Diapositiva 1

1
LE MALATTIE DEL SANGUE
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EMOPATIE NON NEOPLASTICHE
LEUCOCITOSI
LEUCOCITI
LEUCOPENIE
CARATTERISTICHE GENERALI PATOGENESI QUADRI SPECI
FICI
PIASTRINOSI
PIASTRINE
PIASTRINOPENIE
POLIGLOBULIE
ERITROCITI
ANEMIE
3
EMOPATIE NEOPLASTICHE
Leucemia linfoblastica acuta Leucemia linfatica
cronica Leucemia prolinfocitica Leucemia a
cellule capellute Linfomi di Hodgkin Linfomi non
Hodgkin
CELLULE LINFOIDI
LEUCOCITI
Leucemia mieloide acuta Leucemia mieloide
cronica Sindromi mielodisplastiche Mielofibrosi
idiopatica
CELLULE MIELOIDI
PIASTRINE
Trombocitemia primitiva
Policitemia vera
ERITROCITI
4
APLASIA MIDOLLARE emocromo
Esame Risultati U.M. Intervallo di
riferimento Globuli bianchi (WBC)
1.0 x103/µL 4.0 - 10.8 Globuli rossi
(RBC) 4.0 x106/µL 4.5 -
5.5 Emoglobina (Hb) 8.5 gr/dl 14.0 -
18.0 Ematocrito (Hct) 28.0 42.0 -
52.0 MCV 88.0 fl 82.0 - 94.0 MCH 26.0 pg
27.0 - 31.0 MCHC 33.0 gr/dl 32.0 -
37.0 Piastrine (Plt) 22.0 x103/µL 130.0 -
400.0 Neutrofili 44.0 40.0 -
74.0 Linfociti 45.0 20.0 - 45.0 Monociti
8.0 3.4 - 9.0 Eosinofili 1.5
0.0 - 8.0 Basofili 1.5 0.0 -
15.0
5
APLASIA MIDOLLARE biopsia midollare
6
APLASIA MIDOLLARE biopsia ossea
7
LEUCEMIA ACUTA emocromo
Esame Risultati U.M. Intervallo di
riferimento Globuli bianchi (WBC)
40.0 x103/µL 4.0 - 10.8 Globuli rossi
(RBC) 4.1 x106/µL 4.5 -
5.5 Emoglobina (Hb) 9.2 gr/dl 14.0 -
18.0 Ematocrito (Hct) 30.0 42.0 -
52.0 MCV 88.0 fl 82.0 - 94.0 MCH 27.0 pg
27.0 - 31.0 MCHC 33.0 gr/dl 32.0 -
37.0 Piastrine (Plt) 40.0 x103/µL 130.0 -
400.0 Neutrofili 10.0 40.0 -
74.0 Linfociti 74.0 20.0 - 45.0 Monociti
12.0 3.4 - 9.0 Eosinofili 2.5
0.0 - 8.0 Basofili 1.5 0.0 - 1.5
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LEUCEMIA ACUTA biopsia midollare
9
LEUCEMIA ACUTA biopsia ossea
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LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA emocromo
Esame Risultati U.M. Intervallo di
riferimento Globuli bianchi (WBC)
56.2 x103/µL 4.0 - 10.8 Globuli rossi
(RBC) 4.5 x106/µL 4.5 -
5.5 Emoglobina (Hb) 11.0 gr/dl 14.0 -
18.0 Ematocrito (Hct) 35.0 42.0 -
52.0 MCV 84.0 fl 82.0 - 94.0 MCH 30.0 pg
27.0 - 31.0 MCHC 33.0 gr/dl 32.0 -
37.0 Piastrine (Plt) 420.0 x103/µL
130.0 - 400.0 Neutrofili 73.0 40.0 -
74.0 Linfociti 20.0 20.0 - 45.0 Monociti
4.0 3.4 - 9.0 Eosinofili
1.0 0.0 - 8.0 Basofili 2.0
0.0 - 1.5
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LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA biopsia midollare
12
LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA biopsia ossea
13
LEUCEMIA LINFATICA CRONICA emocromo
Esame Risultati U.M. Intervallo di
riferimento Globuli bianchi (WBC)
25.0 x103/µL 4.0 - 10.8 Globuli rossi
(RBC) 4.5 x106/µL 4.5 -
5.5 Emoglobina (Hb) 14.0 gr/dl 14.0 -
18.0 Ematocrito (Hct) 43.0 42.0 -
52.0 MCV 86.0 fl 82.0 - 94.0 MCH 33.0 pg
27.0 - 31.0 MCHC 34.0 gr/dl 32.0 -
37.0 Piastrine (Plt) 250.5 x103/µL
130.0 - 400.0 Neutrofili 20.0 40.0 -
74.0 Linfociti 76.0 20.0 - 45.0 Monociti
4.0 3.4 - 9.0 Eosinofili
0.0 0.0 - 8.0 Basofili 0.0
0.0 - 1.5
14
LEUCEMIA LINFATICA CRONICA biopsia midollare
15
LEUCEMIE ACUTE Fisiopatologia e
Clinica Eziopatogenesi ed epidemiologia
16
(No Transcript)
17
(No Transcript)
18
LEUCEMIE ACUTE FISIOPATOLOGIA

• INSUFFICIENZA MIDOLLARE
• 2) INFILTRAZIONE DI TESSUTI E ORGANI NON
  EMOPOIETICI DA PARTE DELLE CELLULE BLASTICHE
• 3) LIBERAZIONE DI CITOCHINE

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LEUCEMIE ACUTE CLINICA

• INSUFFICENZA MIDOLLARE
• INSUFFICIENTE PRODUZIONE ERITROCITI
• astenia, cardiopalmo, dispnea
• INFUFFICIENTE PRODUZIONE PIASTRINE
• porpora, ecchimosi, epistassi, gengivorragie,
  disturbi del visus, ipermenorrea, metroraggie
  piu rare macroematuria, emorragie tratto GI, SNC
• INSUFFICIENTE PRODUZIONE LEUCOCITI
• infezioni

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LEUCEMIE ACUTE il DANNO DELLE CELL. LEUCEMICHE
21
EZIOPATOGENESI DELLE LEUCEMIE ACUTE
HSC
Fattori ambientali
Alterazione genetica
progenitore mieloide/linfoide
X ?
? altro evento trasformante
Condizioni ereditarie
cellule leucemiche
Cellule mature
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FATTORI AMBIENTALI ED EPIDEMIOLOGIA

• Radiazioni ionizzanti
• Sorgenti elettriche/magnetiche

Agenti fisici

• Benzene (sigarette, industrie
• inquinamento atmosferico)
• Altri composti aromatici
• Ossido di etilene
• Fenossi-erbicidi
• Uretano, nitrosamine (sigarette)
• Chemioterapia (es. alchilanti)

Agenti chimici

• HTLV-1
• EBV

Agenti virali
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CONDIZIONI EREDITARIE

• Sindrome Down (trisomia 21)
• Sindromi con deficit del DNA-repair
• (S. Bloom, Anemia di Fanconi)
• Sindromi da immunodeficienza
• (S. Wiskott Aldrich)

Sindromi ereditarie
Alto rischio familiare di LA

• Monosomia del 7 (SMD)
• Mutazione AML-1

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LEUCEMIE ACUTE ALTERAZIONI GENETICHE
TRASLOCAZIONI CROMOSOMICHE
Promoter/Enhancer
Gene cromosoma A
Promoter/Enhancer
Gene cromosoma B
Gene di fusione A/B
Promoter/Enhancer
I
Gene di fusione B/A
Promoter/Enhancer
Gene del cromosoma A regolato dal promoter
del gene del cromosoma B
II
Promoter/Enhancer
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TRASLOCAZIONE AML1-ETO
CBFß
AML1
Sito CBF
Geni target
ETO
AML1
NCor
Sito CBF
Geni target
HD
26
RAS signalling cascade
27
(No Transcript)
28
RAS signalling pathways
29
(No Transcript)
30
DELEZIONI CROMOSOMICHE E MONOSOMIE
Alcun tipi di delezioni del 5q Delezione del
cromosoma 17 (p13) Monosomia 7 e delezione 7q
Perdita di geni oncosoppressori
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Cytogenetic Abnormalities in Adult ALL
t(922) (20-30)
BCR-ABL
TAL1 TAL2 LCK TAN1 LYL1 RHOM1 RHOM2 TCL1 HOX11
7q35 (3-5)
Diploid and others (30-40)
TCR b
14q11 (5)
TCR a/ d
? 13q14
Ig k Ig l Ig H
8q24 (1-2)
C-MYC
ETV6-AMLI
E2A-PBX1
t(1221) (1-2)
t(119) (5-7)
AF4-MLL
p16/p14/p15
t(411) (5-7)
AF1P AF10 ENL ? ATM
MLL
9p21 (7-15)
11q23 (3-4)
Faderl S, et al. Cancer. 2003981337-1354.
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EPIDEMIOLOGIA DELLE LEUCEMIE ACUTE
Incidenza 3,5 casi/100000 abitanti/anno

• Ogni età
• Età mediana 60-65
• Esposizione professionale
• o iatrogena a Rx, benzene,
• chemioterapici

LAM

• 80 delle LA per età lt 15 aa
• 20 delle LA nelladulto
• Agenti ambientali (?)
• eziologia virale (EBV, HTLV-1)

LAL
33
LEUCEMIE ACUTE PROCEDURE DIAGNOSTICHE
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LEUCEMIE ACUTE DIAGNOSI
SANGUE PERIFERICO ASPIRATO MIDOLLARE
IMMUNOFENOTIPO (Citofluorimetria) CARIOTIPO BIOLO
GIA MOLECOLARE
35
CITOFLUORIMETRIA
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Citofluorimetria definizione
Tecnica multiparametrica che misura le
caratteristiche fisiche e/o chimiche di cellule
in sospensione allinterno di un fluido di
trasporto

• Tre componenti
• Fluida
• Ottica
• Elettronica

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Citofluorimetria principi base
Nel citofluorimetro, singole cellule passano
allineate attraverso un sistema di
rilevazione ottico/elettronico.
scatter di
luce Parametri misurati
fluorescenza
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Camera di flusso (componente fluida)
Allinterno della camera di flusso, le particelle
sono in fila grazie alla differenza di pressione
tra il campione ed il fluido di trasporto
Il raggio laser, di forma ellittica, è
focalizzato in modo da colpire le cellule Al
centro del canale di contafluido di trasporto
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Componente ottica
Un microscopio usa la luce per illuminare le
cellule sul vetrino
Un citofluorimetro usa una fonte di luce
monocromatica da focalizzare sulle cellule
Fonte di luce LASER (Light Amplification
by Stimulated Emission Radiation)
40
Forward scatter
Forward scatter indicatore relativo delle
dimensioni cellulari
41
Side (90o) scatter
Indicatore relativo della complessità cellulare
interna (granuli)
42
Misura della fluorescenza
Le diverse emissioni di colore per diverse
sostanze fluorescenti vengono separate da filtri
ottici per cui si possono analizzare
separatamente le diverse fluorescenze
Laser
FALS Detector
Frequency
Fluorescence
I fotomoltiplicatori trasformano I segnali
luminosi in impulsi elettrici Direttamente
proporzionali alla luce Raccolta e gli impulsi
vengono elaborati Da un software (conversione
analogico-digitale)
Fluorescence detector (PMT3, PMT4 etc.)
43
Misura della fluorescenza utilità

• Le cellule possono essere identificate grazie
  alle loro
• molecole di superficie e relativo specifico
  marker (CD,
• cluster di differenziazione)
• Anticorpi monoclonali per specifici antigeni CD
  possono
• essere utilizzati per identificare il tipo di
  cellula
• Lanticorpo monoclonale può essere coniugato con
  un
• Fluorocromo (FITC, PE, Tandem ECD, PC5) e si
  può
• eseguire un test di immunofluorescenza diretta

44
Citofluorimetria analisi e output dei dati
I segnali luminosi, trasformati in impulsi
elettrici, vengono processati da un sistema di
conversione analogico-digitale
Plot degli eventi in scala grafica
Istogramma one-parameter
Dot-plots a due dimensioni
45
Citofluorimetria selezione della popolazione da
analizzare
Cluster analysis (software per analisi dei
dati) analisi di tutti i marker in relazione a
tutti gli eventi analisi di tutte
le sottopopolazioni cellulari
Gating (filtro dei dati) Forward
scatter versus side-scatter
CD45 versus side scatter analisi di una singola
sottopopolazione per volta
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Analisi citofluorimetrica nelle leucemie acute
immunofenotipo

• Diagnosi delle leucemie acute
• Classificazione delle leucemie acute
• Monitoraggio malattia minima residua
• (sensibilità 10-3 10-4)

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(No Transcript)
48
(No Transcript)
49
(No Transcript)