HEPATITIS C

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HEPATITIS C

• Dra Maria G Morales
• Nutrición-Gastroenterología
• Bioquímica-Terapias alternativas

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Valoraciones

• Prevención
• Diagnostico
• Pronostico
• Tratamiento
• Virus Hospedero- Tratamiento

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Antecedentes

• El virus de la hepatitis C (VHC) fue inicialmente
  reconocido como agente productor de la hepatitis
  no-A, no-B,
• Clonado posteriormente en 1989
• Se calcula que un 3 de la población mundial,
  aproximadamente entre 170 y 200 millones de
  personas, están infectadas, correspondiendo 4
  millones a USA y unos 5 millones a Europa. La
  prevalencia varía según los distintos países, su
  grado de desarrollo o, incluso, las diferentes
  zonas y circunstancias sanitarias dentro del
  mismo país.
• Alrededor del 80 de los infectados evolucionan a
  la cronicidad
• Entre un 10-20 desarrollan una cirrosis en un
  plazo de unos 20 años
• Anualmente, el 2 de los pacientes desarrollan un
  hepatocarcinoma

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Esquema de la historia natural de la infección
por el virus de la hepatitis C
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Biología Molecular y características de los virus
de las hepatitis By C
Propiedades VHB VHC
Ac nucleico DNA RNA
Estructura del genoma Parcial de doble cadena SC Lineal
Tamaño del genoma 3.2 Kb 9.5 Kb
Envoltura Si Si
Transmisión Parenteral Parenteral
Clínica Aguda/crónica Aguda/ crónica
HCC Si Si
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Genoma del virus de la hepatitis C
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Conceptos

• Heterogeneidad genética
• Genotipo
• Subtipo
• Aislado
• Cuasiespesies--- Variación intragenoma
• Variabilidad genética
• La cinética de replicación
• La baja fidelidad de la enzima responsable de la
  replicación (RpRd) son los dos principales
  factores que explica Vida media del virus en
  sangre 2.5 h
• Producción diaria de partículas virales ( 10 12
  ) infección crónica
• Tasa de error de la polimerasa 10 -4
• Basado en modelo de VIH
• Probabilidad de mutación puntual 10 -4
• Doble mutación 10 -11
• Producción diaria de virus aproximadamente 3,300
  virus

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Homologia y nomenclatura de las variantes del VHC
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Fundamento e interpretación de INNO LIPA HCV II
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Distribución geográfica de los principales
genotipos y subtipos del VHC
Cuba
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Implicaciones de la variabilidad genética del VHC

• Sobre la patogenicidad
• En las manifestaciones extrahepáticas
• En la aparición de hepatocarcinoma
• En el diagnóstico
• Métodos serológicos
• Métodos moleculares

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Implicaciones de la variabilidad genética del VHC

• En la resistencia el tratamiento.
• Papel de NS5 PKR y región ISDR
• Papel de NS3
• Sobre la epidemiología
• Variabilidad geográfica
• Marcadores epidemiológicos
• Vacunaciones

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TRATAMIENTOS EN HEPATITIS C
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Tratamientos

• Ribavirina. Nucleótido análogo de
  guanosina, que
• posee un amplio
  espectro de actividad
• antiviral. Ej Virus
  sincytial respiratorio
• 
  virus influenza
• 
  virus estomatitis v
• Interferón
• Inmunomodulador
• Antiviral
• Anticancerígeno

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(No Transcript)
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• OBJETIVO GENERAL
• Evaluar si la RBV puede ser diana de la
  polimerasa del VHC en ensayos clínicos

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MATERIALES Y METODOS

• PACIENTES 15
• H. crónica, ALT elevada, anti HVC, HVC-RNA,
  biopsia 6 y 12 meses previos
• Seguimiento. ALT medida 2-3 veces 8 semanas antes
  de iniciar el estudio con
• la droga.
• TRATAMIENTO
• 5 Pacientes Ribavirina 600 mg x2vxdia vía oral
• 2 Pacientes Placebo
• 2 Placebo y 2 ptes con RBV,recibieron previamente
  INF alfa
• 4/5 RBV , ALT normal
• 2 Placebos ALT elevada
• 8 Ptes INF alfa ( 6 peginterferon alfa y 2 INF
  alfa) X 48 semanas y seguimiento x 24 semanas

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MATERIALES Y METODOS

• 1. RT-PCR. Primer región NS5B- 1 kb
• 2.-Amplificados-- clonaje en VECTOR pCR 2.1
  TOPO
• 3.-Secuenciación DNASIS software
• 4.-Genotipos region NS5 Ensayo Inno Lipa
• 5.- CULTIVO CELULAR. Huh7
• Construcciones HVC subgenomicos NS5B415F y
  NS5B415 Y
• en cell Hub7
• 6.- HVC RNA Cuantitativo
• 7.- Modelaje molecular y análisis estructural

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(No Transcript)
20
RESULTADOS Tabla 2 I.- Obj La RBV acelera la
divergencia en la evolución de cuaciespecies del
VHC en pacientes Evolución de
cuasiespecies de VHC No de cuasiespecies / frag
de genoma
en mas de un subclon
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(No Transcript)
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RESULTADOS Tabla 3 Obj Determinar si la RBV e
INF alfa generan una proporción de errores
similares en la región NS5B en genomas del VHC
circulantes Definido Como No. de sustituciones
de base/ No. total de nucleótidos

secuenciados
RBV INF alfa
Placebo p Nucleótidos
9.13 3.09 5.87 4.29
3.05 2.93 0.100 10 -3/sitios/año
NS Aa 8.24
2.58 4.45 5.33 2.94
3.13 0.065 Confirma que La RBV es el
mutágeno del VHC clave en el tratamiento en
clínica
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Tran--

Tran--
Tranv---
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(No Transcript)
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Emergencia de mutación de sustitución en la
región NS5B 415 F------Y en respuesta a
RBV Objetivo Si el tratamiento con RBV podría
seleccionar ciertas mutaciones de
aa Región NS5B antes y después del
tratamiento K 254 R D 375 G F 415
Y--------------------------sustitución presente
en todos los ptes Q 544 R En el seguimiento
emergió la variante NS5B 415 F (Tiene ventaja
para la replicación en ausencia de RBV
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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CONCLUSIONES (DEL ARTICULO)

• Los resultados demuestran que la variante con
  Phe----- tir en NS5B sitio 415 se detecto en el
  genotipo 1a VHC durante la monoterapia con
  Ribavirina
• La mutación confiere resistencia a RBV in vivo
• La RBV tiene efecto directo en RpRd en VHC in
  vivo.

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Conclusiones

• En HEPATITIS C
• RT-PCR . Con oligos especificos
• PCR cuantitativo
• Genotipos
• Tratamiento . Inf alfa Ribavirina
• Resistencia. Emergen mutaciones especificas, por
  la terapia con RBV

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CUBA

• PROGRAMA NACIONAL
• Diagnostico
• ELISA
• RT PCR-Secuenciación
• Tratamiento
• INF alfa leucocitario
• INF alfa 2b recombinante
• Profilaxis
• Proyecto de vacuna 2006