Microscop

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Microscopía de Fluorescencia
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Microscopía de Fluorescencia.

• Fluorescencia propiedad que poseen determinadas
  sustancias ( fluorescentes )de emitir, bajo la
  acción de radiaciones de onda corta, otras
  radiaciones de longitud de onda más larga.
• 
  
• 0.1 1 180
  340 750 400 . 103

Espectro Electromagnético
Ultravioleta
Infrarrojo
Rayos Gamma
RayosX
Visible
Microondas
Longitud de onda
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Microscopía de Fluorescencia

• Colorantes Fluorescentes cuando se exponen a la
  luz ultravioleta, se perciben como un cuerpo
  brillante sobre fondo oscuro. El color y la
  intensidad de luz que emiten es una propiedad
  característica de la molécula fluorescente
  utilizada.
• Los colorantes fluorescentes utilizados
  en la tinción de muestras clínicas, son
  detectados con ayuda del
• Microscopio de Fluorescencia.

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Microscopio de Fluorescencia-Contraste de Fases

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Tipos de Microscopía de Fluorescencia

• Primaria. La propia muestra posee fluorescencia.
• Secundaria muestra marcada con colorantes
  fluorescentes.
• Inmunofluorescencia la fijación del colorante
  fluorescente se realiza con un anticuerpo
  marcado.

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Inmunofluorescencia

• La base de una prueba inmunológica es la
  reacción Antígeno-Anticuerpo.
• Antígeno también llamados inmunógenos, son
  cualquier material que estimula la formación de
  un anticuerpo. En su mayoría son sustancias
  proteicas
• Determinante Antigénico la parte por la que un
  antígeno se une al anticuerpo.
• Hapteno pequeñas moléculas que no son capaces
  por sí solas de estimular la formación de
  anticuerpos, pero que unidas a otras moléculas
  más grandes, sí lo hacen.
• Inmunoglobulinas proteínas cuya característica
  definitoria es que en ellas reside la actividad
  de anticuerpo.

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InmunofluorescenciaAnticuerpos

• Estructura.

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Anticuerpos

• Funciones
• Reconocer un determinado antígeno y combinarse
  con él. Esta característica depende del idiotipo
  ó región variable.
• Desencadenar una serie de consecuencias tras la
  unión con el antígeno, lo cual depende de la
  región constante. Según el tipo de
  inmunoglobulina, existen distintas posibilidades
  como capacidad de atravesar la placenta ó no,
  distribución por el organismo, capacidad de
  fijarse a la superficie de determinadas células,
  capacidad de activar el complemento, etc.

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Inmunofluorescencia

• Inmunofluorescencia Directa
• Son ensayos que están limitados a la
  detección de antígeno, y que permiten el
  diagnóstico de enfermedades bacterianas,
  fúngicas, parasitarias y virales.
• Consiste en demostrar la presencia de un
  antígeno mediante reacción directa con un un
  anticuerpo específico, marcado con colorante
  fluorescente.
• El anticuerpo es obtenido a través de la
  inoculación del microscopio productor del
  antígeno en un modelo animal
• Es un método simple y rápido de
  realizar, con pocas reacciones inespecíficas, sin
  embargo es menos sensible.

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Inmunofluorescencia Directa
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Inmunofluorescencia

• Inmunofluorescencia Indirecta.
• Se puede usar tanto para la detección de
  antígenos como de anticuerpos.
• Es una técnica de doble capa en donde se
  aplica el anticuerpo sin marcar directamente
  sobre el sustrato que puede ser un antígeno u
  otro anticuerpo, y se visualiza por tratamiento
  con un suero anti-inmunoglobulina conjugado con
  fluorocromo.( por ejemplo hepatocitos ó células
  Hep-2 si buscamos anticuerpos antinucleares, ó
  leishmanias si buscamos anticuerpos
  antileishmania, células que contienen virus,
  Toxoplasma gondii, ó Treponema pallidum si
  buscamos anticuerpos contra estos agentes
  infecciosos )
• Este método es más sensible y produce una
  fluorescencia de mayor brillo, sin embargo es
  menos específico y puede dar lugar a mayor
  reactividad cruzada.

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Inmunofluorescencia Indirecta
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Inmunofluorescencia Indirecta detección de
Antígeno.
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Fluorocromos.

• Son sustancias que tienen la propiedad de
  emitir un fotón de una longitud de onda
  determinada cuando captan ( son excitados por )
  un fotón incidente de una longitu de onda
  característica.
• Ejemplos Isotiocianato de fluoresceína verde
  manzana.
• Rodamina Naranja brillante.
• Características
• Forman uniones con las proteínas pero sin afectar
  los grupos de combinación específica del
  anticuerpo.
• La fluorescencia se ve afectada por el pH
• El fenómeno de fijación disminuye la
  fluorescencia en 15 a 30 con respecto al
  colorante libre
• Las grandes intensidades de luz empleada,
  provocan también el desvanecimiento de la
  fluorescencia.

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Imágenes Teñidas con Fluorocromos
Neisseria
Mycobacterium
Treponema
Borrelia