• Compromiso TGU ? epididimitis, orquitis y
  granulomas renales, liquido amniótico y placenta
  de mujeres con brucelosis
• Compromiso cardiovascular ? lt 2? endocarditis de
  válvula nativa o protésica, miocarditis ,
  pericarditis, embolias sépticas y aneurismas
  aórticos

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Presentación clínica

• Compromiso cutáneo ? poco frecuente, lesiones
  mucocutáneas ulcerativas y abscesos subcutáneos
• En el SRE ? granulomas y abscesos
• Compromiso hematológico ? leucopenia,
  pancitopenia, trombocitopenia severa, anemia
  hemolítica microangiopática ( transientes)

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Cultivo y aislamiento

• Muestras de elección ? sangre ( 70 ) y médula
  ósea ( 92 )
• En infecciones complicadas ? LCR, biopsias y
  tejidos ( hígado, bazo, abscesos)
• Procesamiento en cabina de seguridad biológica (
  nivel 2 para muestras y 3 para cultivos y
  vacunas).
• Alerta médica al laboratorio ante la sospecha
  clínica de brucelosis

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Cultivo y aislamiento

• Medio bifásico de Castañeda ? 4 a 6 semanas de
  incubación
• Medios para hemocultivos automatizados
• BACTEC radiométrico, BACTEC no radiométrico,
  BACTALERT ? 3 semanas de incubación ( ? 7 días
  )
• En todos los casos ?subcultivos terminales a
  ciegas ( ? CO2)
• Métodos de lisis centrifugación ? ? rendimiento ?
  de elección para cultivo de MO

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Identificación presuntiva

• Cocobacilo muy pequeño
• Crecimiento lento en agar sangre o chocolate. 48
  hs colonias puntiformes, no hemolíticas No crece
  en medios entéricos
• Ureasa rápida ( sp dependiente)
• B. abortus ? 1- 2 hs ( algunas cepas son
  negativas)
• B.suis y B. canis ? 0-30 min
• B. melitensis variable ( algunas cepas son
  negativas)

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Identificación presuntiva

• Metabolismo oxidativo
• Oxidasa positiva ( excepto B. canis)
• Catalasa positiva
• Historia de exposición ocupacional, viaje a
  países exóticos o ingestión de carnes no cocidas
  o lácteos no pasteurizados
• Muestras? Sangre, MO, hueso, hígado

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Medios de aislamiento primario

• Agar Tripticasa soya, agar Brucella, agar
  infusión cerebro-corazón (con o sin el agregado
  de sangre) o agar chocolate. Incubar durante 7
  días
• Agar Thayer Martin como medio selectivo para
  muestras contaminadas

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Identificación a nivel de especie

• Requerimiento de CO2
• Producción de ureasa
• Producción de SH2
• Sensibilidad a los colorantes fucsina básica,
  tionina y azul de tionina? identificación de
  especies, y biovares de B. abortus y B. suis, no
  de B. melitensis
• Identificación serológica ( antisueros
  monovalentes para cepas lisas y rugosas)
• Solo en CENTROS DE REFERENCIA

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Diferenciación con otros géneros de BNF ureasa
positiva

• Oxidasa positiva ( B. abortus B. melitensis B.
  suis)
• B. zoohelcum ? Indol inerte a H de C
• O. ureolytica, B. bronchiseptica, C. pauculus ?
  inertes a H de C móviles
• O. antrophi y R. radiobacter ? crecen en medios
  entéricos móviles
• P. phenylpiruvicus ? Gram inerte a H de C

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Diferenciación con otros géneros de BNF ureasa
positiva

• Oxidasa negativa ( B. canis)
• B. parapertussis ? NO3 negativo

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Diagnóstico serológico

• Aglutinación en placa
• Rosa de Bengala ? prueba cualitativa
  (screening), IgM e IgG
• Huddleson ? ? prueba cuantitativa IgM, IgG e
  IgA (gt140)
• Aglutinación en tubo (STA) ? IgM e IgG ( con y
  sin 2ME). (gt 120)
• EIA ? Igual S pero gt E detecta IgM, IgG e IgA
• Fijación de complemento ? alta/ E, es el método
  de referencia internacional ( gt 120)
• IFI ( gt180)

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Diagnóstico serológico

• Prueba de Coombs ? detecta Ac completos e
  incompletos
• Ag B. abortus ? detecta B. abortus, B. melitensis
  y B. suis para B. canis ?se necesita Ag
  espeífico de especie
• Proteína citoplasmática de 18 kDa ? presente en
  infección aguda ausente en infección no activa o
  no infectados ( Goldbaum et al JCM 1993)
• Son de DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO

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Diagnóstico serológico

• Serología negativa ? descarta brucelosis
• Serología positiva ? no necesariamente implica
  infección activa
• Falsos positivos por reacción cruzada o por
  memoria inmunológica en población expuesta

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Tratamiento

• Terapia combinada y prolongada
• Esquemas propuestos
• TradicionalTetra oral ( 6 sem) estrepto IM ( 2
  a 3 sem)
• Habitual Doxi Rifa (oral) por 6 sem
• Beta-lactámicos? falla de tto (Cro)
• Quinolonas ? buena actividad in vitro( ofloxa, la
  más activa) pero recurrencia in vivo
• Ambos activos en terapia combinada (rifa)

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Tratamiento

• Neurobrucelosis y endocarditis ? rifa doxi
  TMS
• La endocarditis muchas veces requiere la cirugía
  ( reemplazo valvular)
• Niños ? TMS Rifa
• Embarazadas ? TMS o TMS Rifa
• Prueba de sensibilidad NO estandarizada!

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Conclusiones

• Diagnóstico presuntivo?
• Fiebre de más de una semana de evolución
• Epidemiología compatible
• Serología para Brucella
• Diagnóstico definitivo ? aislamiento del
  microorganismo de sangre, MO o tejidos