Title: PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN Zainab, M.Si., Apt TUJUAN Mahasiswa
1PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN
2TUJUAN
- Mahasiswa dapat menentukan jumlah bakteri pada
sampel yang diteliti menggunakan metode angka
lempeng total.
3ALAT DAN BAHAN
- Alat
- lampu spiritus
- Autoclave
- Inkubator
- Mikropipet
- Spreader
- Bahan
- Sampel air sumur, es batu, minuman dan makanan
dll. - NaCl fisiologis steril sebagai pengencer
- Media Mueller Hinton untuk menghitung angka
lempeng total - Media TBX untuk identifikasi Escherichia coli
4METODE PEMERIKSAAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)
- Pengenceran Sampel (sample berupa cairan)
- Sampel diencerkan dg larutan NaCl fisiologis.
Pengenceran dilakukan 10 kali, 100 kali, 1000
kali dan 10.000 kali. Adapun cara pengencerannya
adalah sebagai berikut - 10 kali Sampel dipipet secara aseptic sebanyak
0,5 ml ke dalam tabung reaksi yang telah berisi
4,5 ml larutan NaCl fisiologis, kemudian
dihomogenkan. - 100 kali Diambil 0,5 ml dari pengenceran 10
kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis
dan dihomogenkan. - 1000 kali Diambil 0,5 ml dari pengenceran 100
kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis
dan dihomogenkan. - 10.000 kali Diambil 0,5 ml dari pengenceran 1000
kali, ditambahkan 4,5 ml larutan NaCl fisiologis
dan dihomogenkan - Sample yang berupa sediaan padat ditimbang
seksama sebanyak 0,5 g. Dimasukkan secara aseptic
ke dalam tabung dan ditambah 4,5 ml larutan NaCl
fisiologis steril (pengenceran 10 kali) campur
homogen, pengenceran selanjutnya sama dengan di
atas.
5METODE PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN
- 1. Dilakukan pengenceran 1 10, 1 100, 1
1000, 1 10000 - dengan NaCl 0,9 steril.
- 2. Diambil 100 µl tuangkan pada media MH untuk
masing-masing pengenceran. Kemudian ratakan
dengan spreader berulang-ulang hingga cairan
merata pada petri (Metode cawan sebar/spread
plate). - 3. Diinkubasi pada suhu 37 C selama 18-24 jam.
- 4. Dihitung jumlah koloni bakteri pada
masing-masing petri pada berbagai pengenceran.
6Uji angka lempeng total (ALT)
7(No Transcript)
8HASIL PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN
9CARA PENGHITUNGAN
- Hitung koloni pada masing-masing pengenceran.
- Koloni yang menumpuk tidak dapat dihitung. Cari
petri dg koloni yang tidak menumpuk dan dapat
dihitung. - Jumlah koloni yg representatif adalah yang
berjumlah antara 30-300 koloni. - Jumlah koloni dihitung dg rumus.
10RUMUS
Faktor pengenceran
ALT
Satuan ALT CFU/ml atau CFU/g
Jumlah koloni yg dimasukkan rumus adalah jml
koloni yang representatif
11Identifikasi E. coli dg media TBX
100 µL sampel pada pengenceran tertentu (ALT)
inokulasi pada media TBX, ratakan
Inkubasi 18-24 jam dengan suhu 37 0C
Amati koloni yang tumbuh
Warna biru-kehijauan (Positif E.coli)
12REAKSI YG TERJADI
13Koloni E. coli di media TBX