COOPERACION ANVISA AECI

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COOPERACION ANVISA / AECI

• VALIDACION DE METODOS
• CALCULO DE INCERTIDUMBRE DE MEDIDA
• TORO NOZAL M.J., YSA VALLE M.
• CENTRO DE INVESTIGACION Y CONTROL DE LA CALIDAD
  (C.I.C.C.) - INSTITUTO NACIONAL DEL CONSUMO
• MINISTERIO DE SANIDAD Y CONSUMO

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VALIDACIÓN DE MÉTODOS

• ISO/IEC 170251999 (5.4.5.1)
• Confirmación mediante examen y la aportación de
  evidencias objetivas que demuestren el
  cumplimiento de ciertos requisitos para el uso
  específico previsto

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ESTIMACIÓN DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDIDA

• ISO/IEC 170251999 (5.4.6.2)
• Los laboratorios de ensayo deben disponer y
  aplicar procedimientos para estimar la
  incertidumbre de medida.

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GENERALIDADES

• MÉTODOS QUE REQUIEREN ALGÚN TIPO DE VALIDACIÓN
• MÉTODOS INTERNOS
• MÉTODOS EXTERNOS

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MÉTODOS INTERNOS

• Los desarrollados en el propio laboratorio.
• Deberán ser validados en función del uso que
  se vaya a hacer de ellos, definiendo su campo
  de aplicación.
• En estos métodos se realizará una nueva
  validación (parcial o total) cuando se cambien
  las condiciones del mismo.

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MÉTODOS EXTERNOS

• 1
• Los desarrollados fuera del laboratorio y
  publicados por organismos oficiales y/o de
• reconocido prestigio
• (CEN, AENOR, etc.).

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MÉTODOS EXTERNOS

• 2
• No requerirán validación cuando se tiene
  constancia de que han sido validados y se dispone
  de los correspondientes parámetros de validación.
  Es suficiente que el laboratorio se asegure que
  el uso que pretende hacer del método es
  compatible con éste
• (material, ensayo, precisión, etc..).

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MÉTODOS EXTERNOS

• 3
• Cuando un método externo validado sea
  modificado para su uso en el laboratorio, se
  dispondrá de un PNT que recoja las modificaciones
  y se evaluarán los parámetros necesarios para
  asegurar su correcta validación.

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MÉTODOS EXTERNOS

• 4
• Los métodos validados por ensayos
  interlaboratorios en los que participe el
  laboratorio se considerarán como métodos externos
  publicados, si se dispone de los parámetros de
  validación del mismo.

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MÉTODOS EXTERNOS

• 5
• Los métodos externos publicados por organismos
  oficiales y/o de reconocido prestigio de los que
  no se tenga constancia de su validación, deberán
  ser validados antes de ser utilizados en los
  ensayos.

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REALIZACIÓN

• Operaciones previas
• Modo operativo
• Parámetros a evaluar
• Materiales empleados en la validación
• Validaciones de M. Cuantitativos
• Métodos semicuantitativos
• Métodos cualitativos
• Métodos de identificación

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Operaciones previas

• Nombramiento del responsable (o responsables) de
  la validación.
• Recopilación de la normativa aplicable
• Elaboración del PNT de ensayo.
• Definición de las características mínimas del
  método y de los parámetros analíticos a validar
  así como los criterios de aceptación, en función
  de los requisitos.
• Se Documentará por escrito en el documento
  de diseño de la validación
• La sistemática completa a seguir en el proceso de
  validación

• El nº de experimentos necesarios para obtener los
  valores de los parámetros requeridos
• Especificar las muestras que se van a emplear
  (marca, lote, fecha, etc,,), la forma de empleo,
  como se van a marcar, los M.R. que se van a
  utilizar, etc.
• Si se emplean datos históricos, especificar
  exactamente cuales son y todos los datos que
  permitan su trazabilidad.
• Comprobación que los equipos a utilizar estén
  calibrados y/o veri-ficados y en perfecto estado
  de funcionamiento
• Comprobado y Vº. Bº. del R.T.

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Modo operativo

• Definir la sistemática de experimentos necesarios
  para obtener los valores de los parámetros
  requeridos.
• Los parámetros a determinar estarán en función
  del uso del método
• Cuantitativo
• Semicuantitativo
• Cualitativo
• Identificativo
• La información relativa al proceso de validación
  será anotada en un registro de validación.

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Parámetros a evaluar

• Linealidad/Función de respuesta
• Selectividad/Especificidad
• Precisión
• Repetibilidad
• Reproducibilidad
• Veracidad (Exactitud)
• Límite de cuantificación
• Límite de detección
• Rango o intervalo de trabajo
• Incertidumbre

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Parámetros a evaluar
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Materiales empleados en la validación

• Materiales de Referencia Certificados (MCR)
• (NIST, LGC, BCR)
• Materiales de Referencia (MR)
• Muestra analizada por otro método normalizado
  debidamente evaluado
• Muestras con adiciones de sustancia de
  concentración certificada.

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MCR

• Se verificará que el material de referencia viene
  acompañado de su certificado, en el que se
  especifique claramente
• el método por el que se ha certificado el
  material
• el número de participantes en la certificación
• su periodo de caducidad y/o condiciones de
  conservación.

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MR

• Materiales obtenidos a partir de Test de
  eficiencia suministrados por Entidades
  Organizadoras del mismo, al que se les asigna un
  valor y una incertidumbre (o variabilidad del
  valor de referencia).
• Llevan asociado un certificado, pero que no
  incluye todos los requisitos de un MCR.
• Se recomienda que el número de laboratorios que
  participan en la asignación del valor sea
  superior a 10.

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MUESTRA ANALIZADA POR OTRO MÉTODO NORMALIZADO
DEBIDAMENTE EVALUADO

• Según el parámetro de validación, se realizará el
  estudio mediante la comparación de los resultados
  por pares de valores de ambos métodos como datos
  independientes.

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MUESTRAS CON ADICIONES DE SUSTANCIAS DE
CONCENTRACIÓN CERTIFICADA

• Muestras preparadas en el laboratorio con
  muestras de bajo nivel de concentración del
  analito a las que se añade una cantidad conocida
  de patrón certificado.

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Materiales empleados en la validación

• Todos los valores de referencia tendrán
  calculadasu incertidumbre estimada o el
  intervalo de confianza conocido y compatible con
  los requisitos especificados.
• Los materiales preparados corresponderán a
  muestras con matriz representativa del alcance
  que tiene el método que se está validando
• Dado que no es posible realizar la validación con
  materiles de referencia para absolutamente todas
  las matrices analíticas, se procederá a crear
  grupos de matrices en los que un material de
  referencia sea representativo del grupo, para
  realizar su validación.

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VALIDACIÓN DE MÉTODOS CUANTITATIVOS

• Aquellos en los que tras la aplicación del
  procedimiento analítico a la muestra analizada,
  se genera un valor numérico.
• Aplicación
• Métodos directos
• Métodos que requieren calibración instrumental

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Criterios Generales

• Criterios reglamentados legales o normativos se
  emplearán como criterios de aceptación.
• Método reglamentado o normativo y se indica el
  procedimiento de validación prevalece éste.
• Muestras de validación similares a las matrices
  del campo de aplicación.
• Tres muestras con valor de referencia conocido
  para validar a tres niveles.

• Al no poder validar la totalidad de las matrices,
  definir familias de matrices en el que el método
  se pueda decidir que se comporta de igual forma,
  por evidencias históricas, bibliografía o el
  sentido común.
• Aconsejable calcular, y por cada nivel, la
  cantidad del material a analizar en la
  validación. Tener en cuenta la caducidad,
  estabilidad, etc..

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Rango o intervalo de trabajo

• Límites superior e inferior del intervalo en
  el que se puede determinar el mensurando con
  aceptable grado de precisión y veracidad.
• Límite inferior el más bajo en el que han
  comprobado precisión y exactitud, a no ser que el
  método deba medir el nivel más bajo posible o
  ausencia por lo que será el límite de
  cuantificación o el de detección.
• Límite superior el nivel más alto en el que se
  ha comprobado la precisión y la veracidad.

• Criterio de aceptación
• Si existe límite legislado el rango lo incluirá
  en el intervalo.
• Si no existe límite legislado será definido por
  el uso del método a los requerimientos de los
  usos del método.

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Linealidad

• Capacidad de un método para obtener
  resultados linealmente proporcionales al valor
  del mensurando en la muestra, dentro de un
  intervalo determnado.
• Se determinará mediante la curva de
  calibración y se comprobará la linealidad
  analizando diferentes concentraciones de patrones
  de valor conocido con un mínimo de 5 en el
  intervalo lineal y al menos cada patrón por
  duplicado.

• Criterios de aceptación
• Si coef. de variación de los factores de
  respuesta de las diferentes conc. es inferior al
  20 la recta es lineal y pasa por el origen.
• Si (Sm/m)x 100 es inferior al 20, se considera
  que la recta es lineal.
• Si el coeficiente de correlación r es superior
  a 0,99

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Precisión

• Concordancia entre los resultados de ensayos
  independientes en condiciones estipuladas.
• El cálculo de la desviación estándar de
  repetibilidad y de reproducibilidad se empleará
  el método descrito en la Norma UNE 82009-2, a los
  datos generados en los ensayos para el proceso de
  validación.
• Es recomendable que se realicen un mínimo de
  10 análisis en condiciones de reproducibilidad y
  cada análisis se hará por duplicado, al menos.

• Repetibilidad
• Reproducibilidad

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Repetibilidad

• Medida de la precisión de un método efectuado
  en las mismas condiciones.
• Se expresará como Límite de repetibilidad
  r, siendo la diferencia absoluta entre los
  resultados de dos determinaciones paralelas
  efectuadas sobre la misma muestra. Para ser
  aceptados, en condiciones de repetibilidad y con
  un nivel de significación del 0,05, la diferencia
  entre los valores de los duplicados no puede ser
  mayor que el valor de r.
• r al 95 de confianza se calcula r 2 x
  x Sr

• Criterio de Aceptación
• r Shx2x x F
• Sh 0,02 x C0,8495 x 0,67 (C expresado en
  fracciones másicas)

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Reproducibilidad

• Medida de la precisión de un método efectuado
  sobre la misma muestra pero en condiciones
  diferentes.
• Se expresará como Límite de
  reproducibilidad R, siendo la diferencia
  absoluta entre los resultados de dos
  determinaciones realizadas en condiciones de
  reproducibilidad sobre la misma muestra.
• R al 95 de confianza se calcula R 2 x
  x SR

• Criterio de Aceptación
• R SHx2x x F
• SH 0,02 x C0,8495 (C expresado en fracciones
  másicas)

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Exactitud/Veracidad

• Capacidad de un método analítico para dar
  resultados lo más próximos posibles al valor
  verdadero.
• Las muestras empleadas para la validación de
  la exactitud, serán preferiblemente MCR.
• Cada muestras será analizada al menos 10
  veces, en condiciones de reproducibilidad
  intralaboratorio, cada vez por duplicado (20
  valores)
• exactitud/veracidad
  x 100
• recuperación () x 100
  Corrección VR -

• Criterio de Aceptación
• Tabla A.O.A.C.
• Indice de Compatibilidad 2

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Selectividad

• Grado por el cual un método puede determinar un
  analito dentro de una mezcla compleja, sin ser
  interferido por otros componentes de la mezcla.
• Las pruebas más utilizadas para determinar la
  selectividad son, a modo de ejemplo
• Método de adiciones
• Comparación de espectros
• Comparación de métodos

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Límite de Cuantificación

• Menor cantidad de mensurando que puede ser
  determinada con aceptable precisión y veracidad
  bajo las condiciones experimentales establecidas.

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Límite de Cuantificación

• Métodos con calibración instrumental
• Métodos con el análisis de la señal del blanco
• Sin utilizar la corrección del blanco
• Cuando se utiliza la corrección del blanco
• Método estadístico aplicado a la recta de
  calibrado
• Regresión sin blanco
• Regresión con blanco
• Métodos sin calibración instrumental

• Criterios de Aceptación
• Con reglamentación específica LC lt al 50 del
  valor reglamentado
• Método normalizado y si se indica el valor del
  LC, deberá cumplirse con este valor.

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Límite de Detección

• Menor cantidad de mensurando que puede ser
  detectada con aceptable precisión y veracidad
  bajo las condiciones experimentales establecidas.
• Deberá ser evaluado solamente en los métodos
  cualitativos o en los métodos cuantitativos en
  los que se evalúa la presencia sin proceder a la
  cuantificación.

• Criterios de Aceptación
• Con reglamentación específica LD lt al límite
  reglamentado
• Método normalizado y si se indica el valor del
  LD, deberá cumplirse con este valor.

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MÉTODOS SEMICUANTITATIVOS

• El laboratorio sólo debe demostrar exactitud y
  precisión en un punto.
• Este punto de concentración/valor analítico
  escogido para cada matriz marcará la expresión de
  resultados que será menor que (lt) y mayor que
  (gt).
• Generalmente es un límite reglamentado.
• Los estudios a realizar son los mismos que pa-ra
  un método cuantitativo, excepto la linealidad. El
  L.C. Será inferior al valor validado.

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MÉTODOS CUALITATIVOS

• Métodos diseñados para detectar muestras
  positivas hasta un nivel bajo de presencia del
  analito
• Selectividad
• Límite de Detección
• Parámetros de calidad de detección del método
• Sensibilidad
• Especificidad
• Falsos positivos
• Falsos negativos
• Eficiencia

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MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN

• Métodos que se pueden tratar como casos
  particulares de métodos cualitativos, en los que
  se pretende determinar la identidad de una
  sustancia o especie pura, por lo que no se
  requiere el análisis del Límite de Detección,
  sino pruebas de detección (determinación de
  falsos negativos, falsos positivos,)
• El procedimiento de validación estará basado
  en el epígrafe correspondiente a los métodos
  cualitativos y serán documentados por los
  responsables de la validación, definiendo los
  parámetros a validar.

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CÁLCULO DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDIDA

• La Norma ISO 17025 establece la necesidad de
  calcular o estimar las incertidumbres en los
  resultados de ensayos cuantitativos y
  calibraciones que se realicen en el laboratorio.
• Incertidumbre de una Medida
• Estimación de la parte del resultado completo
  que caracteriza el intervalo de valores, dentro
  del cual se encuentra el valor verda-dero de la
  cantidad medida (o mensurando). Ello, una vez
  efectua-das las correcciones correspondientes a
  los errores sistemáticos conocidos. En caso de no
  corregirse, se incrementará el intervalo de
  incertidumbre para incluir el efecto del error
  sistemático.

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COMPONENTES DE LA INCERTIDUMBRE

• La incertidumbre de un resultado comprende
  normalmente mu-chas componentes que pueden ser
  agrupadas en dos categorías en función del método
  utilizado para estimar su valor numérico.
• Tipo A
• Los que son estimadas aplicando métodos
  estadísticos a una serie de determinaciones
  repetidas.
• Tipo B
• Las que son estimadas por otros medios.
• Estimación basada en la experiencia
• Estimadas a partir del conocimiento de los
  intervalos máximos de variación de una magnitud
• Resultados previos
• Medidas de las que se conoce su distribución.

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REALIZACIÓN

• Definición de la magnitud a medir
• Lista de Causas
• Evaluación de los componentes
• Cálculo de la estimación de la Incertidumbre
  Típica Combinada (Uc)
• Cálculo de la Incertidumbre Expandida de Medida
• Cálculo por etapas

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DEFINICIÓN DE LA MAGNITUD A MEDIR

• Se debe definir cual es la magnitud que medimos y
  si esta medida es
• Medida Directa (ej. peso)
• Medida Indirecta (ej. resultado análisis de
  A.A.)
• En este caso se debe definir la fórmula que
  liguen todas las magnitudes utilizadas para
  calcular el resultado final. En caso contrario
  deberá ser tratada como una única medida.

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LISTA DE CAUSAS

• Para cada una de las medidas definidas establecer
  la lista de posibles causas de incertidumbre que
  la afectan, asociadas con el factor que la
  determina. A título orientativo
• Certificado de Calibración (define correcciones e
  incertidumbres)
• Exactitud del instrumento de medida (dada por el
  fabricante)
• Temperatura
• Inestabilidad de la medida
• Estabilidad a Corto Plazo o Repetibilidad ( a
  veces aportada por el fabricante)
• Operador
• Otras Humedad, ruido, no linealidad, etc., la
  experiencia, etc..
• Ajunste de Recta de Calibrado

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EVALUACIÓN DE LOS COMPONENTES

• Para cada una de las causas, evaluar la
  contribución de su componente en función de las
  posibilidades disponibles.
• a) Para medidas repetidas, tratar las componentes
  como TIPO A
• b) Las componentes de TIPO B (UB) serán estimadas
  basándose en el certificado de calibración, la
  experiencia, recomendaciones del fabricante, etc..

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CÁLCULO DE LA ESTIMACIÓN DE LA INCERTIDUMBRE
TÍPICA COMBINADA

• Si las componentes de la incertidumbre que
  se han considera-do pueden suponerse
  independientes, la incertidumbre típica combinada
  se obtiene realizando la suma cuadrática
• Uc2 UA2 S UB2
• Cuando la medida no se realiza directamente,
  se tendrá en cuenta
• Definir la fórmula que exprese la magnitud de
  interés en función de los parámetros relacionados
• Estimar las correcciones e incertidumbres
  asociadas a cada una de esos parámetros
• Calcular la incertidumbre típica combinada
  aplicando la expresión general de la Ley de
  Propagación de las Varianzas.

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CÁLCULO DE LA INCERTIDUMBRE EXPANDIDA DE MEDIDA

• I k x UC
• siendo
• I Incertidumbre expandida
• k Factor de cobertura (salvo que se especifique
  otra cosa k 2)
• UC Incertidumbre típica combinada

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MODELO CAJA NEGRA

• En el caso de que no se pueda descomponer la
  medida de una serie de medidas intermedias y el
  proceso de análisis requiera la realización de
  múl-tiples etapas independientes, que
  imposibiliten la realización de experimentos
  adecuados para la obtención de una estimación del
  valor de la incer-tidumbre se podrá optar po el
  siguiente esquema de cálculo de incertidumbres
• Definición de etapas
• Cálculo de la incertidumbre de cada etapa
  (desglosada por partes o por caja negra)
• Composición como suma cuadrática de la
  incertidumbre de cada etapa
• Cálculo de la incertidumbre típica combinada

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MODELO CAJA NEGRA

• El modelo caja negra se basa en
  suministrar al método, una muestra con un valor y
  fiabilidad (incertidumbre) conocidas.
• Del método, por alguna causa no sabemos o no
  podemos evaluar sus diversos componentes de
  variabilidad interna.
• En este caso, se puede conocer la
  incertidumbre del método analizando los
  resultados a la salida, evaluando su precisión y
  su exactitud.

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MODELO CAJA NEGRA

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MODELO CAJA NEGRA