Molekulare Zellbiologie

1
Molekulare Zellbiologie

• Molekularbiologische Methode -
• Genexpression

2
Polymerasekettenreaktion (PCR)

• In vitro DNA-Synthese
• Hitzestabile DNA-Polymerase
• Primer-Paar
• Zyklen
• 1. Denaturierung (95 C)
• 2. Primer-Bindung (60 C)
• 3. Primer-Verlängerung DNA synthese (60-70 C)
• (Gelelectrophoresis)

3
PCR - Anwendung (Fragen)

• Existenz einer Sequenz
• (Infections, Krebs)
• Klonierung (Amplifizierung)
• Mutationsanalyse (Länge der DNA-Fragment)
• Quantität einer Sequenz
• Real-time PCR

4
Real-time PCR

• In vitro DNA-Synthese
• Hitzestabile DNA-Polymerase
• Primer-Paar
• Dritte Primer mit fluroreszent Farbsott
  und Auslöscher
• Polimerase macht fluoreszent Farbstoff frei
  gleichzeitige (real-time) Quantifikation

5
Genexpression

• DNA
• Transcription
• mRNA
• Translation
• Protein
• Protein-Function
• Phenotyp

6
Gentechnik in vivo

• Expression von fremden Genen
• Hinderung der endogenen Gen-Expression

7
Gentechnik in vivo

• 1. Expression von fremden Genen
• Gen-Transfer in Zelle
• Transgene Organisme

8
Hinderung der endogenen Genexpression I.

• I. DNA
• KO-mutation

9
Hinderung der endogenen Genexpression II.

• II. RNA
• Antisense RNA
• Ribosyme
• RNA-Interferenz

10
Hinderung der endogenen Genexpression III.

• III. Proteine
• Microinjection von Antikörper
• Intrazellulläre Antikörper
• Expression von dominanten hemmenden Proteinen
• Peptidomimetiken