Aucun titre de diapositive

1
Stanovení poctu vybraných indikátorových
mikroorganismu v potravinách pomocí
automatizované metody TEMPO
Mikrobiologie potravin, IV. rocník Ústav hygieny
a technologie mléka, FVHE, VFU Brno Listopad 2011
2
TEMPO

• Automatizovaná metoda stanovení poctu MO
• Založena na principu MPN (miniaturizace metody)

3
MPN - Sériové redení inkubace
Inkubace
4
Stanovení poctu
3/2/2
Most probable Number
MPN statistická tabulka
x.10y cfu/g
5
TEMPO
3 rady zkumavek 16 zkumavek v jedné rade
6
TEMPO TC acidifikace
Total Coliforms (TC) Stanovení celkového poctu
koliformních MO fluorescencní pH indikátor
4-Methylumbeliferon (4MU)
Acidifikace media zpusobená rozkladem cukru
4MU bez fluorescence pH 6
4MU fluorescence pH ³ 7
Pozitivní není fluorescence
Negativní fluorescence
7

• Stanovení poctu E. coli

TEMPO EC
specifický enzymatický substrát pro detekci E.
coli 4-methylumbeliferyl-D-glukuronid (MUG)

b - D glukuronidáza (E. coli)
Glukuronát
4-methylumbeliferon
MUG
Pozitivní fluorescence
8
Detekce
- - - - - - - - - - - -
-

9
MPN kombinace
- - - - - - - - - - - -
-

MPN tabulka redení
cfu/g
16 / 15 / 4
10
TEMPO System
Príprava vzorku
Filler - Inokulace
Reader ctecka (interpretace výsledku)
Inkubace
11
TEMPO System
12
Plnící stanice Preparation station
Tempo kit
Filler
PC
Ctecka cárových kódu
Dispenzory
Stojánky
Vortex
13
TEMPO KIT - karta

• Cárový kód
• Barevné rozlišení

Transfer tube
Citlivá oblast, riziko kontaminace
14
TEMPO KIT -Vialky s médiem

• Dehydratované médium
• Cárový kód
• Barevné rozlišení

Vzorek potraviny PPV (10-1)
15
Redící roztok

• Sekundární
• Destilovaná voda
• STERILNÍ

Re-hydratace media ve vialce
16
REDENÍ
Redící roztok (sekundární) Vzorek (1/10) Celkov
ý objem Finalní redení
3 ml 1 ml 4 ml 1/40
3,9 ml 0,1 ml 4 ml 1/400
17
Stanovení poctu - rozpetí

• Redení 1/40
• 10 to 49 000 cfu/g
• Redení 1/400
• 100 to 490 000 cfu/g
• Redení 1/4000
• 1 000 to 4 900 000 cfu/g

18
Príprava -Filler
Ctecka cárových kódu
Filler
Inkubace
Pripravené vzorky do filleru
19
Inkubace
TEMPO C / 24 - 27 h
30C /- 1C
37C /- 1C
20
Oznacení vzorku
21
Nactení cárového kódu vialky
22
Po naskenování karty
Nastavení redení
23
Ctecí stanice
24
Kontola doby inkubace
25
TEMPO - ctecka
5.3 E4 CFU/g