Diapositive%201

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La Cytogénétique Onco-Hématologique
Antoine ITTEL Laboratoire de Cytogénétique
Onco-Hématologique Département de Génétique
Médicale CHU Timone Enfants, Marseille
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La Cytogénétique Onco-Hématologique

• Principe général
• recherche danomalies chromosomiques acquises
  chez lenfant et ladulte
• uniquement détectables dans la moelle osseuse,
  le sang, ou les organes lymphoïdes secondaires
  (au sein dun clone cellulaire)

Daprès http//atlasgeneticsoncology.org
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Hématopoïèse

• Moelle osseuse os iliaque, sternum, vertèbres,
  sacrum, côtes, extrémités fémur et humérus
• Cellules souches autorenouvellement,
  totipotence, engagement en différentiation
  cellulaire
• Pathologie en Hématologie
  prolifération clonale à départ médullaire
• Degré denvahissement médullaire à prendre en
  compte pour linterprétation des anomalies

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Intérêt de la Cytogénétique en Onco-Hématologie
Permet de confirmer un diagnostic suspecté
certaines anomalies sont spécifiques dune
pathologie donnée
Exemple la leucémie myéloïde chronique
Age médian 50 ans 15 des leucémies de
ladulte Découverte fortuite (baisse état
général, splénomégalie) - Hémogramme
hyperleucocytose de 50 à 300 G/L (norm 4 à 10
G/L) avec polynucléose (90-95) et myélémie et
hyperplaquettose - Myélogramme syndrome
myéloprolifératif
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95 LMC t(922)(q34q11)

• Traitement adapté anti-tyrosine kinase
  (Glivec, Sprycel)

FISH
Caryotype 46,XY,(922)(q34q11)
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Intérêt de la Cytogénétique en Onco-Hématologie
Permet de fournir des arguments pronostiques
influençant la prise en charge thérapeutique
Exemple la leucémie lymphoïde chronique

• Adulte de 50 ans
• 3-10 nouveaux cas/an pour 100 000 habitants
• Découverte fortuite à lhémogramme
• (adénopathies, spénomégalie)
• Prolifération anarchique dun clone lymphocytaire
  B portant un marqueur aberrant T
• Hémogramme au moins 5G/L lymphocytes, en
  général de 30 à 50G/L
• Immunophénotypage
  score de Matutes 4 ou 5/5

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LLC
Caryotype
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LLC
FISH
ATM (11q22.3-q23.1) Rôle dans la réparation de
lADN, la régulation du cycle cellulaire,
lapoptose
FISH ATM/CEP11

• Nécessité de mise en place dun traitement plus
  précocément, résistance thérapeutique, rechute
  précoce, survie globale significativement plus
  courte

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LLC
FISH
p53 (17p13.1) gène suppresseur de tumeur
FISH p53/CEP17

• Pronostic défavorable
• survie globale plus courte et non-réponse
  absolue au traitement par fludarabine ou
  pentostatine

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LLCAnomalies cytogénétiques et pronostic
Sur une série de 325 patients souffrant de LLC
Anomalie Nombre patients () Médiane de survie
(mois) del 17p 7 32 del11q 18 79 12 16
114 Normal 18 111 del13q 55 133
Döhner et al. NEJM 2000
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La Cytogénétique Onco-Hématologique

• Prélèvements
• Moelle osseuse au moins 2ml sur seringue
  héparinée
• Sang au moins 8ml sur tube hépariné (20
  millions de cellules)
• Ganglion

• SLP, LA hyperleucocytaires
• Sang

• SMD, LAL et LAM, SMP, myélomes, cytopénies
• Moelle osseuse

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La Cytogénétique Onco-Hématologique

• Mise en culture
• RPMI sérum de veau fœtal
• Durée de 24 (cellules leucémiques à index
  mitotique élevé) à 96h
• Additifs spécifiques du type cellulaire
  dintérêt (5637, IL2 DSP30)
• Synchronisation FUDR (augmente résolution de
  lanalyse)

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La Cytogénétique Onco-Hématologique

• Choc hypotonique
• KCl 37C
• Fixation méthanol et acide acétique (¼ - ¾)
• Culot cytogénétique

• Etalement sous Thermotron (température et degré
  dhumidité constants)
• Cytogénétique conventionnelle caryotype
• Cytogénétique moléculaire FISH

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La Cytogénétique Onco-Hématologique

• Caryotype
• Résolution 300-400 bandes
• Repérer les anomalies de nombre et de structure
• Classer au moins 20 mitoses
• Pour affirmer quune anomalie est clonale
• trisomie 2 métaphases
• monosomie 3 métaphases
• de structure 2 métaphases

LAL hyperdiploïde 56,XXYY,der(1),4,9,10,11,14
,18,21,21

• NB
• Mosaïcisme fréquent reflète le degré
  datteinte des cellules (attention aux caryotypes
  faussement normaux, aux anomalies cryptiques)
• Possibilité de détecter différents clones
  porteurs danomalies distinctes (anomalie
  primaire présente dans toutes les cellules
  anomalie secondaire surajoutée à lanomalie
  primaire)

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La Cytogénétique Onco-Hématologique

• FISH
• Permet de confirmer des anomalies mises en
  évidence au caryotype monosomie, trisomie,
  délétions, remaniements
• Sensibilité plus forte met en évidence des
  anomalies invisibles au caryotype
• Utile en cas déchec de caryotype

Exemple leucémie aiguë avec remaniement du
locus MLL

• Fréquence
• 70 des LA du nourrisson (LAL et LAM)
• 7 des LAL de lenfant (après 2 ans)
• 5 des LAL de ladulte
• 5 des LAM de ladulte
• Hématologie
• Hyperleucocytose
• LAL-B mais aussi LAL-T (8 des LAL-T)
• LAM LAM 4 ou M5
• Cytogénétique réarrangement de la bande 11q23
  avec gt 60 partenaires

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FISH remaniement de MLL
MLL Vysis (cen 5 sg/tel 3 so)

• MLL rôle de facteur régulateur de transcription
  rôle dans lhématopoïèse
• pronostic intermédiaire
• très défavorable chez le nourrisson

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La Cytogénétique Onco-Hématologique

• Evolution rapide ces dernières années
• FISH en pratique courante
• Importance pour donner des arguments
  diagnostiques et pronostiques
• Autre technique CGH-array
• Très prometteuse pour le futur

M-FISH
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REMERCIEMENTS
Département de Génétique Médicale du Pr LEVY

• Laboratoire de Génétique Chromosomique
• Pr Anne MONCLA
• Dr Chantal MISSIRIAN
• Dr Cornel POPOVICI
• Ophélie PETIT-PRENANT

• Laboratoire de Cytogénétique Onco-hématologique
• Dr Hélène ZATTARA
• Dr Marina LAFAGE
• Dr Elise KASPI

• Laboratoire dHématologie des Pr SEBAHOUN et Pr
  MORANGE
• Dr Véronique BACCINI