Diapositive 1

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LA TECHNIQUE DE COLORATION
2
LES ETAPES DE LA COLORATION DE GRAM
LES REACTIFS
? 1er colorant Violet de Gentiane
? 2ème colorant Fuschine ou Safranine
? Un fixateur ou mordant solution
Lugol (Solution iodée)
? Un décolorant Alcool absolu
? ?
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La coloration primaire

• ? Recouvrir de violet de gentiane en versant le
  colorant en bout de lame et en le faisant glisser
  le long de la lame.
• Laisser agir de 30 secondes à 1 minute.

? Rincer à l'eau déminéralisée pour éliminer
lexcédent de colorant
? ?
4
Mordançage ou fixation au lugol
? Pencher la lame et éliminer le violet de
gentiane en faisant couler sur la lame la
solution de lugol ? Laisser agir 30 secondes 
? Rincer à l'eau déminéralisée pour éliminer
lexcédent de lugol
? ?
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La décoloration à lalcool une étape cruciale
pour différencier les bactéries

• ? Verser quelques gouttes dalcool sur le frottis
  tenu verticalement jusquà ce que lalcool
  sécoule non teinté
• ? 5 secondes environ

? Rincer avec un jet de pissette deau
déminéralisée
? Nettoyer le dessous de la lame à lalcool puis
à leau
? ?
6
La coloration secondaire
? Recolorer par de la fuschine en versant le
colorant en bout de lame et en le faisant glisser
le long de la lame. Ne pas verser la fuschine
sur le frottis pour éviter une coloration trop
intense
? Laisser agir de 10 secondes à 20 secondes.
? Rincer avec un jet de pissette deau
déminéralisée
? Laisser sécher
? ?