La Biochimie mtabolique

1
La Biochimie métabolique
2
Le métabolisme cellulaire
3
Pour chaque métabolite

• Structure-fonctions
• Relations
• Séparation
• Quantification

4
Les Acides Aminés
5
Les Acides Aminés
6
Les Acides Aminés Protéinogènes - 1
7
Les Acides Aminés Protéinogènes - 2
8
Les Acides Aminés Protéinogènes - 3
9
Les Acides Aminés non Protéinogènes
10
(No Transcript)
11
Décarboxylation des Acides Aminés
12
AA Zwitterion
13
Courbe de dissociation de lHistidine
14
(No Transcript)
15
Analyseur automatique dAA en chromatographie
déchange de cations
16
Chromatographie de partage (sur papier)
17
Chromatographie sur colonne
18
(No Transcript)
19
Spectrophotométrie dabsorption
20
Analyseur automatique dAA en chromatographie
déchange de cations
21
(No Transcript)
22
(No Transcript)
23
(No Transcript)
24
(No Transcript)
25
(No Transcript)
26
(No Transcript)
27
(No Transcript)
28
(No Transcript)
29
LInsuline hormone peptidique
30
(No Transcript)
31
Les Glandes Hormonales
32
(No Transcript)
33
(No Transcript)
34
(No Transcript)
35
Séquence ordonnée des AA dun peptide ?
36
1
2
37
(No Transcript)
38
PITC
PTH-AA
39
Coupures endopeptidiques
40
Liaisons faibles

_
41
Structures secondaires
42
Structures secondaires
43
(No Transcript)
44
Structure de lInsuline(1)
45
Structure de lInsuline (2)
46
(No Transcript)
47
(No Transcript)
48
Repliement des protéines, exemples
FMN
Hème
Estradiol
49
(No Transcript)
50
(No Transcript)
51
PrP est une protéine de signalisation
Ligand
PrP
ext.
m.p
int.
Fyn
Cavéoline
Signalisation intracellulaire
Mouillet-Richard et al., 2000
52
The Human Prion Protein
53
PrPSc
PrPSc
Host PrP
PrPc
PrPc
PrPSc
PrPSc
PrPSc
PrPSc
Exogenous prions
Host prions
54
Structures secondaires de PrPc et PrPsc
PrPsc
PrPc
hélice ?
42
30
feuillet ?
3
43
coudes
32
11
boucles
23
16
55
a-Helix
ß-sheets
56
(No Transcript)
57
Le prion une contamination en chaine PrPc
?PrPscpuis la polymérisation de PrPsc
58
Structure quaternaire des protéines
4 x (Myoglobine)
Hémoglobine
59
Classification des Protéines

• Holoprotéines
• Globulaires
• Albumine
• Globulines (a, ß, ?)
• Histones
• Fibrillaires
• Solubles
• Fibrinogène
• Actine Myosine
• Insolubles
• Fibrine
• Collagène
• Kératine

• Hétéroprotéines
• Chromoprotéines
• Hb, Cytochromes
• Glycoproteines
• Transferrine
• Lipoprotéines
• HDL, LDL(Cholestérol)
• Phosphoprotéines
• Enzymes, récepteurs

60
Electrophorèse des Protéines
61
Electrophorèse des Protéines du sérum

62
Séparation en électrophorèse bidimensionnelle des
Protéines cellulaires de E.Coli
63
Chromatographie sur colonnes
64
Support Microparticules (résines ou
celluloses) chargées positivement. Autre
possibilité particules chargées négativement.
Chromatographie déchange dions
Support microparticules inertes et poreuses
(microcanalicules)
Chromatographie de filtration en gel
65
Chromatographie dadsorption (hydrophobe)
Chromatographie daffinité
mélange
mélange
Support
Ligand
Support Micro- particules hydrophobes
de
fixé sur des microparticules
Indice hydrophobicité ? ? ?
66
Purification dune protéine
Electrophorèse en gel de polyacrylamide
SDS SDS-PAGE
A chaque étape 1. repérer lactivité
biologique 2. SDS-PAGE
67
SDS - PAGE
Marqueurs de PM
68
Structure dune Immuno-Globuline G
69
Immunoglobulines
70
Détection dune protéine spécifique par Western
blot (Immunoblot)
71
Dosage Immuno-enzymatique
72
Le Collagène
73
(No Transcript)
74
Myoglobine et Hémoglobine

• Fixation et transport de lO2

75
Myoglobine
76
Myoglobine
77
(No Transcript)
78
(No Transcript)
79
Hème
Chaine globine Hélice F
--O2
His F8
80
Myoglobine
Cinétique de fixation de lO2
P50 1 mm de Hg
P50 1/affinité Km pour une enzyme
81
protéine à structure quaternaire lHémoglobine
4 x (Myoglobine)
Hémoglobine (Hb)
82
Hb 4 sous unités identiques 2 à 2 a, ß
83
Hémoglobine a2ß2
Hème
2,3BPG
84
Hémoglobine
85
Organisation chromosomique des gènes des chaines
de Globine Humaine
86
Cinétique dexpression des gènes globines au
cours du développement
87
Cinétique de saturation de lHémoglobine en
fonction de la PO2
88
Changement de conformation de lHb lors de
loxygénation
89
La fixation d1 molécule dO2 ouvre la
structure quaternaire
90
Déplacement du Fe dans le plan de lhème lors de
loxygénation
91
La fixation d1 molécule dO2 ouvre la
structure quaternaire et favorise la fixation des
3 autres molécules dO2
92
(No Transcript)
93
(No Transcript)
94
(No Transcript)
95
Effet du pH et de la pCO2 sur la fixation dO2
96
Effet du 2,3 BPG Sur laffinité de lHb Pour lO2
2,3 BPG ou DPG
97
Effecteurs allostériques de lHb
98
Effet du DPG sur la fixation dO2
99
(No Transcript)
100
(No Transcript)
101
(No Transcript)
102
Transport coordonné de lO2, des H et du CO2
rôle de lAnhydrase Carbonique érythrocytaire
103
Hb de crocodile
5 CO2
Hb humaine
104
Le CO, un gaz toxique? fixation quasi
irréversible sur lHb
Hème
--O2
--CO
La présence de lhistidine E7 gène la
fixation du CO molécule moins fléxible que
lO2
105
Les Hémoglobinopathies exemple de la
drépanocytose (Hb S)