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(No Transcript)
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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES

• Biologie clinique prélèvements méthodes -
  valeurs

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
Biologie clinique - domaine

• analyses de base
• urgentes, souvent de caractère vital
• nombre limité (20 à 30)
• part importante de l'activité des laboratoires au
  plan économique
• 8 analyses biochimiques essentielles représentent
  1/3 des analyses
• remboursées (lipides, NF, glycémie, urée
  créatinine, VS, bilan électrolytique, coagulation
  (temps de Quick), transaminases, acides urique et
  microbiologie de base)
• analyses spécialisées
• grande valeur informative, rarement vitales
• nombre gt 1000 mais demande faible
• domaine privilégié de l'innovation
• analyses non validées
• transfert technologique non fait ou analyse
  abandonnée
• résultat de l'échange d'informations entre
  scientifiques, industriels, cliniciens,
  biologistes
• témoins de la vitalité de la recherche en
  biologie clinique

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
Biologie clinique évolution technologiques

• Disparition presque totale des techniques
  chimiques au profit des techniques enzymatiques
  pour les paramètres courants ? automatisation
  complète et performante
• Explosion des techniques immunologiques au dépend
  des techniques de radioanalyse ? automatisation
• Explosion des techniques de biologie moléculaire
  ? simplification des techniques et formation des
  personnels des laboratoires privés
• Développement des analyses délocalisées
  (méditests, autotests, tests rapides
  d'orientation clinique TROC) utilisant chimie
  sèche, automates portables, immunotests simples
• Diversification des procédures de séparation et
  analyses de mélanges complexes

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
Biologie clinique - qualité d'une analyse
biologique

• la qualité de l'analyse biologique correspond à
  la qualité de lacte médical
• qualité technique proprement dite précision,
  exactitude, sensibilité, spécificité
• ? valeurs les plus précises et exactes possibles
• qualité chronologique (réponse à l'urgence)
• qualité informative
• dépend en partie des 2 premières
• dépend du contexte scientifique et médical
• ? valeurs significatives et utilisables
• ? Valeurs obtenues à comparer aux valeurs de
  références
• ? Nécessaire maîtrise de la variation
  analytique et des variations biologiques
• qualité économique paramètre de en
  important !!
• la biologie clinique discipline de nature
  quantitative ? existence déjà ancienne de
  méthodes chiffrées d'évaluation de la qualité ?
  contrôle soigneux de tous les facteurs.

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
Biologie clinique - qualité d'une analyse
biologique

• Référentiels
• Guide des bonnes pratiques de laboratoire (UPPL)
• Guide de bonne exécution des analyses (GBEA)
• Référentiel d'accréditation et/ou de
  certification
• Les différents types de contrôle
• Pool de sérum
• Méthode économique (études de précision, dérives
  analytiques, erreurs fortuites)
• Contrôles commerciaux
• Pool de sérums lyophilisés, contrôlés et garantis
  (? la sécurité)
• Contrôles par les résultats des patients
• Pool des valeurs obtenues sur les patients "tout
  venant" (exemple bilan d'entrée)
• Contrôles interlaboratoires 3 catégories
• - interhospitaliers
• - régionaux (Région Rhône-Alpes Pro Bioqual)
• - national de qualité (CNQ, obligatoire depuis
  1976, sous l'égide de l'Agence du Médicament et
  sous contrôle de la SFBC depuis 1993, peut avoir
  pour conséquence des sanctions).

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique

• SANG
• Conditions de prélèvement
• sujet à jeun depuis 10h
• prélèvement entre 7h et 10h (si possible après 7
  à 8h de sommeil)
• pas dexercice intense pendant les 2 jours
  précédant le prélèvement
• pas de tabac pendant les 2 heures précédant le
  prélèvement
• repos assis 15 mn
• Modes de prélèvement 
• veineux veines superficielles, garrot éventuel
  peu serré, veinotubes
• capillaire pulpe doigts, lobe oreille, talon,
  vaccinostyles, microtubes
• sang artériolisé par massage du doigt,
  attention couveuses!!
• artériel artères fémorale ou humérale (gaz du
  sang, ammoniaque)
• Particularités
• Variations nycthémérales
• Clinostatisme, orthostatisme
• Etat pathologique ou physiologique particulier

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique

• SANG
• Etapes du prélèvement
• Se préparer (habillage, désinfection des mains,
  gants stériles)
• Installer le patient pour le prélèvement,
• Recueillir et/ou vérifier les informations
  administratives, physiopathologiques et
  thérapeutiques
• Choisir le matériel de ponction,
• Poser le garrot,
• Désinfecter le matériel de ponction
• Réaliser le prélèvement,
• Éliminer le matériel de ponction
• Identifier les tubes de prélèvement,
• Poser un pansement,
• Viser la fiche de prélèvement,
• Transmettre les tubes et le dossier patient pour
  analyse
• Important étiquetage, choix du tube (granules
  de séparation, anticoagulant),
• penser à éviter lhémolyse

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
Ponction de sang veineux
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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique

• SANG - Echantillons
• Sérum
• Coagulation spontanée du sang sans
  anticoagulant  qques minutes
• Risques liés au contact prolongé avec éléments
  figurés
• actuellement réduits (billes séparatives,
  silice activatrice)
• Intérêts  protéines spécifiques (immunochimie),
  lipides
• électrophorèse des protéines ou lipoprotéines
• plasma
• intérêts  manipulation aisée, risques réduits
  dhémolyse
• risques  interférence avec anticoagulants
• sang total
• valable pour lanalyse si substance en
  concentration identique
• dans globules rouges et plasma
• sang deprotéinisé
• lactate, pyruvate
• éléments figurés 
• séparation par sédimentation, centrifugation,
  gradients de densité
• Interférences dans les dosages effectués sur sang
  et échantillons
• hémolyse, bilirubine, triglycérides, médicaments

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique

• URINES
• De 24 heures ou échantillon unique
• Conditions de recueil standardisées
• boire correctement le jour précédent
• élimination de la première urine
• nettoyage local soigné
• flacon ou cantine prévus à cet effet
• Conservation  mercaptoethanol, HCL
• Contrôle du débit (créatinine)
• Modification du pH
• AUTRES LIQUIDES
• Larmes, sueur, salive
• Liquides de ponction
• Transsudats (pauvres en protéines)
• Exsudats (riches en protéines perméabilité
  membranaire)
• SELLES

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique

• TISSUS
• Ponction biopsie
• Traitements
• - préservant la structure tissulaire
• perfusion organe entier
• fragments ou tranches tissulaires (congelés ou
  en survie, Warburg 0,2 nm)
• coupes fines de tissus fixés (froid,
  paraformaldéhyde, glutaraldéhyde)
• broyats (mixage)
• - modifiant la structure tisssulaire
• homogénats (cylindre en verre piston Potter)
• destruction tissulaire (ultrasons, froid,
  tensio-actifs)
• isolement des constituants subcellulaires
• centrifugation différentielle
• purification par identification de marqueurs
  (enzymes)
• Culture cellulaire

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
méthodes préparatives et/ou séparatives

• DISSOCIATION CELLULAIRE
• Obtenir les informations métaboliques spécifiques
  de chaque type cellulaire nécessite lobtention
  de suspensions monocellulaires dont lanalyse est
  directe ou après prolifération en culture
• Dissociation des tissus
• Rupture mécanique (broyage, tamisage,
  fragmentation fine)
• Rupture de la MEC et des jonctions
  intercellulaires
• Enzymes protéolytiques
• Agents chélatants
• Méthodes combinées
• Prélèvements de suspensions cellulaires (sang,
  liquide amniotique)
• Séparation cellulaire
• Méthodes classiques de centrifugation ( ou-
  gradients de densité)
• Différences dadhésion au support
• nature  verre, plastique
• modifié  chimie, immunochimie
• Différences de croissance en culture (milieu
  sélectifs)
• Tri des cellules marquées (FACS, MACS)

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
méthodes préparatives et/ou séparatives

• CULTURE CELLULAIRE
• Définition 
• système ex-vivo où les cellules, la plupart du
  temps isolées, survivent, se multiplient,
  expriment des propriétés différenciées
• Méthodologie
• Fragments tissulaires ou suspensions cellulaires
• Supports de culture (parfois, enceintes)
• Conditions environnementales
• stérilité
• atmosphère contrôlée
• température contrôlée
• milieu de culture (nutritif, stimulant)

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MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
méthodes préparatives et/ou séparatives

• CULTURE CELLULAIRE
• Systèmes cellulaires
• Primoculture ou culture primaire
• Culture secondaire  souches ou lignées non
  définies
• lignées continues
• Interférences
• Autres cellules
• Support
• Contaminations
• Conservation des cellules
• cryopréservation (-80, - 196)
• quiescence
• Transport des cellules
• en culture
• congelées
• Applications