1. dia

1
(No Transcript)
2
Transzdukció
Bakteriofágok közvetítte genetikai információ
csere Két fo bakteriofág típus Virulens
fágok/lítikus fágok fertozik a sejtet, gyorsan
szaporodnak, lizálják a sejtet Mérsékelt
fágok/temperált fágok fertozik a sejtet, be
tudnak épülni a genomba és profágként alvó
állapotban néha kivágódnak, szaporodnak és
lizálják a sejtet
3
Bakteriofágok morfológiája változatos RNS-t vagy
DNS-t tartalmaznak fehérje burokban Szinte
minden baktériumnak van fágja.
4
A gazdabaktériumuk sejtjének felületén lévo
specifikus receptorhoz kapcsolódnak Nukleinsavukat
a gazda sejtbe injektálják
Smithsonian (Oct 2000)
T4 bakteriofágok egy E. coli sejt felületén
5
Mérsékelt fág A gazda genomba épül be félalvó
állapot (a baktérium így lizogén bakt.) (pl. ?
bakteriofág)
6
Fágkonverzió
Az alvó profág az integrálódott bakteriofág a
mikróba fenotípusát megváltoztató géneket
hordoz - pl. a patogének és a toxin
termelés
toxin profág
inzerciós hely (att site)
Corynebacterium diptheriaea A fág génekrol
termelodik a toxin. Ez betegíti meg az embert.
C. diptheriaea A fág nélkül a törzs nem termel
toxint. Nem okoz diftériát.
7
A fágfertozés lizogén útvonala
8
Transzdukció (specializált)

• specializált transzdukció
• LFT, kis frekvenciájú transzdukáló lizátum
• HFT, nagy frekvenciájú transzdukáló lizátum
• A specializált transzdukció ? fág

9
A specializált transzdukció egyszeru mechanizmusa
10
Specializált transzdukció (Hibás kivágódás!!!)
11
Specializált transzdukció

• ? fágnál (gal, bio markerek)
• A profág pontatlan kivágódásával
• A profág beépülése melletti gének is bejutnak a
  fágfejbe
• Kis gyakoriságú jelenség
• A hiba folytán kis valószínuséggel keletkeznek
  olyan fágok is, melyek hordoznak baktérium gént
• LFT, kis gyakoriságú transzdukáló lizátum
• Mivel a lambda fág fejmérete nagyobb, mint ami a
  fág DNS-hez szükséges méret (75-109)
  transzdukció esetén fág funkció sérülhet
  (defektív fág, minél nagyobb az átvitt bakterium
  DNS darab annál defektívebb a fág)

12
(No Transcript)
13

• Ha a fág defektív, helper fág kellhet a sikeres
  lizogénia kialakításához
• A termelésnél nincs probléma, mert a jelenlévo
  intakt fág funkciók biztosítják a normális
  muködést (többszörös genom ekvivalens)
• Transzdukáló fággal lizogenizált baktérium is
  elofordul
• Ugyanúgy indukálható, mint más lizogén
• Ha defektív, akkor nem keletkezik fágrészecske
• Ha a defektív funkciót teljes helper fággal
  kiegészítjük, indukció során az összes
  fágrészecske 50-a transzdukáló HFT High frequency

14
A virulens fágok egylépéses szaporodási
görbéje - A latencia periódus alatt a fággenom
replikálódik és a gazda genom teljesen leépül
15
A fágfertozés látható hatása a gazda DNS-re
T4 fág
DNS
Fertozés elott
Fertozés után
16
A fágfertozés lítikus ciklusa
17
Általános transzdukció (hibás pakolás!!!)
18
Transzdukció

• DNS átvitel baktérium sejtek között bakteriofág
  segítségével
• Általános transzdukció
• A transzdukáló fágrészecske csak bakteriális
  DNS-t hordoz
• Pszeudovirion, mert a saját szaporodásához
  szükséges tulajdonságokat nem hordozza

19
A fágok egy részénél fejméretu a pakolás, ami
lehet hibás is a pakoló mechanizmusnak nincs
specifikus felismero helye
Így pakol a Salmonella typhimurium P22 fágja és
B. subtilis PBS1fágja
20
Mi történik a recipiens sejteben?
21
A baktériumok közötti géncsere hatékony módja a
generalizált, vagy általános transzdukció Hibás
pakolás!!! Közeli genetikai bélyegek térképezése!
22
Példa transzdukió a Salmonella typhimurium P22
fágjával
P22 HT hatékony általános transzdukáló -
hanyag fág a fágrészecskék 50-ában gazda DNS,
azaz transzdukáló részecske ( transducing
particles TP) Minden fejben (TP) 44 kb-nyi DNS
a Salmonella genom kb. 4400 kb nagyságú Ezért,
ha a pakolás teljesen véletlenszeru, akkor 100
különbözo fágrészecske a teljes genomot
reprezentálhatja. 1011 P22 HT fág/ml
szaporítható tehát ebbol 5 x 1010 ben gazda
DNS van ? 1 ml-ben kb. 5 x 108 Salmonella
genomnyi (0.5)(1011 fág/ml)/(100 TP 1 genom)
108 genom kópia/ml a lizátumban
23
(No Transcript)
24
Transzformáció

• Pneumococcus (Stapylococcus) Bacillus
  transzformáció
• Kompetencia
• DNS felvétel/bejutás
• Donor DNS megtartása a recipiensben
• Más transzformációs rendszerek
• Haemophilus influenzae
• Escherichia coli
• Elektroporáció
• Protoplaszt transzformáció
• Transzfekció fág DNS-sel
• E. coli
• B. subtilis
• Géntérképezés transzformációval

25
Transzformáció

• Genetikai információátvitel (az elso amit
  felfedeztek)
• Donor sejt nagyméretu DNS-t bocsájt ki
• A DNS a tápközegben diffundál (a recipiens felé)
• A DNS transzportálódik sejtfalon, sejtmembránon
  keresztül a citoplazmába, ahol rekombináció
  történik
• Ez a transzformáció genetikai információátvitel,
  nem a normál sejtek tumorrá történo
  transzformációja (eukarióták esetén)

26
Jelentosége?

• Mivel a DNS könnyen degradálódik, azt gondolták
  nincs valós szerepe (csak a laboratóriumban)
  Ezzel szemben számos természetes genetikai
  transzformációs rendszer létezik Achrobacter,
  Azotobacter Bacillus, Butyvibrio, Campylobacter,
  Clostridium, Hemophilus, Micrococcus,
  Mycobacterium, Neiserria, Pseudomonas,
• Streptococcus, Streptomyces, Synechoccus
• Valamilyen jelentoségnek kell lennie
• Kimutatták még
• Talajba jutattott plazmid és kromoszóma DNS
  fennmarad, mi több a Pseudomonas stutzeri és a
  Bacillus subtilis transzformálódik is
• Egér gt DNS etetés után kimutatható a DNS a vérben
  is, így lehet olyan sejt is , amelyik felveszi (
  immunizálás )

27
Transzformáció felfedezése és utóhatásai

• Pneumococcus
• Sima, poliszacharid burokkal rendelkezo telep
• patogén
• Durva telep, kapszid poliszacharid hiánya
• Nem patogén
• Klasszikus transzformációs kísérlet
• Avery kimutatja a transzformáló elv a DNS
• Senki nem akarja elhinni
• Hershey és Chase DNS és fehérje radioaktív
  jelölés (külön)
• Watson és Crick, a DNS szerkezete
• Pneuomococcus Streptococcus pneumoniae
• Bacillus subtilis 168

28
Transzformáció

• A transzformáció az a folyamat, amikor a sejtek
  tiszta DNS-t vesznek fel és építenek be.
• Két fo típus
• Természetes transzformáció (a mikróbáknak csak
  kis csoportja)
• - általában lineáris DNS
• 2. Mesterségesen indukált (a legtöbb, de nem az
  összes mikroorganizmus képes így DNS felvételre)
• - általában plazmid DNS
• Az a sejt, amelyik képes a DNS felvételére az
  kompetens.

29
Mesterséges kompetencia
A molekuláris biológia egyik legfontosabb,
alapveto technikája, lehetoség, hogy idegen DNS-t
vigyünk be a baktérium gazdába. Gyakran csak
úgy érheto el, hogy mesterséges-kompetens
sejteket készítünk. Az E. coli felvesz és
replikál gyurus DNS-t. A mesterséges
transzformáció két típusa Kémiai
kompetencia Elektroporáció/elektrotranszformáció
PROTOPLASZT PoliEtilénGlikol PEG
30
Kémiai kompetencia Néhány baktériumba, köztük az
E. coli-ba, a kétértéku kationok, kis
homérsékleten segítik a plazmid DNS felvételét (
a lineáris DNS-t is felveszik, de a citoplazma
DNáz-ai gyorsan feldarabolják, még mielott bármit
is tudna tenni) Nem teljesen világos, hogy hogyan
is van.
Felvételi csatornák poliP, PHB, és Ca
31
Elektroporáció
Nagy térerosség átmeneti lyukakat eredményez a
sejtfalban Alkalmas körülmények között a DNS
be/ki szivárog. A kinti nagy plazmid
koncentráció gyors beáramlást eredményez.
Elektroporációs küvetta
Ide kerülnek a sejtek
32
A transzformáció hatékonysága?
Transzformációs gyakoriság Sejtszámra
(transzformánsok száma/µg DNS) 106-109/µg
pBR322 kb. 1011 plazmid/µg pBR322 úgy is
mérheto, hogy a sejtek hány -a kapott plazmidot
DNS-re a DNS molekulák hány -a
transzformált sejtet
Módszer sejtszámra DNS-re
kémiai 1 12
elektro 10 90
33
Természetes kompetencia/transzformáció gram-pozití
vokban Pl. Streptococcus pneumoniae Bacillus
subtilis -nem specifikus -korlátozott száumú
felvevohely (30-75) -nick képzodés -a
komplementer szál degradálódik a felvétel
közben -rekombináció a recipiensben
34
Természetes transzformáció gram-negatív Pl.
Haemophilus influenzae Neisseriae gonorrhoeae
-szekvencia specifikus -4-8 hely/sejt -nincs
sejthez kötött intermedier -dsDNS import a
periplazmába -komplementer degradálódik a
citoplazmába történo transzport
során -rekombináció a recipiensben
35
Gram-pozitív felvevo rendszer -jó gépezet a
sejtekbe történo DNS szállításra
a konjugációs rendszer fordítottja - néhány
komponense a Tra funkciókhoz hasonlít
36
Gram-negatív felvevo gépezet -ez se rossz -
keresztezni kell a periplazmát és a külso
membránt
37

• A folyamat energia ellátása?
• Intracelluláris ATP hidrolízis
• pH gradiens PMF (proton motive force)?
• komplementer degradáció
• Funkciója
• Tápanyag
• DNS repair
• Genetikai identitás/diverzitás

38
Transzformáció

• Kompetencia kialakulása
• DNS kötodés és bejutás
• A DNS integrációja a recipiens sejtben

39
Kompetencia

• Az alapelv nagyon hasonló (természetben
  eloforduló)
• Kompetencia az a képesség, mellyel a DNS
  megkötésre kerül, ezáltal védett lesz a
  nukleázokkal szemben
• A kompetencia idozítése különbözik
• Szinte minden esetben (amit tanulmányoznak)
  fejlett szabályozás alatt áll a kompetencia

40
A kompetencia fiziológiája

• Meghatározott fiziológiai állapot
• Valamely fejlodési szakaszhoz, vagy tápanyag
  ellátottsághoz kapcsolódik (legtöbbször, tápanyag
  hiány kialakulása kapcsolja be)
• B. subtilis esetében homérséklet csökkenés is
  kiválthatja (42Cgt37C)
• A szabályozó rendszerben olyan represszorok
  vannak, melyek
• egyrészt flagella és kemotaxis géneket
• másrészt kompetencia géneket aktiválnak

41

• Kivételek
• Bakteriofág is indukálhat kompetenciát
  (Staphylococcus aureus)
• Exponenciális növekedési szakaszban alakul ki a
  kompetencia (S. pneumoniae)
• A tenyészetben lévo kompetens sejtek száma
  változó (15 Bacillus-Streptococcus, 100)
• A kompetencia kialakulása függ a sejtszámtól

42

• Kompetencia kialakulása rövid ideig tart (pár
  perc)
• Stacioner fázisban
• Bacillusoknál, ha a kétszerezodési ido 150-390
  perc
• Mivel kemosztát kultúrában is van kompetencia, de
  nincs sporuláció, ezért a sporuláció nem
  szükségszeruen kapcsolódik a kompetenciához
• Hasonlóan a korai sporulációs génekben mutáns
  baktérium kompetens

43

• A B subtilis kompetens sejtek
• Kisebb suruséguek (gradiens centrifugálással
  elkülöníthetok a normál sejtektol)
• Kisméretuek
• Egy nem replikálódó genomja van
• A kompetens sejtek membránja 4 több PHB-t
  (polihidroxi-butirát) tartalmaz, (egyébként
  raktározó szerepe van)
• Segít egy transzmembrán csatornát kialakítani

44

• S. penumoniae
• Kompetens sejtek membránján kompetencia faktor
• Ez a közegbe is kikerül
• Ettol a nem kompetens sejtek kompetenssé válnak,
  úgy hogy a kompetencia faktor egy másik membrán
  fehérjéhez köt (comD terméke)
• A kompetencia faktor kötésével legalább 10
  fehérje kezd el szintetizálódni
• A kompetencia faktor megmagyarázza, miért kell
  nagy sejtsuruség, nagyobb a valószínusége, hogy
  megtalálja a receptorát
• A com lókusz mutációi megakadályozzák a
  kompetencia kialakulását

45

• comA terméke hasonlít az ATP függo transzport
  fehérjékhez (melyek toxin fehérjéket szállítanak
  a sejt felszínére, coli hemolizin gén)
• A kompetencia kialakulásával a sejtfal
  porózusabbá válik
• Az autolitikus enzimaktivitás növekszik
• Baktérium sejtek láncolata hosszabb lesz
• A legtöbb változás a sejt egyenlítoi síkjában
  következik be, ahol a növekedés történik, és ahol
  a DNS felvétel történik

46
DNS kötés

• Kompetens és nem kompetens sejt is köt DNS-t
• A nem kompetens sejtben lemosható a DNS, a
  kompetens sejtben nem mosható le egyszeruen
• EDTA hatására a DNS megkötodik, de minden további
  feldolgozás megáll
• Kb. 50 DNS köto hely van a kompetens B. subtilis
  felszínén
• A kötött DNS érzékeny a nukleázokra és a
  nyíróerokre
• Bármilyen eredetu DNS kötodhet
• Minimum 500 bp hosszú fragmens kell a kötéshez
• Egyszálú, glükozilált DNS, ds RNS, RNS-DNS hibrid
  nem kötodik

47
DNS bejutás

• A következo lépés a DNS bejutása a sejtbe
• A 3 végtol kezdve
• A bejutás elott a kötohely melletti endonukleázok
  megfelelo méretre hasítják a DNS-t
• Véletlenszeru hasítás
• Eredmény 15 kb-nál nem nagyobb DNS fragmensek
  (kisebb, mint amekkorát a transzdukáló fágok
  bejuttatnak)
• Az endonukleázoknak magnéziumra vagy kalciumra
  van szükség (ezért érzékeny az EDTA-ra)
• Ebben a fázisban, ha szétválasztjuk a DNS-t és a
  sejteket a kettos szálú DNS alkalmas a
  transzformációra

48

• Következo lépés az eklipsz komplex kialakulása
• A DNS kötodik egy kompetencia specifikus
  fehérjéhez
• Ezáltal a DNS egyszálú lesz
• Védett lesz a külso nukleáz hasítással szemben
• Teljesen véletlenszeru, hogy melyik szál hasad le
  és az is, hogy milyen helynél kezdodik a hasítás
• A lebomlott szál nukleotidjai a médiumba kerülnek

49
(No Transcript)
50
Mi magyarázza a transzformáció jelenségét

• Genetikai átváltozás
• Energia az elbontott DNS szálból
• Önmagában egyik sem magyarázza, de a ketto együtt
  igen

51

• Elektronmikroszkópos felvételek
• Adhéziós zónához hasonló részek a kompetens
  sejtekben (mint a T4 fág infekciókor)
• A bakteriális kromoszóma membránhoz kötött, a
  transzformáló DNS közvetlenül a célhoz jut
• Normál proton gradiens szükséges a DNS bejutáshoz
  (B. subtilis), ATP kell Streptococcus-nál
• A kompetencia indukció része a RecA és egy
  kapcsolódó fehérje (kolligrin) termelése
• A kolligrin membrán fehérje a RecA-t segíti a
  membránban
• Így a bejutó DNS rögtön rekombinációba lép (mert
  S. pneumoniae elektroporációval nem
  transzformálható)

52
A donor DNS sorsa

• Kompetens sejt homológ (saját) és heterológ
  (idegen) DNS-t is köt
• Mindketto egyszálú is lesz az internalizációkor
• Genetikai kicserélodés során kell lenni olyan
  folyamatnak, mely megakadályozza idegen DNS
  honosítását
• Bacillus és Streptococcus a rekombináció során
  diszkrimiál. Különbséget tesz idegen és saját
  (faj) DNS-e között

53

• Korrekt hidrogén hídkötés szükséges, ahol nincs
  ott nincs rekombináció és kizáródik a heterológ
  DNS
• Rekombinációban deficiensnél nincs transzformáció
• A rekombináció indukciója (nick-ek a recipiens
  DNS-ben) javítja a transzformáció hatékonyságát

54
(No Transcript)
55

• Az egyszálú DNS D-loop kialakításával kicseréli a
  recipiens homológ darabjátgttranziens heteroduplex
  alakul ki
• A hetroduplexben lehet néhány rossz párosodás,
  ezt a repair enzimek javítják
• A javítástól függoen elveszhetnek transzformánsok
• S. pneumoniae esetén Hex rendszer
• A Hex fehérje bizonyos helyeket felismer a
  genomon
• A helyek körül kijavítja a hibákat
• Azok a markerek, amelyek Hex felismero hellyel
  rekombinálnak elvesznek LE (low efficiency)
• Hex helytol távolabbi markerek nem vesznek el HE
  (high efficiency)
• a hex limitje a fehérje molekulák száma (ha sok
  transzformáló DNS-t adunk, telítodik a hex
  rendszer

56
Plazmid transzformáció

• Önállóan képes replikálódni, ha bejutott
• DE!! A bejutás során linearizálódik
• Egyszálú DNS-ként jut a citoplazmába, pedig a
  replikációhoz kétszálúnak kell lennie
• Egy plazmid molekula nem ad transzformánst,
  szinte mindig extra DNS is található
• Hogyan oldható meg, a recipiensben kell homológ
  DNS (vagy kromoszóma, vagy plazmid)
• Ha van homológ darab, akkor rekombinálódhat,
  cirkularizálódhat
• Ha homológ DNS darab kötodik a vektorhoz, akkor
  nagy gyakoriságú transzformációt kapunk
• Marker rescue (ha rezidens plazmidot használunk a
  transzformánsok visszanyerésének növeléséhez)

57
(No Transcript)
58
Más transzformációs rendszerek
59
Hemophilus influenzae

• Gram negatív organizmus
• Kompetencia kialakulása tápanyaghiányra
• Nukleinsav szintézis gátlás 100 kompetencia
  (fehérje szintézis esszenciális)
• Nincs kompetencia specifikus fehérje
• Csak más Hemophilus fajból vesz fel DNS-t
• A DNS-en kell lennie egy 11 bp-os darabnak
• Ez kötodik a sejt membránhoz

60

• DNS bejutása más
• Belso membrán kitüremkedik, kialakul a
  transzformaszóm
• Donor DNS kapcsolódik a receptorhoz
• Plazmid transzformáció nagyon kis gyakorisággal
• Noha ds DNS jut be a transzformaszómba a
  rekombináció egyszálú DNS-el jön létre

61
(No Transcript)
62
E. coli transzformáció

• Természetes körülmények között (spontán) nem
  transzformálódik
• Különleges esetekben kompetenssé válik
• Szferoplaszt
• Kalcium koncentráció, hosokk (90 sejthalál)
• Kobalt klorid és DMSO befolyásolja
• Subtilis-hez hasonlóan PHB halmozódik a
  membránban (kompetens sejtnél)
• Szabályozott folyamat, PHB szintézist a Ca
  elosegíti
• Plazmid DNS-el simán transzformálható, mert nem
  linearizálódik ezért fontos!!!! (lineáris DNS
  kisebb hatékonyság 1000)

63

• Lineáris DNS-el nem transzformálható
• Exonukleáz V bontja a DNS-t (ezt a rolling circle
  replikációhoz ki kell kapcsolni, lambdánál)
• Legtöbb transzformált coli törzs recB, recC (ExoV
  inaktív) és sbcB (rekombináció hiány szupresszor)
• Természetes transzformáció gátjai
• Nincs kompetencia (spontán)
• ExoV jelenléte
• Mindkettot ki lehet küszöbölni laboratóriumi
  körülmények között

64
Elektroporáció

• Elektro transzformáció
• Nagy feszültségu áram baktérium szuszpenzión
  keresztül
• Kis lyukak keletkeznek a sejtfalon
• Kis méretu plazmidok, vektor konstrukciók
  átjutnak
• Bejutás után hasonló, mint a többi
• Nagy sejtpusztulás, de sok baktériumsejtet lehet
  alkalmazni, elegendo a legtöbb kísérlethez
• E. coli esetén a leghatékonyabb (nagyobb
  transzformációs gyakoriság, nagyobb méretu DNS)

65
(No Transcript)
66
Transzfekció

• A donor DNS forrása nem baktérium sejt, hanem
  bakteriofág
• Az eredmény infekciós centrum, azaz plakk
• A hatékonyság plakk vizsgálattal végezheto
• Elonye
• A DNS populáció egységes
• Így követheto a DNS sorsa a transzformáció
  lépéseiben
• Vizsgálható a transzformáció jelensége
• Hasznos volt a rekombináció és repair
  tanulmányozásához (mesterséges heteroduplexeket
  hoztak létre fág és más DNS-el és vizsgálták a
  rekombinációt, javítást)

67
Térképezés transzformációval

• Gének kapcsoltságának megállapítása
  transzformációval
• Transzdukcióhoz hasonló elv
• Ha két távoli gént veszünk, azok egyszerre csak
  akkor transzformálhatnak, ha egy sejt egyszerre
  két DNS darabot épít be (egyik az egyik, másik a
  másik génnel)
• A közeli géneknél (kapcsolt) az együttes
  transzformánsok úgy is létrejöhetnek, hogy
  mindkét gén egy fragmensen van

68

• A csökkeno mennyiségu DNS-el történo
  transzformáció során kapcsolt gének esetén a
  recipiens egyszeres és kétszeres
  transzformánsainak száma megegyezik (mert a két
  gén ugyanazon a transzformáló donor DNS-en
  helyezkedik el)
• Távoli gének esetén, nagyobb a valószínusége
  annak, hogy külön DNS-en vannak, azaz, ha
  higítjuk a transzformáló DNS-t elobb utóbb, csak
  az egyik, vagy csak a másik gént tartalmazó
  DNS-el történik a transzformáció

69
(No Transcript)
70

• A két gén egyedi transzformációs gyakoriságának
  meghatározása után a két gyakoriságot
  összeszorozzuk (ez a várható transzformációs
  gyakoriság, ha a két gén nem kapcsolt)
• Ezt az értéket összehasonlítják a kétszeres
  transzformációs gyakorisággal, ha az utóbbi
  nagyobb, mint a várt érték, azaz az egyszeres
  transzformánsok gyakoriságához közelít, akkor a
  két gén kapcsolt

71

• Feltételezés
• A transzformáló keverékben ismert méretu és
  azonos nagyságú DNS darabok vannak
• A donor DNS átlagos nagyságától függ, hogy két
  gén kapcsolt-e
• Nagyobb DNS darabok esetén távolabbi gének is
  kapcsoltnak mutatkoznak
• A kapcsoltság így megállapítható
• Ha A gén kapcsolt B-vel, B gén kapcsolt C-vel,
  akkor a sorrend ABC

72
Géncsere/Genetikai térképezés baktériumokban

• Transzformáció, transzdukció és konjugáció

73
(No Transcript)
74
Genetikai információ átvitel baktériumokban

• Mindíg egy irányú donorból a recipiensbe
• Gének sorrendjének meghatározása
• Kapcsoltság
• Szelektált/nem szelektált marker
• Két és három pontos térképezés
• Genetikai és fizikai térkép

75
B. subtilis transzformációja
76
(No Transcript)
77
(No Transcript)
78

• Térképezés transzformációval
• A rekombinációs gyakoriságokból következtetünk a
  gének sorrendjére.
• p q o x p q o
• Ha p és q kotranszformációja gyakori, akkor a
  sorrend
• p-q-o.
• Ha p és o kotranszformációja gyakoribb,
  akkor
• p-o-q.

79
Genetikai térképezés transzformációval
Donor sejtbol DNS darabolódás
a b
b
a
a-b- recipiens transzformációja
Ha ab kapcsoltak (fizikailag közel vannak
egymáshoz), ab, ab- és a-b rekombinánsokat
kaphatunk. Ha nem szorosan kapcsoltak, akkor
csak ab- vagy a-b . Transzformált,
transzformáns.
80
PROTOPLASZT

• Baktérium, gomba, növény, állat sejtekbol
  protoplaszt
• DNS PEG
• Protoplaszt készítés sejtfalbontó enzimekkel
  lizozim, cellulázok, proteázok, mihez mi kell

81
KÉMIAI KOMPETENCIA

• Li-acetát S. cerevisiae
• KCl B. subtilis