Pr

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Cours d'Hémostase DUT ABB
3- Exploration de la Coagulation
Auteur Bruno Flamand, IUT de Dijon
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• Quand explorer la coagulation ?
• Manifestations cliniques hémorragiques
• Incident hémorragique per- ou post-opératoire
• Bilan pré-opératoire
• Thromboses
• Surveillance traitement anticoagulant

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Schéma simplifié de la coagulation
Voie endogène
Voie exogène
Facteurs Contacts
Facteur Tissulaire
PK, KHPM, XIIa, XIa, IXa
VIIa
PL Ca2 VIIIa
PL Ca2
X
Xa
PL Ca2 Va
II
IIa
Fibrinogène
Fibrine
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Mesure du Temps de Quick (TQ) ou Taux de
Prothrombine (TP) Exploration de Fonctionnalité
Voie exogène
Facteur Tissulaire

• Réactifs
• Thromboplastine tissulaire Facteur Tissulaire
  PL
• CaCl2
• Plasma

VIIa
PL Ca2
X
Xa
PL Ca2 Va
II
IIa
Fibrinogène
Fibrine
5
Mesure du Temps de Quick
Temps de formation dun caillot de fibrine dun
plasma déplaquetté, décalcifié, en présence de
FT, PL et Ca2

• N 11-13 sec
• Expression TQ en pourcentage Taux de Prothrombine
  (TP) besoin étalonnage Droite de Thivolle

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Etalonnage Mesure TQ sur Plasmas calibrés TP
100, 50, 33,. Droite de Thivolle

• TP Pathologique si lt 70 TQ allongé
• Expression TQ en INR (International Normalized
  Ratio) réservé aux surveillances de patients
  traités aux AntiVitamines K

ISI Indice de Sensibilité Internationale de la
thromboplastine
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Mesure du Temps de Céphaline Activateur (TCA)
Exploration de Fonctionnalité Voie endogène
Facteurs Contacts

• Réactifs
• Activateurs  Contacts  Kaolin, Silice, Célite,
  Acide éllagique
• Substitut PL Céphaline
• CaCl2
• Plasma

PK, KHPM, XIIa, XIa, IXa
PL Ca2 VIIIa
X
Xa
PL Ca2 Va
II
IIa
Fibrinogène
Fibrine
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Mesure du Temps de Céphaline activateur
Temps de formation dun caillot de fibrine dun
plasma déplaquetté, décalcifié, en présence
dactivateur des facteurs  contacts , de PL et
de Ca2
CaCl2 préchauffé à 37C 100µl
Stop Chrono
Déclenchement Chronomètre
Activateur 100µl
TCA
Préchauffage 3 min 37c
Plasma 100µl
Caillot Fibrine

• N 30-35 sec
• Résultat exprimé en secondes par rapport à un
  plasma Témoin normal

• TCA allongé si ratio

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Détection de la formation du caillot de Fibrine

•  Lectures oculaires  

Barreau aimanté en rotation
Technique du crochet accrochage
caillot/filament gélatineux
Bain-marie électromagnétique arrêt de rotation
du barreau
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•  Lecture électromagnétique  sur semi- ou
  automates complets

Bille aimantée
Micro-cuvette immobile
Bobine électromagnétique
Bobine électromagnétique
Oscillation pendulaire de la bille
ralentissement puis arrêt mouvement pendulaire
par caillot fibrine
Immobilité de la bille par aimantation
emprisonnement dans caillot de fibrine provoque
mise en rotation associée à la micro-cuvette
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•  Lecture optique  par turbidimétrie à 650 nm
  moins utilisée
• - DO départ turbidité plasma (réactifs)
• -variation DO addition réactif déclenchant
• -variation DO formation caillot fibrine

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• -Sur semi- ou automates complets,
• Déclenchement chrono simultané à addition réactif
   déclenchant  (Thromboplastine pour TQ, CaCl2
  pour TCA) par pipette reliée électriquement
• Arrêt Chrono automatique par détection caillot
  fibrine
• - arrêt mouvement pendulaire bille (diminution
  intensité champ magnétique)
• - mise en rotation bille (coupure champ
  magnétique)
• - changement de turbidité
• -Sur semi-automates,
• Addition manuelle plasma, réactif, réactif
   déclenchant 
• -Sur automates complets,
• Travail sur Tube primaire Sang centrifugé
  (Anticoagulant Citrate de Na 3,8), tous les
  additions de réactifs sont automatisées

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• Allongement isolé TQ
• Déficit VII
• Effet Inhibiteur -thérapeutique (présence
  héparine, en principe pas dallongement sauf
  si Héparine importante),
• début traitement Anti-Vitamine K
• -pathologique (Anticoagulants circulants)
  Ac anti-facteurs, Ac
  anti-phospholipides
• Allongement isolé TCA
• Déficit PK, KHPM, XII, XI, IX, VIII
• Effet Inhibiteur
• -thérapeutique héparine, et AVK
• -pathologique Ac anti-facteurs, Ac
  anti-phospholipides

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• Allongements associés TQ et TCA
• Déficit facteur voie commune X, V, II, I
• Dysfibrinogénémie
• Déficits combinésVexo Vc, Vendo Vc, Vexo
  Vendo ( Vc)
• Effets inhibiteurs Ac anti-facteurs, Ac
  anti-phospholipides, Inhibiteurs polymérisation
  (PDF, anti-polymérase)
• Inhibiteurs thérapeutiques héparine, AVK

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Mesure du Temps de Thrombine (T T)
Exploration de
Fonctionnalité de la Fibrinoformation
Temps de formation dun caillot de fibrine dun
plasma déplaquetté, décalcifié, en présence dune
quantité standardisée de thrombine diluée et de
Ca2

• N ? 22 sec
• Réalisé si TQ et TCA allongés
• Si TT allongé investigations supplémentaires
  (PDF, D-Dimères, Fibrinogène  immunologique )

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• Allongements TT (et TQ et TCA)
• Présence héparine
• Déficit fibrinogène
• Dysfibrinogénémie
• Inhibiteur Fibrinoformation PDF, Anti-polymérase

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Dosage chronométrique du Fibrinogène
-dosage indirect, car mesure dun temps
dapparition de fibrine par transformation de la
totalité du fibrinogène présent -temps de
coagulation à 37C dun plasma dilué, citraté,
déplaquetté, en présence de thrombine concentrée,
est inversement proportionnel à la quantité de
fibrinogène -dosage quantitatif et
qualitatif -besoin étalonnage
Thrombine calcique préchauffée à 37C 200µl
Stop Chrono
Déclenchement Chronomètre
Plasma 200µl
Caillot Fibrine
Préchauffage 2 min 37c
Temps de coagulation
Fibrinogène g/L

• N 2 à 4 g/L

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Dosage chronométrique isolé de facteur de la
coagulation
-Plasmas réactifs déficients en un seul
facteur -Temps de coagulation dun plasma
déficitaire est fonction de la quantité du
facteur apporté par le plasma à tester -Résultats
exprimés en de facteur par rapport à des
plasmas normaux étalons
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Dosage chronométrique facteur VIII
Activateurs Facteurs contact
CaCl2 préchauffé à 37C 100µl
Stop Chrono
Plasma déficitaire en VIII 100µl
Déclenchement Chronomètre
Temps de coagulation
Préchauffage 3 min 37c
Caillot Fibrine
Dilution Plasma Patient 100µl
Temps de coagulation en sec.

• Etalonnage

VIII
95
45
15
N 60-150
20
Dosage chronométrique facteur VII
Thromboplastine tissulaire calcique préchauffée à
37C 200µl
Stop Chrono
Plasma déficitaire en VII 100µl
Déclenchement Chronomètre
Temps de coagulation
Préchauffage 2 min 37c
Caillot Fibrine
Dilution Plasma Patient 100µl
Temps de coagulation en sec.

• Etalonnage

VII

• N 70-130

95
45
15
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Dosage chromogénique isolé de facteur de la
coagulation
-Dosage colorimétriques (ou amidolytiques) -utilis
ation de substrats oligopeptidiques chromogènes
groupement paranitroaniline libère amine pNA par
coupure enzymatique -dosage dactivité
enzymatique concentration enzyme (facteur) est
proportionnelle à la vitesse dhydrolyse, mesurée
par la variation absorbance à 405 nm (dosage pt
final, 2 pts, cinétique)
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IXa PL
VIII
pNA
X
Xa
DO 405 nm pNA
CBS 48.03
Etalonnage
VIII
25
50
100
200
23
Épreuve de correction de lallongement isolé du
TCA
CaCl2 préchauffé à 37C 100µl
Activateurs 100µl
Stop Chrono
Plasma Témoin N 100µl
Préchauffage 3 min 37c
Déclenchement Chronomètre
Plasma Patient 100µl
TCA
Caillot Fibrine
Calcul Indice de Rosner
(TCA Mélange TCA Témoin N)
x100
TCA Patient

• Indice lt12 TCA Patient corrigé par Témoin
  Déficits Facteurs
• Indice gt15 TCA Patient non corrigé par Témoin
  Ac AntiCoagulants Circulants

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TCA Patient-TCA Mélange
x100
correction
TCA Mélange

• correction gt 65 déficit facteur
• correction lt 50 présence Ac anticoagulant
  circulant

TCA Mélange
Rapport
TCA Témoin N

• Rapport lt 1,2 déficit facteur
• Rapport gt 1,2 présence Ac anticoagulant circulant