Vai tro

1
Vai troø vaø yù nghóa cuûa caùc xeùt nghieäm
sinh hoïc phaân töû trong chaån ñoaùn vaø theo
doõi ñieàu trò beänh vieâm gan sieâu vi B vaø C

• BS. TS. Ph?m Hùng Vân(1)

1. Giaûng vieân Boä Moân Vi Sinh, Khoa Y, ÑHYD TP.
   HCMChuû nhieäm toå Boä Moân Vi Sinh, Khoa
   ÑDKTYHPhoù phoøng thí nghieäm trung taâm
   ÑHYDThaønh vieân chính cuûa ANSORP vaø ARFIDCoá
   vaán khoa hoïc Coâng Ty NAM KHOA

2
Nhieãm vieâm gan sieâu vi B (HBV)
3
(No Transcript)
4
Xét nghi?m sinh h?c phân t? cho viêm gan B
5
Nhieãm vieâm gan sieâu vi C (HCV)
6
Dieãn tieán nhieãm HCV
Nhi?m HCV (100) (Phase c?p)
7
Xét nghi?m sinh h?c phân t? cho viêm gan C
(2002 NIH Consensus Conference)
8
Th?c t? dã dòi h?i các nhà khoa h?c, d?c bi?t là
các nhà y h?c ph?i nhanh chóng phát tri?n và ?ng
d?ng các k? thu?t sinh h?c phân t? hi?n d?i, nh?t
là PCR và real-time PCR vào ch?n doán và h? tr?
cho theo dõi di?u tr? b?nh nhân viêm gan siêu vi
t?i Vi?t Nam
9
PCR và real-time PCR là m?t k? thu?t hoàn toàn m?
do v?y chúng ta có kh? nang không ph?i b? l?
thu?c vào các hãng s?n xu?t kit ? nu?c ngoài, nh?
v?y giá thành s? r?
10
Nguyên t?c PCR
11
M?iTaq polymerasedNTPPCR buffer MgCl2
DNA dích (Template)
PCR MIX
12
30X-40X 94oC/15s-1min 55-65oC/15s-1min
72oC/30s-3min
13
Real-time PCRch?y PCR và d?ng th?i phát hi?n s?n
ph?m khu?ch d?i
14
Thi?t b? Real-time PCR
15
PrimersTaq polymerasedNTPPCR buffer MgCl2
Ch?t phát hu?nh quang
Target DNA (Template)
Real-time PCR MIX
Real-time PCR mix
16
PCR có d?c hi?u không?
Nuoâi caáy
PCR
PCR d?c hi?u tuong duong nuôi c?y
Ñònh danh döïa vaøo kieåu hình sinh vaät hoùa
hoïc bieåu hieän töø caùc kieåu gen
Xaùc ñònh döïa vaøo kích thöôùc ñoaïn gen hay
moät trình töï ñaëc hieäu cuûa ñoaïn gen
17
Các bu?c trong xét nghi?m PCR phát hi?n tác nhân
vi sinh v?t
M?u th?
Chu?n b? m?u th?
Tách chi?t nucleic acid
Ch?y PCR
Phát hi?n s?n ph?m PCR và phân tích k?t qu?
18
M?t xét nghi?m PCR d?nh tính chu?n m?c
19
M?t xét nghi?m qPCR d?nh lu?ng chu?n m?c
20
M?t xét nghi?m qPCR d?nh lu?ng chu?n m?c
21
(No Transcript)
22
(No Transcript)
23
(No Transcript)
24
(No Transcript)
25
Xác d?nh Genotype HCV

• Phuong pháp real-time
• Phuong pháp InoLIPA
• Phuong pháp gi?i trình t?

26
PCR product 240bp
K?t h?p d?nh lu?ng và d?nh genotype HCV (b?ng
gi?i trình t?)
27
Xaùc ñònh genotype HCVso saùnh giaûi trình töï
vaø InoLIPA (234 maãu)
28
Ð?nh genotype HCV h?u d?ng lâm sàngch? có phuong
pháp gi?i trình t? 5-NC
29
Phaân boá genotype HCVkeát quaû 918 maãu
(21/9/2006-29/12/2007)
30
Phát hi?n d?t bi?n kháng thu?c c?a HBV

• Phuong pháp PCR-RFLP
• Phuong pháp real-time
• Phuong pháp gi?i trình t?

31
Ð?nh genotype HBV và phát hi?n d?t bi?n kháng
thu?c K? thu?t gi?i trình t? vùng rt gene (Nam
Khoa)
32
(No Transcript)
33
Phát hi?n kháng Lamivudine, adefovirgi?i trình
t?gene PreS
V?a phát hi?n nhi?u v? trí d?t bi?n
(k? c? heterozygote) V?a cho k?t qu? genotype
34
Xác d?nh genotype HBV Tìm d?t bi?n kháng thu?c
c?a HBV
BS nên cho ch? d?nh tìm d?t bi?n kháng thu?c và
genotype HBV khi b?nh nhân không dáp ?ng di?u tr?
lamuvidine
35
K?t qu? xác d?nh genotype HBV
K?t qu? genotype c?a 455 m?u huy?t thanh b?nh
nhân HBV-DNA
36
Tyû leä ñoät bieán YMDD455 m?u huy?t thanh bn
HBV-DNA
37
Ñoät bieán YMDD 455 m?u huy?t thanh bn HBV-DNA
Phaân b? theo lu?ng virus
38
(No Transcript)
39
A
B
K?t qu? PCR khu?ch d?i do?n gen HBV precore dài
kho?ng 250 bp
40
(No Transcript)
41
K?t qu?

• Có 37 m?u huy?t thanh HBeAg (-)
• Ð?t bi?n precore
• Ð?t bi?n promoter

G1896A () Heterozygote G1896A (-)
18 5 14
A1762T/G1764A () Heterozygote A1762T/G1764A(-)
18 5 14
42
Knowing is not enough, we must apply Willing is
not enough, we must do Goethe
Tri th?c s? ch?ng bao gi? d?N?u không dem trãi
nghi?m v?i d?i U?c v?ng cung tr? thành vô
nghiaN?u c? ng?i ôm m?ng gi?a choi voi
Phan Kim Ng?c và Ph?m Hùng Vân
43
(No Transcript)