Nacionalna referentna laboratorija za uzrocnike mikoza

1

MEDICINSKA MIKOLOGIJA

• Nacionalna referentna laboratorija za uzrocnike
  mikoza
• Laboratorija za parazitologiju i mikologiju
• Institut za mikrobiologiju i imunologiju
• Medicinski fakultet u Beogradu, 2010

2
Cilj nastave

• Morfologija i biologija gljiva Klasifikacija
  medicinski znacajnih gljiva
• Grada gljiva i struktura
• Mehanizmi dejstva AM
• Biologija i fiziologija gljiva
• Podela gljivicnih infekcija (GI)

• 2. Cesti izazivaci GI samo kože, dlake i nokta
• Rod Malassezia - morfologija, biologija.
  Patogeneza pitiriasis versicolor, seb. dermatitis
• Rod Trichophyton - morfologija, biologija.
• Rod Microsporum - morfologija, biologija.
• Rod Epidermophyton - morfologija, biologija.
• Patogeneza dermatofitoza

• 3. Cesti izazivaci površnih/invazivnih/
  oprtunisticke GI
• Rod Candida - morfologija, biologija. Patogeneza
• Rod Cryptococcus - morfologija, biologija.
  Patogeneza
• Rod Aspergillus - morfologija, biologija.
  Patogeneza
• Rod Fusarium - morfologija, biologija. Patogeneza

• 4. Ostali izazivaci površnih/invazivnih
  oprtunisticke GI )  
• Rod Penicillium - morfologija, biologija,
  patogeneza
• Zygomicetes (rod Mucor, rod Rhisopus, rod
  Absidia) - morfologija, biologija. Patogeneza
• Rod Pneumocystis - morfologija, biologija.
  Patogeneza

3
www.mycology.adelaide.edu.auwww.medicalmyco
logy.orgwww.edae.gr/myco2.htmwww.pfdb.netwww
.doktorfungus.org/mycoses/index.htmwww.lumen.luc
.edu/lumen/DeptWebs/microbio/med/review/mycology.h
tmwww.mikologija.org.rs
MYCOLOGY WWW
4
Mykos/gljiva Logos/nauka Mikologija/nauka o
gljivama Fungus gljiva Gljive -
eukariote Postoji oko 250 000 vrsta gljiva oko
100 vrsta je znacajno za ljude
 
5
OSNOVNA GRAÐA CELIJE GLJIVA
Grada gljivicne celije
Grada gljivicne celije
SVE GLJIVE POSEDUJU Celijski zid (hitin,
glukan, manan, celuloza) Citopazmatsku membranu
(ergosterol) Jedro Mitohondrije

• GLJIVE SE DELE MORFOLOŠKI
• KVASNICE (jednocelijske gljive) PLESNI
  (višecelijske gljive)
• BIFAZNE/DIMORFNE
• (PLESNI/25ºC KVASNICE/37ºC)

6
CILJNE STRUKTURE GLJIVA ZA DELOVANJE
ANTIMIKOTIKA/AM - mehanizmi

• Celijski zid/Ehinokandini
• Inhibira sintezu glukana

• Citoplazmatska membrana/CM/ Polieni
• Vezivanjem za ergosterol CM
• (sprecava funkciju CM)

• Nukleinske kiseline/5-Fc
• Inhibicija sinteze NK

• Ergosterol/Azoli
• Inhibicija enzima za sintezu ergosterola

7
Morfologija i biologija

• KVASNICE

• PLESNI

Candida
Aspergillus
8
Morfologija i biologija
BIFAZNE/DIMORFNE GLJIVE

• KVASNICE

• PLESNI

Blastomyces (Paracoccidioides) brasiliensis
9
Morfologija i biologija - KVASNICE

• JEDNA CELIJA(okrugla/ovalna/izdužena 2-7µm)
• Aseksualnim razmnožavanjem nastaju
• blastokonidije/blastospore
• Seksualnim razmnožavanjem nastaju
• askospore ili bazidiospore

pseudohife i hlamidospore!!!
10
Morfologija i biologija - PLESNI

• VIŠECELIJSKE/izdužene h i f e (5-50 µm) i
  konidije/spore
• konidije (aseksualna deoba)
• artrokonidije (nastaju fragmentisanjem hifa)
• makrokonidije
• mikrokonidije...
• spore (seksualna deoba)
• askospore ili zigospore

• Hife sadrže pregrade (septe)
• potpune (septirane hife)
• nepotpune (aseptirane hife)
• Grananje i rast hifa formira micelijum
• bazalni/vegetativni (u podlozi)
• vazdušni/reproduktivni (iznad podloge)

11
RAZMNOŽAVANJE GLJIVA
Vecina gljiva haploidne/ heterokariote
Dikariote (2 haploidna nucleusa)
Mitoza
12
ASEKSUALNO RAZMNOŽAVANJE

• Kvasnice
• pupljenjem nastaju blastokonidije/blastospore
• Jednocelijske strukture (2-7 µm)
• Plesni
• Npr. fragmentacijom hifa artrokonidije
• konidiogeneza konidije
• višecelijske - makrokonidije (15-150 µm)
• jednocelijske - mikrokonidije (2-6 µm)

Mikroskopski izgled hifa i konidija bitan za
identifikaciju nedermatofitnih plesni Mikroskopsk
i izgled makrokonidija i hifa bitan za
identifikacija dermatofita
13
SEKSUALNO RAZMNOŽAVANJEZygomycetes,
Basidiomycetes, Ascomycetes

• Stadijumi
• spajanje (n) i (n) celija ? plazmogamija
• nastaje zigot (2n) hromozoma
• mejoza ? nastaju 4 jedra sa (n) brojem hromozoma
• spore

zigospore
askospore
bazidiospore
Seksualne karakteristike osnov za taksonomiju i
sistematizaciju gljiva
14
RAST GLJIVA

• Krivulja rasta kvasnica
• nemaju izraženu logaritamsku i eksponencijalnu
  fazu
• linearan rast (7-14 dana)
• broji se colony forming units / CFU

• makroelementi
• mikroelementi
• kiseonik
• aerobne
• mikroaerofilne
• fakultativno anaerobne
• Voda
• UH
• pH 2 8
• optimalno 5.4 5.6

• Krivulja rasta plesni
• ne može se izraziti brojanjem živih celija
• (7-14 dana)
• meri se težina talusa

15
TEMPERATURA RASTA GLJIVA

• Psihrofilne/0-20C mezofilne/20-45C
  termofilne/45-90C

• PLESNI
• 25oC

• KVASNICE
• 37oC

• DIMORFNE/BIFAZNE
• 25oC rastu u vidu plesni
• 37oC u vidu kvasnica

Za izolaciju gljiva iz bolesnickog materijala o b
a v e z n o se koriste i 25oC i 37oC
Porast kolonija 3-7 dana (kvasnice,
nedermatofitne plesni) 14-21 dan (plesni -
dermatofiti) 4-6 nedelja (bifazne gljive)
16
FAKTORI VIRULENCIJE GLJIVA

• ADHERENCIJA pripajanje za receptore na celijama

• ENZIMI
• proteinaze, fosfolipaze,
• elastaze, keratinaze,
• katalaze, ureazu,
• koagulazu, esterazu,
• hemolizine, lipaze...

• MORFOGENEZA
• prelaz iz micelijumske u kvašcevu fazu
  rasta, odnosno blastospore u germinativne tube

17
BOLESTI IZAZVANE GLJIVAMA
MEDICINSKA MIKOLOGIJA
MEDICINSKA TOKSIKOLOGIJA

• Mikoze (GI)
• Mikoalergoze
• Mikotoksikoze

• Micetizam
• trovanje nejestivim pecurkama

fruiting bodies
18
PODELA GLJIVA I GLJIVICNIH INFEKCIJA (GI)

• PODELA GLJIVA PREMA PATOGENOSTI
• 1. Apatogene (saprofiti)
• 2. Patogene
• uslovno patogene
• patogene

• PODELA PATOGENIH GLJIVA
• PREMA LOKALIZACIJI I IMUNSKOM STATUSU PACIJENATA
• Oportunisticke/IGI 300 vrsta
• (imunodeficijentne osobe/rizicne grupe)
• Izazivaci kožnih GI 33 vrste
• Izazivaci potkožnih GI 10 vrsta
• Izazivaci IGI (bifazne) 25 vrsta
• (imunokompetentne osobe)

• USLOVNO PATOGENE GLJIVE
• Candida
• Aspergillus
• Fusarium
• Zigomicetes
• Cryptococcus
• Malassezia...

• PATOGENE GLJIVE
• Dermatofiti
• Trichophyton
• Microsporum
• Epidermophyton
• Dimorfne/bifazne gljive

19
M I K O Z E GLJIVICNE INFEKCIJE (GI)prisustvo
i razmnožavanje gljiva na/u telu coveka

• PREMA LOKALIZACIJI
• p o v r š n e gljivicne infekcije (PGI)
• superficijalne
• kutane
• mukokutane
• 2. d u b o k e/sistemske/invazivne (IGI)
• lokalizovane
• diseminovane
• subkutane (potkožno tkivo)???

• KLINICKA SLIKA - KARAKTERISTICNA

• onihomikoza

• KLINICKA SLIKA NIJE KARAKTERISTICNA
• (rizicne grupe pacijenata!!!)

• aspergiloza pluca

20
OSNOVNI PRINCIPI LABORATORIJSKE DIJAGNOZE GI

• STANDARDNE MIKOLOŠKE METODE
• (KONVENCIONALNE METODE)
• 1. MIKROSKOPSKI PREGLED BOLESNICKOG MATERIJALA
• direkni mikroskopski preparat(DMP)
• patohistologija (PH)
• 2. IZOLACIJA GLJIVA IZ BOLESNICKOG MATERIJALA
• m i k o l o š k a k u l t u r a (MK)

• IMUNOLOŠKE METODE
• DOKAZIVANJE ANTITELA (At)
• DOKAZIVANJE ANTIGENA (Ag)
• DOKAZIVANJE DRUGIH BIOMARKERA

• MOLEKULARNE METODE
• 1. DOKAZIVANJE DNK (PCR)

• z l a t n i s t a n d a r d

• DOKAZANA GI

• VEROVATNA / MOGUCA GI