La cinetica enzimatica

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La cinetica enzimatica
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Fattori che influenzano la velocità di reazione

• Temperatura
• pH
• Concentrazione dellenzima
• Concentrazione del substrato
• Nel caso di enzimi allosterici anche la presenza
  di modulatori positivi e negativi

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Temperatura
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pH
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E
6
S

• Se mettiamo in grafico V in funzione di S,
  troviamo che
• A bassi valori di S, la velocità V, aumenta
  quasi linearmente con laumentare di S.
• Ma come S aumenta, gli aumenti di V diventano
  via via più piccoli (iperbole rettangolare).
• Lasintoto rappresenta la velocità massima della
  reazione,Vmax
• La concentrazione di substrato che produce una V
  che è la metà di Vmax è detta costante di
  Michaelis-Menten, Km.

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(No Transcript)
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Grafico di Michaelis-Menten
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Aspetti importanti della cinetica di
Michaelis-Menten
Lequazione di Michaelis-Menten è la seguente
Vmax è la velocità limitante per
concentrazioni di S tendenti allinfinito
Km è la concentrazione di S che fa assumere alla
reazione metà della velocità massima ed è
espressa in Moli o millimoli o micromoli. Per
verificare, poni S uguale a Km nellequazione
cancella i termini uguali e ottieni VVmax/2.
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Calcolo dei parametri cinetici Vmax e Km

• Dal grafico di MM non è agevole calcolare la
  velocità massima della reazione, perché alle alte
  S la curva ha un andamento asintotico. Per
  questo si usa lelaborazione di Lineweaver-Burk
  che permette di linearizzare lequazione tramite
  il calcolo dei doppi reciproci.

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Grafico di Lineweaver-Burk
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Significato delle costanti cinetiche

• Lo studio della cinetica enzimatica è importante
  per vari motivi
• Aiutano a comprendere come lavorano gli enzimi
• Aiutano a comprendere come lavorano in vivo le
  costanti cinetiche Km e Vmax, sono di estrema
  importanza per capire come gli enzimi si
  coordinano tra loro a livello metabolico
• Permettono confronti tra organi e tra specie
• Possono essere usate a scopo clinico-diagnostico

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• Lossalacetato si forma nel mitocondrio ad opera
  della malico deidrogenasi (1) e della piruvato
  carbossilasi (2).
• Viene consumato dalla citrato sintasi (3) e dalla
  via gluconeogenetica (4)
• la aspartato transaminasi (5) trasforma
  lossalacetato in aspartato (e viceversa).

4
2
3
1
5
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Significato di Km nellomeostasi del glucosio

• Glucosio plasma circa 5mM
• Glucosio ATP Glucosio-6-P ADP
• Km glucosio per GK epatica15mM
• Km glucosio per HK cervello0,01 mM
• A parità di concentrazione di ATP (circa 1 mM)
  come saranno le velocità di GK e HK?

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Significato Km