Etude de la prot

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La Technique du Peignage Moléculaire
Charlène Chaix Département de génétique
médicale Marseille, France
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------------------ Colloque ATCLF

Aix-en-Provence 20/09/2010
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• Le principe
• Technique danalyse de lADN
• ADN en double hélice
  ADN peigné

(Forme repliée)
(Forme étirée)
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Les étapes du protocole de peignage moléculaire

• Extraction de lADN préparation des plugs
• Préparation de la solution dADN à partir dun
  plug
• Peignage de lADN
• Hybridation
• Révélation

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Extraction de lADN

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Préparation de la solution dADN

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Peignage des molécules dADN

• Molécules dADN (100 kb 2 Mb)
• 100 génomes par lame
• Facteur détirement 2 Kb / µm
• Étirement constant
• Fixation irréversible de lADN peigné

106 cellules

Machine de peignage
ADN peigné ( yoyo ) observé au microscope
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Hybridation et Révélation

• Marquage indirect des sondes Hybridation de
  sondes spécifiques sur lADN peigné incorporant
  un nucléotide modifié.
• Détection des signaux par utilisation danticorps
  couplés à des fluorochromes reconnaissant le
  nucléotide modifié

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Résultats

• Visualisation des signaux à laide dun
  microscope à fluorescence automatisé à très haute
  résolution
• Lecture directe Délétions
• 
  Translocations
• Précision 1 Kb

19.5 kb
68 kb
155 kb
51 kb
4.3 kb
126.5kb
114 kb
Locus FSHD observé au microscope à fluorescence
(IXM)
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(No Transcript)
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La plateforme actuelle et ses futurs objectifs

• Actuellement Analyse semi-automatique
• Prochainement Transfert de la technologie en
  diagnostic
• Kit de diagnostic breveté bientôt disponible
• Automatisation de lanalyse par le logiciel
  Visilog