Clase 1

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Microbiología

• Clase 1
• Introducción a la microbiología
• Bioq. Denise Risnik (drisnik_at_hotmail.com)

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Definición

• La microbiología es la ciencia encargada del
  estudio de los microorganismos, seres vivos
  pequeños no visibles al ojo humano (del griego 
  mikros "pequeño",  bios, "vida" y logía,
  ciencia), también conocidos como microbios. Se
  dedica a estudiar los organismos que son sólo
  visibles a través del microscopio
  organismos procariotas y eucariotas simples.
• Son considerados microbios todos los seres vivos
  microscópicos, estos pueden estar constituidos
  por una sola célula (unicelulares), así como por
  un conjunto de células indiferenciadas
  (Multicelulares), estos pueden ser eucariotas
  (células con núcleo y organelas) tales como
  hongos y protistas o procariotas (células sin
  núcleo definido) como las bacterias.

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• Dentro de la Microbiología se agrupan la
  bacteriología, parasitología, micología y
  virología
• Si bien la microbiología abarca una gran variedad
  de organismos muy diferentes, las técnicas para
  cultivarlos, identificarlos y estudiarlos son
  semejantes.

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(No Transcript)
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Célula eucariota
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Célula procariota
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Comparación
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Comparación
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Parasitología
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Parasitología

• Dominio Eukarya
• Animales invertebrados metazoos y protozoarios
  unicelulares
• Variedad muy grande de especies agrupados en
  función de la patología que producen y no por sus
  características estructurales.
• Ej Mosquitos, vinchucas, ladillas, piojos,
  gusanos chatos y redondos (visibles a simple
  vista) y protozoos unicelulares microscópicos.
• Distribución endémica-regional
• Complejos ciclos biológicos con mas de un huésped

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Micología
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Micología

• Dominio Eukarya
• Grandes (parasitan plantas), medianos (setas,
  champignones) pequeños (Mohos filamentosos) y
  Levaduras (unicelulares)
• Compuestos por hifas
• Pueden presentar Dimorfismo
• Pocas especies infectan humanos
• No integran la microbiota habitual humana
• Mayor importancia en inmunocomprometidos

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Virología

• Especies particuladas (no mas de 120 nm) sin
  ninguna organización celular, que solo pueden
  multiplicarse dentro de células (procariotas o
  eucariotas) utilizando el sistema energético y
  biocinética de estas.
• No hay especie viva investigada en la que no se
  haya determinado la presencia de un virus
• Están compuestos por material genético y una
  estructura proteica

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Virología
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Priones

• Un prion es una partícula infecciosa formada por
  una proteína denominada priónica, que produce
  enfermedades neurológicas degenerativas
  transmisibles tales como la enfermedad de
  Creutzfeldt-Jakob y la encefalopatía espongiforme
  bovina
• La proteína tiene alterada su estructura
  secundaria, teniendo un incorrecto plegamiento de
  su estructura terciaria.
•  A diferencia del resto de los agentes
  infecciosos (virus, bacterias, hongos etc...),
  que contienen ácidos nucleicos, un prion
  solamente esta compuesto por aminoácidos y no
  presenta material genético.
• Dichas proteínas mutadas forman agregados
  supramoleculares y son patógenas con plegamientos
  anómalos ricos en láminas beta, y
  autoreproducibles.

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Bacteriología
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Bacteriología

• Dominio bacteria
• Células Procariotas
• Todas UNICELULARES
• Existe un numero muy grande de especies de las
  cuales muy pocas (en forma relativa al total)
  producen patología humana
• Un numero muy importante de bacterias (aerobias y
  anaerobias) integran la microbiota habitual
  humana
• Replicación por fisión binaria
• Pared celular de Mureína (hay excepciones)

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Morfología
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Tamaños
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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Microbiología clínica

• Es una disciplina aplicada de la medicina que
  estudia los microorganismos capaces de provocar
  enfermedades en los seres vivos.Importante No
  todos los microorganismos son patógenos.
  Dependiendo del huésped y las circunstancias
  pueden ser beneficiosos, perjudiciales o
  neutrales.

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Postulados de Koch (1884)

• Para probar la relación causal entre un
  microorganismo y una enfermedad específica
• El microorganismo debe estar presente en cada
  caso de la enfermedad,
• pero ausente en organismos sanos.
• El microorganismo sospechoso debe ser aislado y
  obtener un cultivo puro
• La misma enfermedad se debe producir cuando el
  microorganismo aislado es inoculado en un
  hospedador sano.
• El mismo microorganismo debe ser aislado otra vez
  del hospedador inoculado enfermo

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Técnicas

• Observación de frescos
• Tinciones
• Cultivos
• Pruebas bioquímicas
• Pruebas de sensibilidad
• Anamnesis

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Tinciones

• Tinción de Gram
• Utilizada como método de clasificación de las
  bacterias en dos grandes grupos Gram y Gram
• Se basa en las características de la pared
  celular
• Gram Positivo Violeta
• Gram Negativo Rosa

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Tinción de Gram
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Tinción de Gram
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Tinción de Gram
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Ziehl Neelsen

• Tinción para bacterias acido alcohol resistentes
• Principal uso Detección de Mycobacterium
  tuberculosis (agente causal de la tuberculosis)

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(No Transcript)
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Cultivos
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Cultivos

• Las sustancias nutritivas preparadas en el
  laboratorio para el crecimiento de
  microorganismos se conocen como medio de cultivo.
  Algunas bacterias pueden crecer
  satisfactoriamente en casi cualquier medio de
  cultivo, otras necesitan medios especiales y aún
  hay algunas que no pueden crecer en ninguno de
  los medios inertes desarrollados hasta ahora. Los
  microbios que crecen y se multiplican dentro o
  sobre un medio de cultivo constituyen lo que se
  denomina cultivo microbiano. En éste los gérmenes
  desarrollan sus procesos bioquímicos vitales.

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Cultivos

• INÓCULO Introducción de células bacterianas
  viables en un medio de cultivo líquido o sobre la
  superficie de un medio sólido.
• CULTIVO Se llama de esa manera a un conjunto o
  población de bacterias que crecen en un medio
  determinado. Si es homogénea hablamos de un
  cultivo puro (población de la misma cepa de la
  misma especie).
• COLONIAS Pequeñas masas visibles que forman las
  bacterias diseminadas mecánicamente sobre la
  superficie de un medio sólido cuando se replican
  en un tiempo determinado.
• CLON Cuando las bacterias de una colonia derivan
  de una única célula.
• UFC Puede estar compuesta por una bacteria o un
  cúmulo de bacterias y al crecer sobre medio
  sólido son capaces de generar una colonia aislada.

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Cultivos

• Todos los medios de cultivo deben reunir una
  serie de condicionesDeben contener agua
  componente por excelencia de la célula
  bacteriana. Disolvente de las sustancias
  nutritivas y además es el solvente de los
  electrolitos que mantienen el equilibrio
  ácido-base y la presión osmótica bacteriana.
  Deben contener sustancias nutritivas adecuadas
  hidratos de carbono, proteínas, lípidos, sales
  minerales, y en algunos casos vitaminas o
  factores de crecimiento que son sustancias
  indispensables para acelerar el metabolismo
  bacteriano y actuar como coenzimas de procesos
  enzimáticos. Debe tener un pH adecuado pH
  neutro ligeramente alcalino (la mayoría de las
  bacterias se desarrollan a pH entre 6,5
  (acidófilos) y 7,5 (neutrófilos)). Debe
  mantenerse en condiciones estériles para evitar
  que se desarrollen gérmenes no deseados
  dificultando identificar la bacteria que hemos
  sembrado.

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Cultivos

• Para gérmenes aeróbicos el medio de cultivo
  debe disponer de oxígeno libre o combinado, según
  que las bacterias respiren por un mecanismo
  aerobio, anaerobio facultativo o
  microaerofílico. Aceptores y donadores de
  hidrógeno todos los organismos requieren una
  fuente de energía en forma de donantes de
  hidrógenos (sustratos oxidables).También se
  requieren aceptores de hidrógeno en las
  reacciones de oxidorreducción que suministran
  energía.- Gérmenes aerobios oxígeno libre-
  Gérmenes anaerobios estrictos Sust. Inorgánicas
  (carbonatos, nitratos, sulfatos)- Gérmenes
  anaerobios facultativos Sust. Orgánica
  (fermentadores). Fuente de Carbono, Nitrógeno y
  minerales (Azufre, Fósforo, etc.) Debe ser
  mantenido a una temperatura óptima ésta
  temperatura esta alrededor de los 37º C.Hay una
  gran variedad de medios disponibles para el
  cultivo de microorganismos. Comercialmente la
  mayoría de ellos tienen sus componentes
  previamente mezclados y sólo necesitan la adición
  de agua y esterilización.

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Medios de cultivo

• El agar es una sustancia gelatinosa, extraído de
  algas, muy empleado para la preparación de medios
  de cultivo. Se licúa completamente a la
  temperatura del agua hirviente  y se solidifica al
   enfriarse a 40 grados.
• Diferencia entre un medio de cultivo sólido y uno
  líquido
• El medio de cultivo sólido contiene entre 1.5 y
  2 de agar-agar
• el medio líquido no contiene agar-agar
• Los medios sólidos se utilizan principalmente
  para aislar y visualizar colonias
• Los medios líquidos son buenos para un desarrollo
  abundante

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MEDIOS PARA AISLAMIENTOS PRIMARIOS

• Generales
• No Selectivos para cultivo de una amplia variedad
  de organismos difíciles de hacer crecer. A menudo
  están enriquecidos con materiales como sangre,
  suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros
  factores accesorios para el crecimiento de las
  bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)
• Selectivos
• Se añaden sustancias que inhiban el crecimiento d
  e ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la ve
  z el crecimiento de otras. Variando las sustancia
  añadidas, se varía el tipo y grado de
  selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina).
  Contienen uno o varios compuestos que inhiben el
  crecimiento de un determinado tipo de
  microorganismos y no afectan a otros tipos. Ej
  El cristal violeta inhibe las gram
• Enriquecidos
• Algunos microorganismos no son capaces de
  desarrollarse en medios de cultivo normales. Para 
  cultivarlos necesitamos añadir sustancias
  altamente nutritivas como sangre, suero, extractos
   de tejidos animales. Estos medios son los medios
  enriquecidos, y los microorganismos que crecen en
  ellos son microorganismos exigentes o
  fastidiosos.
•  Suprimen el crecimiento de la flora competitiva n
  ormal potenciando el cultivo y crecimiento
  deseado .
• Para Aislamientos Especializados
•  formulaciones nutritivas especiales que
  satisfacen requerimientos de grupos específicos de
   bacterias, ayudando a su identificación

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Medios para identificación

• Diferenciales
• formulaciones especiales en las que se estudian la
  s peculiaridades fisiológicas  específicas de las 
  bacterias. Seleccionando los medios adecuados se
  puede llegar a la identificación de casi
  cualquier  bacteria. Contienen distintos
  compuestos químicos o indicadores
  sobre los que determinados microorganismos adquier
  en coloraciones específicas o reaccionan de una ma
  nera particular. Ejemplo Agar levine tiene
  colorantes especiales (eosina y azul
• a las colonias que viven en el medio.
•  Escherichia coli forma colonias de color
  verde claro,
• Enterobacter  forma colonias de color
  rosa/salmón.
• Medios Selectivos Y Diferenciales
• Es un medio específico para enterobacterias.
  Cristal violeta inhibe a las gram . Las sales
  biliares hacen que sólo se desarrollen las gram
  (tolerantes) (las enterobacterias.) El indicador
  es el rojo neutro, que es rojo a pH ácido e
  incoloro a pH básico. Como fuente de carbono se
  utilizan peptona y lactosa.
• Ejemplo Agar McConkey tiene cristal violeta y
  sales biliares. Se usa para detectar  E. Coli y
  Salmonella
•  E. Coli fermenta  la lactosa liberando ácidos,
  por lo que se crea un medio ácido y el indicador
  se pone rojo.
• Salmonella no fermenta la lactosa, por lo que no
  formará ácidos y formará colonias incoloras

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Agar sangre

• AGAR SANGRE Medio enriquecido, estándar. El AS
  al 5 con base de Tripticasa-Soja es un medio que
  permite el crecimiento tanto de microorganismos
  exigentes como no exigentes, que incluyen
  bacterias aerobias y anaerobias.
• Permite clasificar microorganismos por su
  capacidad de hemolisis ayudando a su
  identificación

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Agar chocolate

• Medio enriquecido, para bacterias que no crecen
  en medios habituales. El Agar chocolate es un medi
  o destinado principalmente al aislamiento de
  gonococos y meningococos, pero en el que pueden
  crecer muchos otros microorganismos exigentes.
  Con un medio análogo a éste es con el que Thayer
  y Martin han hecho sus primeros asilamientos selec
  tivos de 
• gonococos, después de añadir antibióticos

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Agar Mac Conkey

• Este medio es selectivo ya que la concentración
  de sales Biliares inhiben el crecimiento de los
  microorganismos Gram . Se incluye también
  cristal violeta para inhibir el crecimiento de
  las bacterias Gram , especialmente estafilococos
  y enterococos. Tambien diferencia microorganismos
  fermentadores de lactosa.

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Agar EMB Levine

• Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación
  de bacilos entéricos. Es un medio selectivo y
  diferencial, adecuado para el crecimiento de
  enterobacterias.La combinación utilizada de
  eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo
  de microorganismos Gram y de bacterias Gram -
  fastidiosas, y también, permite diferenciar
  bacterias fermentadoras y no fermentadoras de
  lactosa. Fermentadores de lactosa verde con
  brillo metálico.
• No fermentadores de lactosa incoloras

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Pruebas bioquímicas
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Pruebas bioquímicas

• Serie de pruebas que permiten la identificación
  de una bacteria a partir de un cultivo puro.
• Están tabuladas
• Partiendo de un determinado medio de cultivo
  selectivo y/o diferencial y conocimientos de
  bacteriología fisiopatológicos, se puede reducir
  el numero de pruebas bioquímicas necesarias.

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Pruebas de sensibilidad

• Su función es la elección del tratamiento
  antibiótico adecuado
• Existen varios tipos
• El mas usado es el antibiograma por difusión en
  placa
• Se utiliza el conocimiento sobre la bacteria y el
  lugar de infección para ensayar el menor numero
  de antibióticos posible

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Pruebas de sensibilidad
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Técnica aséptica
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Bioseguridad
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Algunas definiciones

• ESTERILIZACIÓN Es la destrucción o eliminación
  completa de toda forma de vida microbiana. Puede
  llevarse a cabo por procesos físicos o químicos
  (vapor a presión, calor seco, óxido de etileno,
  líquidos químicos).
• DESINFECCIÓN Es un proceso que elimina la
  mayoría o todos los microorganismos sobre los
  objetos inanimados con la excepción de esporos
  bacterianos. Se efectúa por medio de agentes
  químicos.
• GERMICIDA Agente que destruye microorganismos en
  especial patógenos, en tejidos vivos y objetos
  inanimados. Según germen sobre el que actúa, se
  lo denominará fungicida, virucida, bactericida,
  etc..
• ANTISÉPTICO Sustancia aplicada en la piel u otro
  tejido vivo que previene o detiene el crecimiento
  o la acción de microorganismos por inhibición de
  su actividad o por su destrucción.
• LIMPIEZA Es la remoción física de materia
  orgánica o suciedad de los objetos. Generalmente
  se realiza utilizando agua, con o sin
  detergentes.

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(No Transcript)
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Esterilización

• Calor Tanto el húmedo como el seco esterilizan,
  pero el calor seco destruye con una velocidad más
  lenta y requiere temperaturas más altas y tiempos
  de exposición más prolongados.
• Esterilización por calor seco (estufa) Este
  método utiliza aire caliente seco.
• Ventajas facilidad de instalación, facilidad de
  manejo y facilidad de poder esterilizar material
  dentro de recipientes cerrados.
• Desventajas Son necesarias altas temperaturas,
  con lo cual los instrumentos a esterilizar pueden
  ser deteriorados por el excesivo calor, no
  distribución homogénea de la temperatura y
  excesivo gasto de funcionamiento por consumo de
  energía eléctrica.
• Esterilización por calor húmedo (Autoclave)
  Actúa de manera combinada el calor y la presión.
  El calor húmedo es producido en forma de vapor de
  agua a presión y el mecanismo de la destrucción
  se realiza a través del mecanismo de la
  coagulación de la proteína bacteriana,
  destruyendo los microorganismos más resistentes
  como las esporas.

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Esterilización

• Óxido de etileno
• El óxido de etileno es un agente alquilante
  ampliamente utilizado en la esterilización
  gaseosa. Es activo contra todo tipo de bacterias,
  incluyendo esporas, virus y bacilos tuberculosos.
• Es utilizado para todo aquel material termolábil
  o que no resista las condiciones de
  esterilización por calor húmedo o seco. Ej.
  plásticos, goma, equipo electrónico.
• Es mutagénico, tóxico, la inhalación causa
  náuseas, vómitos y trastornos neurológicos, a
  igual que cualquier otro tipo de gas, es
  inflamable y de riesgo cuando su utilización no
  se realiza adecuadamente, bajo condiciones
  controladas y por personal competente.

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Equipos para Estrilización
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Bibliografía Recomendada

• Microbiología biomédica.
• Basualdo
• Microbiología.
• Brock
• Muchas Gracias!!