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EVALUACION EXTERNA DE LA CALIDAD EN EL
LABORATORIO CLINICO Programas de evaluación
externa de la calidad analítica de Inmunología
MARIONA MESTRE PLAYÀ
SERVEI DIMMUNOLOGIA HOSPITAL UNIVERSITARI DE
BELLVITGE LHOSPITALET. BARCELONA
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(No Transcript)
3
HOSPITAL UNIVERSITARI DE BELLVITGE
Hospital de Referencia para la Región
sanitaria Costa de Ponent del Servei Català de la
Salut Población 1.100.000 habitantes Actúa como
hospital de Referencia para algunas
especialidades de Tarragona,Tortosa i Lleida
para una población que supera los 2.106
habitantes Actividad anual INGRESOS más de
26000 pacientes URGENCIAS más de 110000
pacientes CONSULTAS EXTERNAS más de 377000
pacientes
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(No Transcript)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA Comerciales BIO-RAD
EQAS Liquichek Immunology Control (levels
1,2,3) Magnitudes biológicas - IgA, IgG,
IgM - subclases IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) -
cadenas ligeras kappa y lambda - componentes
C3,C4 del sistema complemento - inhibidor del
C1esterasa - a1-antitripsina -
ceruloplasmina - prealbúmina
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA Sociedades Científicas SEQC
(PGCLC) IX Programa de Evaluación Externa de la
Calidad de los Laboratorios Clínicos Datos
correspondientes al año 2004 Publicados en
Química Clínica 2005 24 (4) 199-222 (Ramón F,
Alsina JM, Alvarez V y cols.)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Total participantes 226 laboratorios
inscritos Centros 187 laboratorios hospitalarios
(82,7) 39 laboratorios no
hospitalarios (17,26) Distribución
geográfica Catalunya (26,55)
Andalucía (17,26) Madrid
(10,18)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Desviación porcentual de una
determinación única
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Diferencia sistemática entre
métodos
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Métodos Turbidimetria Nefelometria
(cinética) Nefelometria (punto final) En
general, la imprecisión de los métodos utilizados
para la cuantificación de proteinas mejora si
se utilizan metodologías con calibradores
trazados al calibrador internacional CRM 470
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Complemento C3 (imprecisión global 9,5)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Complemento C4 (imprecisión global 15,7)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Inmunoglobulina A (imprecisión global
7,7)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Inmunoglobulina G (imprecisión global
6,9)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNOQUÍMICA IX Programa de Evaluación Externa
de la Calidad de los Laboratorios Clínicos
Inmunoglobulina M (imprecisión global 9,2)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

AUTOINMUNIDAD Comerciales QUAL-IMMUN Sociedade
s Científicas - Societat Catalana
dImmunologia (1995-2001) talleres
monográficos autoanticuerpos - Sociedad
Española de Inmunología (vigente) talleres
monográficos autoanticuerpos - Sociedad Española
de Bioquímica Clínica y Patología Molecular
(programa externo)
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

AUTOINMUNIDAD Sociedades Científicas
Societat Catalana dImmunologia (1995-2001)
talleres monográficos (trimestral) 6
hospitales públicos de Barcelona - consenso
de patrones de IFI (ANA) - optimización
titulaciones de positividades (IFI) -
comparación entre métodos IFI,RIA,ELISA,
immunoblotting, quimioluminiscencia -
definición de perfiles diagnósticos y
especificidades ANCAS MPO, PR3
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

AUTOINMUNIDAD Sociedades Científicas
- Sociedad Española de Inmunología
(vigente) talleres monográficos coincidentes con
el congreso anual de la SEI - síndrome
antifosfolípido - hepatopatías -
celiaquía - vasculitis - cuantificación
títulos ANA
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Sociedades Científicas -
Sociedad Española de Bioquímica Clínica y
Patología Molecular a partir de
2002 en colaboración con el programa implantado
en el Reino Unido (UK-NEQAS for Immunology and
Immunochemistry) Programa nº de muestras
12-6/año I.- Anticuerpos antinucleares y otros
(64) II.- Serología autoinmune general
(antitiroideos,triple tejido) (45) III.- ANCA y
MBG (28) IV.- Antifosfolípidos (13) Farré V,
Alarcón MI, Alsina M y cols. Química Clínica
2005 24 (4) 250-262

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales QUAL-IMMUN biomedical
diagnostics (bmd) (Marne-La Vallée.
France) Periodicidad 2 envíos/año QUAL-IMMUN
1 198 inscritos (86 respuestas, Internet
27) ANAac. antinucleares DNA ac.
anti-dsDNA ENA ac. anti-antígenos solubles del
núcleo QUAL-IMMUN 2 131 inscritos (76
respuestas, Internet 25) TPO/TG ac.
antitiroideos Ts ac.específicos de órgano en
triple sustrato

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales QUAL-IMMUN biomedical
diagnostics (bmd) (Marne-La Vallée.
France) Periodicidad 2 envíos/año QUAL-IMMUN
3 55 inscritos (85 respuestas, Internet
24) apL ac.antifosfolípido (ACA, B2GP1
IgA/IgM) ANCA ac.anticitoplasma neutrófilo
(MPO, PR3) GLIA ac.antigliadina
IgA ENDO ac.antiendomisio IgA/IgG

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales Noviembre 2004 QUAL-IMMUN-1 Resul
tados evaluación noviembre 2004 - ANA (IFI
células HEp-2) 167 participantes 100
resultados positivos dilución media 1/640
(1/320-1/1280) patrón 71 homogéneo 23
moteado 5 nucleolar - DNA 156
participantes IFI (Chritidia luciliae)
98 negativos ELISA 100 negativos FARR 1
00 negativos

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales QUAL-IMMUN 1 Resultados
evaluación noviembre 2004 - ENA 149
participantes técnicas ELISA (panel) 19
immunoblotting 71 otros
9 especificidades SS-A 100
negativos SS-B 100 negativos Sm 99
negativos RNP 99 negativos Scl-70 98
positivos (145/148) Jo-1 100 negativos

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales QUAL-IMMUN 2 Resultados
evaluación noviembre 2004 - Ac
antitiroideos anti-TPO 56 participantes técni
cas ELISA (panel) 18 100 positivos
immunoblotting 11 100 positivos RIA
2 100 positivos otros 69
100 positivos anti-Tg 56
participantes técnicas ELISA (panel) 15
100 positivos immunoblotting 13 100
positivos RIA 2 100 positivos
otros 70 100 positivos

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales QUAL-IMMUN 2 Resultados
evaluación noviembre 2004 - Ac. antiórgano
específicos 78 participantes técnica IFI
en triple sustrato hígado/riñón/estómago r
esultados mitocondrial 2 LKM-1 75
(97) citosol 1 comentario
presencia de ac. anti LKM-1

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales QUAL-IMMUN 3 Resultados
evaluación noviembre 2004 - Ac.
antifosfolípido 47 participantes técnica
ELISA (UI de Harris) ACA-IgG 97
positivos B2GP1-IgG 100 positivos ACA-IgM 92
negativos B2GP1-IgM 100 negativos Los
valores altos muestran una mayor concordancia que
los valores bajos obtenidos con diferentes
casas comerciales.

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales QUAL-IMMUN 3 Resultados
evaluación noviembre 2004 - Ac. anticitoplasma
de neutrófilo (ANCA) screening 31
participantes técnica IFI con
polimorfonucleares (PN) PN fijados con etanol
90 positivos (P-ANCA) PN fijados con formol
92 positivos (X-ANCA) especificidades 30
participantes técnica ELISA MPO 100
positivos PR3 100 negativos

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
AUTOINMUNIDAD Programas externos
comerciales QUAL-IMMUN 3 Resultados
evaluación noviembre 2004 - Ac. antiendomisio
21 participantes técnica IFI con esófago de
primate resultados 100 negativos - Ac.
antitransglutaminasa IgA técnica ELISA
resultados 100 negativos

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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA

INMUNIDAD CELULAR Subpoblaciones linfocitarias
Comerciales CDcheck, Ortho,
Coulter Sociedades Científicas SIC
CQ Programa control de calidad de la Sociedad
Ibérica de Citometria
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PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD EN
INMUNOLOGÍA
INMUNIDAD CELULAR Subpoblaciones linfocitarias
Aparato usado FACSCAN (BD)
Protocolo CD3-FITC/CD8-PE
CD4-FITC/CD19-PE CD2-FITC/CD56-PE
Reactivos usados BECTON-DICKINSON Programa
de análisis CellQuest
31
RESULTADOS EN PORCENTAJE (Febrero 2004)
32
 Overview of SIC QC Schemes results from 2002 to
2004
Pérez-Andrés M, Redondo O, Orfao A
SOCIEDAD IBÉRICA DE CITOMETRÍA
Oporto, 2005
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INTRODUCCIÓN
La determinación de subpoblaciones linfocitarias
por citometría de flujo es un método rápido,
sensible y específico que proporciona información
importante sobre el estado del sistema inmune.
Aplicaciones-monitorizar infecciones -evaluar
calidad del producto de transplate -recuperación
del SI tras tratamiento immunosupresor
Reilly JT and Barnett D. J Clin Pathol
2004 Whitby L. Granger V. Storie I et al.
Cytometry 2002
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INTRODUCCIÓN
Gran heterogeneidad entre los laboratorios en
los métodos empleados
FUENTES DE VARIABILIDAD
-Plataforma doble (contadores hematológicos)
-Lavado
-Reactivos e instrumentos utilizados
-Formación personal laboratorio
Bergeron M, Faucher S, Minkus T et al. Cytometry
1998 Fei DWT, Paxton H, and Chen AB. Biologicals
1993 Gratama JW, Kraan J, Keeney M et al.
Cytometry 2002 Reilly JT and Barnett D. J Clin
Pathol 2004 Whitby L. Granger V. Storie I et al.
Cytometry 2002
Asesoría para detección y corrección de prácticas
erróneas
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MATERIAL METHODS (I)
2004
Nº Labs 43 (Spain39 Portugal 4) Ab
combinations Commercial Kits 22 (BDBiosciences
Multitest -13 labs-, Beckmann Coulter
CytoStat TETRACHROME -8-, Cytognos Lymphogram
-1-) No commercial mixtures 21 Flow Cytometer
BDBiosciencesFACScan (5 labs), FACScalibur (23),
FACSort (2) Beckman Coulter Epics XL-MCL (10),
Cytomics FC 500 (1), Ortho-Clinical
Diagnostics Ortho CytoronAbsolute (1)
16 labs. lyse-and-wash vs. 20 labs.
lyse-no-wash 20 labs. dual platform vs. 19 labs.
single platform -BDBiosciences Trucount (13
labs) -Beckman Coulter Flow-Count (5
labs) -Cytognos Perfect Count (1 lab)
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MATERIAL METHODS (II)
1 month
Reception of results from labs.
Sending of individual and global statistical
results to each lab.
2 times each year
1 week
MONDAY
THURSDAY
FRIDAY
TUESDAY
WEDN.
-Obtention of peripheral blood from a healthy
normal individual following informed consentiment
Analysis of percentage and absolute count of
CD3, CD4, CD8, CD19 and NK subsets. 2
analysis each day
Reception of samples in participating labs.
-Stabilisation of the sample and sending of
aliquots by courier
NK subset is define as simulataneously CD3- and
also CD56 or CD16CD56
37
RESULTS I Coefficient of variation (CV) between
labs and within labs
38
Lymphocyte subsets percentage
Nº labs 1997 37 Nº labs 2004 43
CD3
CV
Servei dImmunologia. HU Bellvitge
39
Lymphocyte subsets percentage
Nº labs 1997 37 Nº labs 2004 43
CD4
CV
Servei dImmunologia. HU Bellvitge
40
Lymphocyte subsets percentage
Nº labs 1997 37 Nº labs 2004 43
CD8
CV
Servei dImmunologia. HU Bellvitge
41
Lymphocyte subsets percentage
Nº labs 1997 37 Nº labs 2004 43
Error valor teórico ?
CD19
2004a
2003b
2004b
2003a
2002b
2002a
2001
1999
1997
CV
Servei dImmunologia. HU Bellvitge
42
Lymphocyte subsets percentage
Nº labs 1997 37 Nº labs 2004 43
CD56
CV
Servei dImmunologia. HU Bellvitge
43
CONCLUSION
-La reproductibilidad entre los laboratorios de
las medidas de CD3, CD4 y CD8 es óptima pero
la determinación de CD19 y cels NK y la
cuantificación de nros. absolutos es mejorable.
-No influencia de plataforma comercial
Formación continua de personal de laboratorio
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Evaluación externa de la calidad Servicio
Inmunología HUBellvitge

INMUNOQUÍMICA BIO-RAD AUTOINMUNIDAD
QUAL-IMMUN INMUNIDAD CELULAR SIC CQ
Subpoblaciones linfocitarias Programa
control de calidad de la Sociedad Ibérica de
Citometria