(Monoclonal Antibody,McAb)

1
????????
2
???????????

• ?????
• (Monoclonal Antibody,McAb)
• ??B????????????
• ?????
• (Polyclonal Antibody)
• ??B????????????

3
??(antigen ,Ag)

• ??,??????,?????(epitope)

1
Ag
4
2
3
4
?????
B1
1
4
Ag
B2
2
B3
3
B4
?????
B3
B3
B3
B3
5
1?????????

• ????,?????????????(????????!)
• ?????????,????????,????????????????????????

• ???????,????????

6
??????????
ß

• hFSH ?????
• hLH ??????
• hTSH ??????
• hCG ????????

a
ß
a
ß
a
ß
a
7

• ???????????????????????????(100?????),?
  ??????(?????????)?

8
?????????
3
2
2
1
2
1
2
1
1
1
3
2
1
3
3
2
3
1
2
1
3
1
2
1
9
?????????????

• ????????,??????
• WB(Western blotting ,????)
• IH (Immunohistochemistry, ??????)
• IC (Immunocytochemistry, ??????)
• IEM (Immune lectron microscopy,????)
• FCM (Flow Cytometry,?????)
• ELISA(enzyme linked immunosorbent assey,
• ????????,??????)

10
2?????????

• ?????????,??????????????????
• ?????????
• ????????????,????????????,????????,????????????
  ?

11

• ??????????? ????????????,??? ?????????

• ????????????
• ????????????????,
• ???????????????,?
• ???????????.

12
???????

• 1?????????
• ?????????????????
• ??????????????
• ?????????????????
• ???????

13
????????????

• ???B???? ????? (myeloma)
• (?????????? ,
  (??????????,
• ????????? )
  ?????????)
• ???????
  (hybridoma)
• 
  (?????????,
• 
  ??????????)
• ?????
• 
  (?????????????)
• ???????
  

1
2
2
1
2
2
2
14

• 2??????
• ???????
• ???????
• ??????

15
1)???????

• ??(rabbit)????????,
• ??????(???,???)
• ??(mouse)???????,?
• ??????(BALB/C,???)
• ??(rat)???????,???
• ???????(Wistar??)

16

• ?(sheep?goat)????????
• ????(??)?
• ?(horse)???????????
• ??(??)?
• ??(guinea pig)????????

17
2)???????

• ??????,?????,?????
• ??(Complate Freund adjuvand ,
• ????,????).
• ?????2???,?????,??,
• ??2-4?,????????
• (Incomplate Freund
  adjuvand ,
• ?????).

18

• ?????
• ?????????????7????
• ??????
• ???????7-10????
• (????????????,????????,??,????,??,??,??)

19
3) ??????

• 2000g(????),??,???(??20g,??200g)
• ????
• 0.5ml??(?0.250.5mg???108????)
• 0.5ml??????(CFA)(??0.2ml)
• ????-?????
• ??????????????????(??????)

20

• ????
• ??2-4?,?????
• 0.5ml??(?????)
• 0.5ml???????(IFA)
• ????-?????
• ??????????????????

21

• ??34?????????????
• ???1104??,???1106?
• ????? 116??,???164
• ??????????????
• ?????(???)
• ??????(???)

22
????????

• ??
  ??
• ???? ?? ??
  
• ???? ????? ???????
• ???? ??,??? ?????
• ???? ??????? ????????
• ???? ? (??4??) ?(2??)
• ???? ?? ??
• ?? ? ?

23
??????????

• ??????????
• ????,????
• ??????(?????????)
• ?????????,?????
• ?????????,???????

24
???????

• ???(?????)
• ??-??????
• ?????
• ?????
• ?????

25
1????(?????)

• ??
• ??????????,?????????????????
• ???????????
• ????????????
• ???????????????
• (100???767g/L)

26

• ????
• ?????????????????
• 4?????,???,????
• ?????,??????????
• 50??? 0.313g/ml
• 45??? 0.277g/ml
• 40??? 0.243g/ml
• ???????,???PBS????,??,
• ?????

27

• ??
• ???,?????
• ??????????
• ???????,???????????,??????????
• ????????

28
2????-??????

• ??
• ????
• ?????????.
• ?????????,??????(pH4.5)???????????.
• ??????????.

29

• ????
• ?????pH?,?????(25ul/ml),??30??
• ??????(10000g,30??),?????
• ??????(40???)
• 4?????(10000g,15??) ,???
• ????,??,?????

30

• ??
• ????,??????
• ????????
• ?????,???????,????????
• ???????,????????????

31
3??????

• ??
• ???????????????????????????????.
• DEAE?????????,??????
• (Diethylaminoethyl,??????)
• ????pH????????,???????.
• ???????,??????????????(Cl-)????????.

32
????? ?????
????? ?????
???? ?????

• 
  - -
• - -
  - -
• - -

33
??????

• NaCl Tris
• ?????

34
????
???????NaCl??
????

T
????
???????
T
35

• ????
• ?????????,??
• ?????
• ?????????
• ???NaCl????,???????
• ?????????,??A280????????
• ????,??,?????

36

• ??
• ????,??????
• ????????
• ??????,?????????,????????
• ????????,?????
• ????,??????

37
4??????

• ??
• ?????????????
• (??-??,??-??)
• ????????????,??????????
• ????????pH????

38
???
????(Binding)
??(Elution)
39

• ????
• ?Protein A?????????(????)
• ???????????
• ?????????,??A280???
• ???????????,???????
• ??????A280?,??A280????????
• ????,??,?????

40

• ????A??
• (staphylococcal protein A,SPA)
• ????????????????
• ???42000,???pH5.1
• ???????Ig?Fc???
• ??SPA???4????????
• ?IgG?????,?IgM,IgA?????

41

• ??
• ???,??????
• ???????
• ?????,????????
• ????????,?????
• ????????

42
5??????(???)

• ??
• ?????????????????,?????????,????????????.
• ???????????????,????
• ????????????????,????
• ???IgM??????
• (???,????800KD)

43
(No Transcript)
44

• ????
• ???????????,????
• (??G-200,????,80-100cm)
• ??????,??????
• ???????,??????A280??
• ??????

45

• ??
• ???,??????
• ???????,??????,?????????
• ???????
• ????????