Diapositive 1

1
(No Transcript)
2
2 recherche directe de la mutation déjà
identifiée dans la famille  
2.1 mutation ponctuelle
A PCR - restriction
3
(No Transcript)
4
B ASO Allele specific oligonucleotide
1 - PCR DOT BLOT (dépôt sur membrane) 2 -
hybridation par oligosondes spécifiques de la
séquence normale de la séquence mutée
5
ASO
6
(No Transcript)
7
The line-probe assay (LiPA)
Biotinilated primer
8
C ARMS test ou allele specific PCR
9
DIAGNOSTIC GENOTYPIQUE
I - Etude directe   1 Recherche de la
mutation en cause dans la famille   criblage
du gène  SSCP Hétéroduplex
Protein truncation test  PTT
Séquençage D HPLC   2
recherche directe de la mutation déjà
identifiée dans la famille   2.1 mutation
ponctuelle   A - PCR-restriction B - ASO
allele specific oligonucleotide C - ARMS
allele specific PCR D - OLA
oligonucleotide ligation assay   2.2 détection
de délétion   2.3 détection dune
amplification de triplet   II- Diagnostic
indirect
10
PEO Penthaethylene oxide units
marquage fluorescent FAM HEX TET

• La sonde commune peut être marquée avec un
  fluochrome différent dans les PCR multiplex
• - Chaque sonde spécifique doit avoir une taille
  différente

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Oligonucleotide ligation assay OLA
Application de la technique OLA à la recherche
des principales mutations du gène CFTR
(mucoviscidose)