Sicherheitsunterweisung

1
Sicherheitsunterweisung

• für das mikrobiologisch-molekularbiologische
  Praktikum
• am
• Gymnasium

2
Allgemeines

• Die Experimente werden Ihnen Spaß machen.
• Sie üben sich in wissenschaftlicher Arbeit.
• Halten Sie sich exakt an die Anweisungen für die
  Experimente.

3
Formale Aspekte

• Diese Unterweisung ist gesetzlich vorgeschrieben
• Sie bestätigen diese Unterweisung durch Ihre
  Unterschrift
• am Praktikum dürfen nur unterwiesene Praktikanten
  teilnehmen, die die Betriebsanleitung gelesen
  haben

4
Sicherheitseinrichtungen

• Fluchtwege und Sammelstelle
• Erste-Hilfe Kästen
• Feuerlöscher
• Betriebsanweisungen
• Alarmplan

5
Persönliche Schutzmaßnahmen

• Laborkittel und eventuell Handschuhe und
  Schutzbrille tragen
• Straßenkleidung außerhalb des Labors aufhängen
• Keine Schreibunterlagen auf die Arbeitsflächen
  legen

6
Persönliche Schutzmaßnahmen

• Hände waschen und Sterilium nutzen vor dem
  Verlassen des Labors und vor Nutzung der Toilette
• Allergien (z.B. gegen Aldehyde) dem Lehrer melden
• Im Praktikum nicht essen, trinken, rauchen,
  Kaugummi kauen, etc
• Arbeitsanweisungen befolgen
• Bakterien-Anreicherungen sind grundsätzlich als
  pathogen anzusehen

7
Gefahrenquelleneine Auswahl

• Autoklav
• Bunsenbrenner
• Chemikalien leicht entzündbare Lösungen
  (Ethanol, etc.)
• Gase
• Glasgeräte
• Zentrifugen
• Spritzen und Kanülen
• Einige nicht identifizierte Bakterien
• Aerosolbildung bei pipettieren,
  zentrifugieren,...

8
Alarmplan

• Ruhe bewahren
• Lehrer informieren
• Gegebenenfalls Notarzt / Krankentransport rufen
• Schulleiter benachrichtigen

9
Maßnahmen bei Verbrennungen und Verbrühungen

• Brennende Person ablöschen (Feuerlöschdecke,
  CO2-Feuerlöscher)
• Bekleidung/heiße Stoffe entfernen
• Betroffene Körperteile mit kaltem Wasser
  behandeln
• Brandwunden keimfrei bedecken
• Wärmeverlust verhindern

10
Allgemeine Hinweise

• Nur auf glatten, desinfizierbaren Oberflächen
  arbeiten
• Keine Chemikalien oder lebensfähige Bakterien ins
  Abwasser geben
• Chemikalien dosiert abwiegen, nicht in
  Vorratsgefäße zurückgeben!
• Abfälle sortieren und in Behältern sammeln
• Wasserverbrauch reduzieren

11
Feuerlöscher

• Vor Benutzung den Sicherungsstift ziehen
• Kann nur für wenige Sekunden genutzt werden
• Nur CO2-Feuerlöscher zum Ablöschen von Personen
  verwenden!
• Brände von unten und mit der Brandrichtung
  bekämpfen

12
Autoklaven

• dürfen nur nach Einweisung durch einen Lehrer
  bedient werden
• keine Gefäße autoklavieren, die mehr als zur
  Hälfte mit Flüssigkeiten gefüllt sind
• Autoklavierband nutzen
• Leere, geschlossene Gefäße mit etwas Wasser
  befüllen
• beachte chemische Reaktionen, Siedepunkte,
  Ausdehnung von Gasen etc, die während des
  Autoklavierens eine Druckerhöhung erwarten lassen
• Autoklav muss zum öffnen auf 60-70C abgekühlt
  sein Siedeverzug!
• Laborkittel, Schutzbrille und Handschuhe tragen
• Autoklaveninnenraum notfalls reinigen und Wasser
  wechseln
• Regelmäßige Kontrolle der Wirksamkeit Sporentest

13
Autoklav

• Bedingungen 121C, 20 min, 1 bar
  Wasserdampf-überdruck
• Autoklavierzeit ist ab-hängig von der
  Flüssig-keitsmenge im Sterilgut
• Laborkittel, Schutzbrille und Handschuhe tragen
• Kontrolle durch Autoklavierband

14
Laborkittel

• hochgeschlossener Kittel
• verdeckte Knopfleiste
• zugeknöpft
• am Ende des Praktikums als Kochwäsche reinigen

15
Abfallgefäße

• Nach Möglichkeit aus autoklavierbaren
  Plastikbechern
• Festsubstanzen im Autoklavierbeutel sammeln
• Kanülen in einem speziellen Kanülenentsorgungs-beh
  älter sammeln

16
Abfallgefäße

• Flüssigsubstanzen in verschliessbaren
  Glasflaschen mit etwas Desinfektionsmittel
  sammeln.
• Diese Gefäße maximal bis zur Hälfte des Volumens
  füllen.

17
Kulturgefäße

• Erlenmeyer mit Schikanen
• Kulturröhrchen
• Agarplatte
• achten Sie auf eine vollständige Beschriftung

18
Agarplatten

• Dienen der Vereinzelung von Bakterienzellen
• Einzelzellen bilden Kolonien Klone
• Die Oberflächen sollen trocken sein

19
Agarplatte

• Nur am Boden beschriften
• Kopfüber inkubieren
• Mehrere Agarplatten stapeln und eventuell mit
  Testband sichern
• Bei mehrtägigen Inkubationen in einer
  Feuchten-Kammer inkubieren

20
Agarplattenempfohlene Beschriftungen

• Oben
• Beschriftung entlang des Bodens
• Unten
• Beschriftung entlang des Randes

21
Stammsammlungen

• Organisieren Sie Ihre Stammsammlung
• Sie bietet Ihnen Referenzorgansimen
• Lagerung bei mindestens -20C in 10-igem
  sterilen Glycerin

22
Datenbank zur Stammsammlung
Datenfelder Eintrag
Stamm E. coli
DSMZ 3424
Medium LB-Medium
Box/Gefäß-Nr 1/5-10
Lager-Datum 4.2002
Plasmid pUC18
Antibiotika-Resistenz Amp
Verwendung Plasmidisolierung
23
Gesehen in einem Mikrobiologie-Labor ....
24
Impföse

• Die Platinöse rotglühend abflammen
• Den Metallteil des Kollehalters nur kurz durch
  die Flamme ziehen
• Nicht senkrecht über die Flamme halten

25
Die Bunsenbrennerflamme

• Der obere, orange gefärbte Flammenteil ist der
  heiße, oxidierende Teil
• Der untere, blau gefärbte Flammenteil ist der
  kalte, reduzierende Teil
• Nur auf feuerfester Unterlage benutzen

26
Überimpfen

• Kulturgefäße nur so kurz wie möglich öffnen
• Öffnen nur in der Nähe einer Bunsenbrennerflamme
  (wegen aufsteigender Luft!)
• Öffnung des Gefäßes nach Möglichkeit abflammen

27
Drigalski-Spatel

• mit 80-igem Ethanol benetzen
• Kurz abflammen!
• Vor Gebrauch auf unbeimpfter Agaroberfläche
  auskühlen lassen
• So lange auf der Agaroberfläche reiben, bis der
  Widerstand merklich größer wird

28
Hygieneplan
Was Wann Womit
Hände Nach der Arbeit Sterilium
Fußboden Nach Verschütten von Bakterienlösung Korsolin
Arbeitsflächen Vor/nach dem Experiment 80 Ethanol
Geräte Bei Bedarf 80 Ethanol
Laborkittel Am Ende des Praktikums Kochwäsche
Einwegmaterial, Bakterien-suspensionen Am Endes des Experimentes Autoklav 121C, 20 min
29
Desinfektion

• Labortische und sonstige Oberflächen mit 80-igem
  Ethanol einsprühen
• Achtung Bunsenbrenner aus Brandgefahr!

30
Pipette

• Präzisionsinstrumente Nicht fallen lassen
• Regelmäßig ihre Richtigkeit überprüfen!
• Spitzen mit der Abwurfvorrichtung (2. und 3.)
  abwerfen
• Farbkode (1.) für die Spitzen beachten
• Flüssigkeiten im Schaft (4.) sofort entfernen!
• Pipetten beim Nichtgebrauch im Ständer
  aufbewahren!

31
Pipettierhilfe

• Niemals mit dem Mund pipettieren
• Immer Pipettierhilfe benutzen
• Auf Auslauf pipettieren

32
Glaspipette

• Pipetten mit der Spitze nach oben in den
  Pipettenklo geben
• Sterilisieren Trockenschrank, 180C, 30 min

33
Handhabung der Glaspipetten

• Glaspipetten sollten bei Nichtgebrauch auf einer
  Pipettenunterlage aufbewahrt werden.
• Bitte niemals auf den Labortisch legen!

34
Zentrifuge

• Achten Sie auf austarierte Rotoren
• In einer Tischzentrifuge kann die 13 000-fache
  Erdbeschleunigung auf den Gefäßen anliegen
• Ausgetretene Flüssigkeiten sofort aus der
  Zetrifuge entfernen

35
Umgang mit Chemikalien

• Gefährlichkeit
• ätzend, mutagen, ....
• Persönliche Schutzmaßnahmen
• Beachten Sie die Handflaschen-Beschriftungen
• Sicherheitsdatenblätter beachten
• Laborkittel, Schutzbrille, Staubmaske,
  Handschuhe
• 3. Entsorgung
• nichts in den Abguss geben! Sammeln in den
  aufgestellten Sammelgefäßen

36
Waage

• Wägeplatz sauber halten
• Chemikalien auf gefaltetem Papier abwiegen
• Keine Chemikalien in den Vorrat zurückgeben

37
Beschriftung von Handflaschen

• Übernehmen Sie die Angaben vom Hersteller
• Bringen Sie gegebenenfalls die zwei wichtigsten
  Gefahrensymbole an
• Vermerken Sie alle R- und S-Sätze

70
38
Schutzmaßnahmen bei Gefahrstoffen

• Persönliche Schutzausrüstung (Laborkittel,
  Schutzbrille, Handschuhe)
• Info-Quellen nutzen Sicherheitsdatenblätter
  und Betriebsanweisungen lesen
• Aerosolbildung vermeiden Vorsicht beim
  Pipettieren, Zentrifugieren, etc.
• Nichts mit dem Mund pipettieren

39
... und jetzt die Unterschrift bitte
Ich bestätige durch meine Unterschrift, an der
Sicherheitsunterweisung zum mikrobiologisch-moleku
larbiologischem Praktikum teilgenommen zu haben,
die sich an die Betriebsanleitung anlehnt. Ich
habe die Betriebsanleitung gelesen ich hatte die
Möglichkeit Fragen zu stellen ich habe die
Ausführungen verstanden und ich werde mich an die
Anweisungen halten. Die Sicherheitsunterweisung
fand am ..... von .... bis .... statt. Der
Projektleiter ...........................
Name Unterschrift