Gradua

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• Graduação em Biotecnologia
• Disciplina de Técnicas Instrumentais
• Prof. Fabricio Rochedo Conceição
• fabricio.rochedo_at_ufpel.edu.br
• fabriciorc_at_pop.com.br

CENTRIFUGAÇÃO
18 de junho de 2010
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CENTRIFUGAÇÃO

• A centrifugação é um processo de separação em
  que a força centrífuga relativa gerada pela
  rotação da amostra é usada para sedimentar
  sólidos em líquidos, ou líquidos imiscíveis de
  diferentes densidades, separando-os
• É usada em diferentes aplicações laboratoriais,
  industriais e domésticas

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Princípio Físico

• A força centrífuga relativa (FCR) é gerada
  quando uma partícula ou conjunto de partículas é
  sujeito a um movimento circular
• A força centrífuga relativa é calculada da
  seguinte forma
• FCR 0.00001118 R N2
• R raio de centrifugação em centímetros (cm)
• N velocidade de centrifugação em rotações por
  minuto (rpm)
• A unidade de medida da força centrífuga relativa
  é o "g", sendo 1g equivalente à aceleração da
  gravidade na superfície da terra

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CENTRÍFUGAS

• São equipamentos que aplicam a força centrífuga
  relativa para separar as partículas de uma
  solução
• Células
• Vírus
• Organelas
• DNA, RNA e proteínas ...

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CENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIAL

• Peletização
• Sobrenadante pellet (sedimento)

CENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTE

• Separação de macromoléculas ou células
  recorrendo a gradiente de concentração da solução
  base usada para a separação das partículas

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(No Transcript)
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TIPOS DE CENTRÍFUGAS
Bancada
Clínica
Microcentrífuga
4.600g 0,2 75 mL
17.000g 2 180 mL
16.000g 0,2 2 mL
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TIPOS DE CENTRÍFUGAS
Alta velocidade
Ultracentrífuga
15.000g 30 500 mL
800.000g 10 60 mL
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ROTOR OSCILANTE

• Separa suavemente as células
• Mais demorado

ROTOR DE ÂNGULO FIXO

• Concentração de amostras
• Mais rápido
• Pode danificar as células

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COMO CENTRIFUGAR?
1- Escolha da centrífuga e dos tubos -
Volume - Composição do tubo
Baixa FCR (plástico,
vidro ...)
Alta FCR (nitrocelulose, polialômero ...)
- Composição da amostra
Aquosa (plástico, vidro)
Orgânica (vidros e
certos plásticos) 2- Equilibre os tubos
- Os tubos colocados frente a frente devem
ter o mesmo peso - Microcentrífuga
ajuste pelo volume e não pelo peso -
Equilibrar juntamente com tampas e suportes
(partes removíveis) - Preencha os tubos
até 1 a 2 cm da borda 3- Confira o peso 4-
Coloque os tubos sempre na mesma orientação
Aba do Eppendorf
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COMO CENTRIFUGAR?
5- Sempre colocar a cobertura do rotor
- As centrífugas geram aerossóis
- Quebra do tubo 6-
Ajustar os parâmetros de centrifugação
- Velocidade (RPM x FCR) - Temperatura
- Tempo 7- Sempre espere a centrífuga
alcançar a velocidade máxima antes de se
afastar 8- Após a centrifugação gentileza
para remover tubos
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COMO CENTRIFUGAR?
9- Remova o sobrenadante
- Decantação (inversão do tubo) aerossóis
- Aspiração
10- Limpe suportes e rotor 11- Secar o interior
da centrífuga 12- Folha de registros e de
reserva - Vida útil do rotor
segurança -
Manutenção 13- Feche a tampa das centrífugas
refrigeradas no intervalo de uso para
evitar condensação