Propiedades qu

1
Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y
proteínas
2
Enlace peptídico
R1R2
3
Secuencia AlaGluGlyLys o AEGK
4
COO-
COO-
NH2
NH2
NH2
COO-
5
Análisis químico
Composición? Detección?
Secuencia?

• Reacciones del enlace peptídico
• Reacciones del grupo amino terminal
• Reacciones del grupo carboxilo terminal

6
Reacciones del enlace peptídico y de detección
proteica

• Hidrólisis ácida (ClH 6M a 100 C, 24hs).
• Reacción de Biuret ( SO4Cu/tartrato alcalino
  540nm). Baja sensibilidad.
• Reacción de Lowry et al. (Reactivo de
  Folin-Ciocalteau mezcla de óxidos de tungsteno
  y molibdeno) 720-750 nm
• Coomassie Brillant Blue
• Plata

7
Reacciones del grupo amino (terminal)

• Ninhidrina (570 nm) Pro a 440nm
• Fluorescamina (producto fluorescente). Alta
  sensibilidad
• 1-Fluoro-2,4 dinitrobenceno(FDNB, reactivo de
  Sanger)
• Cloruro de dansilo
• o-ftalaldehído (en sn con mercaptoetanol,
  producto fluorescente). Alta sensibilidad

8
Reacciones del grupo Carboxilo

• Hidrazina (H2NNH2)
• Carboxipeptidasa

9
Secuenciación

1. Purificación de la proteína o péptido
2. Ruptura de los puentes disulfuro
3. Determinación de los extremos amino-terminales y
   carboxilo-terminales
4. Corte específico de la secuencia principal en
   fragmentos menores, al menos en dos formas
   distintas
5. Purificación de cada segmento y secuenciación
6. Determinación de la secuencia total

10
2 Ruptura de S-S-
11
DTNB ( ácido ditio-bis-nitrobenzoico)
nitrotiobenzoato
12
3 Determinación de extremos
13
Producto púrpura
14
(No Transcript)
15
(No Transcript)
16
4 Cortes y producción de fragmentos Métodos
enzimáticos
17
(No Transcript)
18
4 Cortes y producción de fragmentos Métodos
químicos
19
5 Secuenciación de fragmentos
20
(No Transcript)