???

1
??????????? ??????? ????????????? ???????

• ?????? 8

2

• ???????????? ?????? ???????? ?????
  ?????? ?????, ????? ??? ?????????????? ??? ??????
  ???????. ??????? ?????????? ???????????? ???, ???
  ??????? ?????????? ? ????????????? ???????, ??
  ?????? ? ??????????, ???? ?? ?????? ???????
  ???????? ??????????.
• ????????? ????????? ????????????

3
???????

1. ??? ????? ??????? ? ???????? ??????.
2. ??? ? ???????? ???????.

4
? ? ?
5
???????? ???????? ???
? 1983 ???? ???????? ???? ???????????
?????????? ???????????? ?????? ??????? (???),
??????? ???????? ????? ??????? ???????????????. ?
????????? ????? ??? ???????? ??? ????????
???????????????? ? ???????????? ???????
?????????? ???????????? (?????????????
???????????) ????????? ????????? ???????? ???,
??????? ???????? ????????? ?????????? ?????
???????? ????? ? ???????? ??? ? ???????
?????????? ????? (Newton, Graham, 1997).

Kary Baron Mullis
???????????? ?????? ???????????? ?????? ???????
????? ???????????????? ?? ????? ????????????
?????????. ? ???? ??? ????? ???? ????????????
??????????????? (????????????) ????????
(???????????? ??????????????? ????????????
??????????????????), ??????? ??????????????
????????????? ??? ???????????????????
???????????, ??????? ?????? ? ??????? ??? ???????
???????? ??????????? ? ??????? ?????? ?????
(random primedamplification ???????????
?????????????? ????????????) ? ?????????????
????????, ????????????????? (???????????????) ??
?????? ??? ???????????? ???????????????????,
??????? ????????? ? ?????????? ??????? ??? -
?????? STS-???????? (Sequence-Tagged Sites).
6
???????? ???????? ???. Random PCR
? 1990 ????, ?????????? ???? ?? ?????, ???
??????????????????????? ?????????? ??? ?????????
???????????? ??? ???????????? ???????????? ??????
??????? ? ????? ???????? ?????????????????
????????? ???????????? ?????????. ?????
???????????????????? ?????????? ? ????????????
????????? ??? ????????? ????????????????? ???
????????? ???????????? ????? ???????????? ???
???????????? ??????? ??? ??????? ??????. ????
?????? (Williams et al., 1990) ??????? ?????
???????????? ??????? RAPD (Random Amplified
Polymorphic DNA), ?????? (Welsh, McClelland,
1990) - AP-PCR (Arbitrary Primer PCR). ?????????
????? ???? ?????????? ? ?????? ??????? ??????
(Caetano-Anolles et al., 1991) - DAF (DNA
Amplification Fingerprinting) (????? ? ??., 1992)
- ??-??? (??? ? ?????????????? ??????????). ???
??? ???????????? ?? ????????????? ?????? ????????
???????????? ????????? ? ?????????? ??????, ?
????????, ?????? ???????????????
?????????. ??????????? ?????? ? ??????
?????????? "????????????" ????????? ???
????????????? ? ??????????????? ???????????? ?
?????????????? ??????????????? ?????????? ??????,
? ????????????? ????????????, ??????????????? ???
?????? ?????????? ?????????? ??????? ????????????
????????? ???????.

7
???????? ???????? Random PCR ??????? (??????????
?????)

8
???????? ???????? ???. Random PCR
???????????? ???????????? ????????
????????????????????????????, ?? ?????????
???????????????? ?????? ?????????
?????????????????? ? ???????????? ????????? ???
?????????????????? ? ??????. ???? ???
???????????? ????? ???????????? ???????
????????? ???????????? ????????? ??? ??????????
?????????-???? ? ????????????? ????????? ?
?????????????, ?? ????????????????? ? ??????,
?????? ?? ??????? ???????? ????????????. rPCR
(Random Polymerase Chain Reaction ????????????
???). ???? ????? ????????? ??????????????
?????????? ?????? ???? ?? ????? ?????? ??????????
??? (?????????????? ?????????? ???, ????????????
? ????? ??????????????? ??????, ??? ???????
???????? ??? ? ??? ??????? ?????? ???????????). ?
???????? ???????? ??? ??????? ???? ??????????
????????????? ???????, ?????????? ?? 3'-?????
???????? ? ??????????? ???????????????????
(Froussard, 1993). RAPD ?????? (Random Amplified
Polymorphic DNA ??????????? ?????????????????
??????????? ???). ??????????????RAPD-???????
??????????? ? ???? ???????????? ??? ????????????
??? ??????????? ?????? ???? ???????, ??? ???
??????? ????????, ??? ??????? ???????,
??????????????? ??????? ? ?????? ???
????????????? ???????????? ????????? ???
????????????? ? ??????????????? ???????????? ?
?????????????? ??????????????? ?????????? ??????.
??? ??????? ????????? ??? RAPD-??????? ??????????
?????????? ????????? ??????? ?????????????????
?????????????????? ???????? ?????? ????????? o?
50 ?? 80 GC ?????????, ? ??? ????? ?????? ????
????? 10 ?????????.

9
???????? ???????? ???. Random PCR
RAPD-?????? ??????????????? ??????????
?????????? ??? ????????????? ??????????? ?????
????????? RAPD-????????????????? 5-12
???????????? ?????? RAPD-??????? ????????
??????????? ?????????? ?????????? RAPD ??
???????? ? ???? ????????????/??????????????? ???
?????? ?????????? ?????? ???????????? ?????????
??????? RAPD ???????????? ? ??????????
???-???????, ??????? ??????????????? ???????????
????????? ???????? ???? ??? ????????????
?????????????? ???????. AP-PCR (Arbitrarily
Primed Polymerase Chain Reaction ???????????
?????????????? ???). ? ?????? ???? ???
???????????? ????????, ??????? ?? ????? ?
???????? ? ???????????? ??? (15- 25 ???????????).
???????????? ????? ?????? ???????? ??????????
?????? ???????? ? ?????????? ?????? ?????? ???
????? ??????, ??? ???????????, ??????????? (???
?????????? "??????" ?????), ??? ????????
????????????? ????????????? ??? ??????????
"???????" ??????. ???????? ???????????? ?????????
? ????????? ???? ? ????????????? ?????????
???????. DAF (DNA Amplification Fingerprinting
?????????????? ????-??? ???). ??? DAF ??????????
???????? ?????? 5-8 ???????????. ???????
????????????? ?????????? ??????? ??? ???????? ?
???????????????? ???? ? ?????????? ???????? ???
??????????? ????????????? ????????? ???. ?
?????????? DAF ? ?????????? ????????? ??????????
?????????????? ? 3-10 ??? ????? ???????, ???
???-???????, ?????????? ??? RAPD-??????? ?
?????????? ?????????. ??????? DAF ??????????????
??? ?????????????? ?????? ?????????? - ??
???????? ?? ????????.

10
???????? ???????? ???. Random PCR

• ?????????? ???????????? ????? ??????? ????
  ??????? ??????? RAPD. ?? ????????????? ???
  ????????????? ???????????? ?????? ??????????
  ??????????????? ???????????? ????
• ?????? ???????????? ????????? ?????????
• ???????????????
• ???????????? ????????? ? ??.
• ? ?? ?? ?????, ???? ? ???????? ??? ?????? ????
  ???????? ????????? ???????????
• "????????????" (?????????) ???????, ???????
  ??????????? ?????????? ??????????, ?? ????? ????
  ???????????? ??? ????????? ???????????? ?
  ?????????????? ????????????????? ????????
• ??? ????????????? ??????????, ?????? ?? ?????????
  ??????????? ??????????? ???????????
  ?????,?????????? ???? ????? ????????? ? ???????
  ??????????
• ?????????????? ???????? ?????????????????
  ?????????? ????????? ????? ????????????? ?
  ?????????? ???-???????, ??????? ???????????
  ?????????? ????? ???? ???????? ???? ???
  ???????????? ?????????????? ???????.

11
Random PCR (RAPD, DAF, AP-PCR), AFLP
????????????? ???????????
???????? ???? ?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ????????
???????? ???? 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Oligo 122840 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1
Oligo 12670 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1
Oligo 12530 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1
Oligo 12380 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0

RAPD-?????? ???????? ????? ??? ?????????????
???????? Oligo 12(?????????? ?????, ???????????
???????? ?????????? ???????)
RAPD, DAF, AP-PCR, AFLP. ?????? ??????????
??????????? ???????? ????????? (RAPD, AP-PCR),
???? ? ??????? ???????????? ????????????
??????????? ?????????? ?????????
???????????????????? ??????? (DAF, AFLP). ??????
?????? ???????? ??????????????? ??????????? ?????
?????????? ? ??????????? ???????? "1" - ???????
????????? (??????????? ??????) ? "?" - ??????????
????????? (??????????? ??????), ? ??? ??? ????
???? ??????? ????????. ?????? ?? ????????????
????????? ?????????? ???????? ?????? ??????,
????????? ???????????? (?? ???????????? ??????) ?
?????????????? ???????? ????????, ???
????????????? ?????????? ??? ???????????? ??????,
?? ?????????????? ?????????. ??? ??????????????
????????? ??????????? ??????(???????) ???
????????? (???????). ??????????? ??? ????????????
?? ???????? ????????, ??????????? ???
???????????? ?????? ???????, ? ??????? ???? (?
????? ???????????) ? ????????????. ???, ????????,
???? ???????? ? 670 ?.?. ? ???????????????????
??????? ????????? ??? ? ????????? Oligo 12
???????????? - Oligo 12670.
12
Random PCR (RAPD, DAF, AP-PCR), AFLP CAP
???????????? ???????????
?????? ???????? ??? ?????????? RAPD-???????
???????? ????????????? ????????????? ??????
????????????? ??? ??? ??????? ????, ?????????
????????? ????????, ??????????? ??? ?????
???????? ? ????????? ??????????? ???????. ???????
??????????? ??? ????? ???? ??????? ? ????????????
????????? ?????????? ?????????? ???. ?????????
???????? ??????? ????? ???? ???????, ??? ????????
???????? ???????????, ??? ? ???????????
???????????? ????????? ??????. ??????????
???????? ??? ????? ???? ?????????? ???????????
??????????? ??????, ????????? ????????????
??????? ?????? ? ??????????? ????? ? ?. ?.
??????????? ???? ?? ??????? ??????????? ? ?
?????????? ?? ???????????. ??? ?????????????
????? RAPD-????????? ?????????? ????????
??????????????? ???????????? ?????????????????
?????????? ????????. ?? ????????? ??????????????
??????? ??????? ????????? ?????? ???????? ??????
????, ?????????? ?????? ??????????????????. RFLP,
???. ????????????? ?????????? ???????? ????????
?????? ?? ?????????? ? ???????? (? ?????
???????????) ?????????? ???.

RFLP-?????? ???????? ???? ??????????? ???
????????????? ?????????? ??????????? Hindlll ?
????? Rbkl 12 (?????????? ?????, ?????????????
???????? ?????????? ???????) ?????? ? 1 ????
2220 ?.?. (?????????? ??????????), ? 2 ????
2120 ?.?. ? 100?.?., ? 2 ???? 1660 ?.?. ? 560
?.?. ???????? ???????? Rbkl 12(HindIII) 1 ??,
2-5,7 ??, 6 ??, 8 ??
13
???????? ???????? ???. Random PCR
????? ???????, ?????? ?? ??????????????? ?
????????????????????? ???????????? RAPD-???????
? ??????? ????????, ????????????? ??????
?????????? ? ????????????-???????????? ?
??????????????? ?????????????, ??? ?????????,
????? ??? ???????????. ??? ??????????
???????????? ?????, ????????, RAPD-?????? ???????
?????????? ??????????? ???????, ???????? ???
????????? ?????????, ??????, ??????, ???? ? ?.?.
??? ??????? ? ??????? ??????????? ????????,
?????????? ? ??????? ??????? ??????. ???
????????????? ???? ?????? ??????-???? ????????,
RAPD-?????? ?????? ??????????? ? ???? ???? ?
????? ??????????, ?.?. ????????? ??????????.
????? ???????, ???????? ????????? ????????, ?????
??????? ? ? ?????????? ???????????? ?????
???????????? ????????. ??? ????????? ??????????
??????? ?????????? ?????????? ???, ????????????
?? ????? ??????. ?????? ??? ???????????? ????????
??? ??????????? ??????????? ???????????? ???????
??????. ? ???? ??????? ?????????
????????????????? ????????? ??????????? ? ??????
?????? ????????? ?????? ?????, ??? ?????????? ??
????????????????. ??? ??????????? ???? ????????
?????????? ???? ????????????? ?????????????
???????? ??? ???????????? ?????? ??????????? ????
??? ????????????? ????????? ???.

14
???????? ???????? ???. STS PCR
??????????, ??????? ????????? ?????????
???-?????? ????????? ??????????? ?????????? ???
????? ????????? STS (Sequence-Tagged Sites). ?
??? ?????? ????? ????? ?????? ??? SCAR, EST,
ISSR, CAPS, STMS ? ??.,???????????? ?? ?????
???????? ? ????????? ?????????????????
??????????.? ?????? ?????? SCAR
(Sequence-Characterised AmplifiedRegions),
????????????? ? ??????? ???-??????? ?
??????????????????????? ????????????? ?????????,
??????? ????? ??????????? ????????? ????? ???
????, ????? ????????? ???????? ??????,
??????????? ??? ???????????? ????????????
?????????????????? ? ??????????? ?????????????
????????, ????????????????????? ? ????? ???????
??????? ??? (Antolin, 1996). ??? ?????????????
?????? EST (Expressed Sequence Tag) ???-????
???????? ?? ?????? ??????????? ??? ???????
?????????????????? ???, ?????, ? ???????
???????? ???????? ?????????????, ???????????
????, ??????????????? ???? ????, ??????????? ?? ?
??????????? ???????? ??? ?????? ? ????? ????, ???
??? ?????????(Karp et al., 1997). ????? ??
???????? ?????????? ???????, ????????????
???????????????? ?????????? ?????? ????, ??????
SSR-????? (SimpleSequence Repeats), ???
STMS-????? (Sequence-Tagget Microsatellites),?
?????? ???????? ????? ?????? ???????????????.

15
???????? ???????? ???. STS PCR
???????????? ?? ?????????????? ??????????
???????? ??-??????????????? ?????????, ?????????
?????? ?????????????????? ???????, ? ???????
???????? ???? ???????????? ???? ??????????????
????? ???????????? ?? ????? ????? ???. ?
??????????? ?? ????? ? ????? ???????????? ?????
????????????????? ????? ??? ?? ??????????????
?????????? VNTR (Variable Number of Tandem
Repeats - ???????????????? ????????? ????????).
???????????? ????? ????????????? (???????????)
??? ??????? ?? ???????? ????????????? ?????
??????1-6 ??????????? (??????????????, ??? SSR -
Simple Sequence Repeat) ? ?? 9-10 ?? ?????????
????? ??????????? ?????? (?????????????).
??????????????? ????? ????? ??????????? ??
?????????? ????? ????????, ???????????????? ?????
- ?? ??? ????????. ??????? ???? ????????/???????,
???????? ????? ????????, ?. ?. ????? ????? ?????
????????????? ??????????????????. ????? ???????,
?????? ?????? ??????? ?????????? ???? ?? ?????
?????? ???????? ????????????? ?????. ???????????
???????????????? ??????? ?????????? ? ????? 5 ?
????? ?????????. ?????????? ????? ?????? ?
"???-?????????????" ?????? ???????????? ????.
???, ????????,????????????? ?????? 5
???????????????? ??????? ????????? ??????????
????? ? ????????? ? ???????? ?????? ????? 0,01.

16
???????? ???????? ???. VNTR ??????

??????????? - ????????????? ????? ??? ??????
???????? ?????????????????? ??? (????, ???????) ?
????????, ??????????? ??????? ?????????
???????????. (?? ???????? gt1)
17
???????? ???????? ???. VNTR ??????

?????- ? ??????????????? ??????? ???????????????
????????????? ????? ?????????? (?? ???????????
"???????" ???????). ????? ???????, ????????????
??????? ???????????? ?? ??????????? ?????
????????, ? ?????????????? ????? (??????????
?????) ? ????? (???????????? ?????)
???????????????????? ??????????.
????? ????????? ???????????? ??? VNTR-???????
18
???????? ???????? ???. STS PCR
SCAR (Sequence-Characterised Amplified Regions -
??????????????? ??????? ? ????????? ????????????
???????????????????). ?????? ??????? ????????????
???-????????, ??? ??????? ?????????? ????????????
??????????????????). ???? ?????? ??????? ????????
??????????? ????? ??? ??? ??????????, ?? ??????
?????? ???????????? ??? EST-?????? (Expressed
Sequence Tag - ??????????????? ????????????
??????????????????). ??????????????
?????????????? ?????? SCAR-???????? ???????
???????? CAPS-?????? (Cleaved Amplified
Polymorphic Sequence - ??????????? ??????????
????????????????? ??????-??????
???????????????????), ??? PCR-RFLP.

????? ??????? ????????? ???????????? SCAR-???????
(?????????? ?????)
19
???????? ???????????? ?? ????????? ???????????
(SNP)

????? ??????? ????????? ???????????? SCAR-???????
(?????????? ?????)
20
???????? ???????? ???. STS PCR
????????????? ???. ???????????? ??? ?????????
????????? ???????????? ? ?????????????? ?????.
??? ???? ???????????? ???, ??? ???? ?? ????
????????? ??? ??? ??????? ? 100-??????????????.
?? ?????? ?????? ??????? ?????????? ???????????
?????????????? ??? ? ???????????????? ???? ??
??????????. ??? ????????? ????????????? ????????
????????????? (???????? ? 20-???????),
?????????? ??????????? ?????????????? ???. ??
?????????? ????? ???????? ????????, ?? ?????
??????????? ?????????? ????????????
?????????????? ??? ? ???????????, ???????????
????????????????? ??? ????????????? ? ????????
?????. ??????????????? ???. ???????????? ???
???????? ??????????? ???????? ????? ?????????
??????, ?????? ?????????? ??????????, ?????????
?????????. ??? ????????????? ????????????,
???????? ??????? ?? ?????? ?????????
??????????????????, ? ? ????????? ?????? ?????? ?
????? ??. ???????????? ???????? ??? ?????????? ?
?????? ? ??????? ???-?????? ? ??????????????? ?
?????????? ???. ???????? ??????? ?? ???????????
??? ??????????? ? ???, ??? ????????,
??????????????? ? ????????? ????????? ?????????
??????????????????, ?????????? ?'-??????? ??
?????? ??, ? ??????. ? ?????????? ???????????????
???????????? ??????? ???.

21
???????? ???????? ???. STS PCR
??????????? ???. ???????????? ? ???????, ?????
??? ??????? ??????????? ???????, ???????????
????????????, ???????? ????????????
?????????????????? ???? ??? ?????? ????????
(?????-???, ? ?????? ??????? ???, ??? ???????
????? ?????????? ???? 3'-????????
??????????????????). ????? ??????? ? ???, ??? ?
???????? ??? ???????? ????-?????, ? ?'-?????
??????? ????????????????(dG)-???? ? ???????
???????????? ???????????. ???????????? ????? ????
???????? ??? ??????? "????????????" ????????,
??????????? ?? 3'-????? ????(dC)-?????????????????
? ? ?????? ???????????????? ? ????(dG-??????, ?
"??????????????'" ????????, ???????????????? ??
????????? ????????? 3'-????????
?????????????????? ???. ????? ??????? ? ??????
STS-??????????, ??????????? ???????????????
????????? ?????????. ?????? ?? ??? ?????????? ??
????????? ?????????????? ??? ??????????????
??????????? ???-??????. ?????? ??????????? ???.

22
? ? ? ? ???????? ???????
23
??? ? ???????? ???????. ???????? ?????????.
?????? ??? ? ???????? ??????? ????? ????????? ??
??? ???????? ??????, ????????????? ?? ????????
????????? ????????? ????????????? 1) ??????????
??????????????? ?????????????? ???????,
????????????? ??????? ??????????? ?????????? ???
?????????? ? ?????????????? ??? (???????????????
?????????? ???????? ????? ???????? SYBR
Green) 2)????????????? ???????? ???????????????
???????? ????????????????? ????, ???????????????
??????? PCR-???????? (????????? TaqMan,
Molecular Beacons ? LightCycler).

24
??? ? ???????? ???????. SYBR Green ????????

• SYBR Green ?????? ?????????? ?? ???????? ?
  ????????????? ??????????? ???????????????
  ?????????? ???-SYBR Green (Morrison et al.,
  1998). ??????????? ????????? SYBR Green
  ??????????? ? ??????????? ???????????? ?????????
  ?????? ? ?????????????? ????????? ???, ??????? ?
  ??? ???????????? ?????? ?? ?????? ??????
  (???????-??????? ???) ? ????????? (????????).
  ????? ???????, ????????? ?????????????? ???????
  ?? ???????? ????? ????????? ??????? ????????????
  ?????, ?????????, ???????? ?????????? ?????
  ?????????? ? ???? ???.
• ??????????? ?????????? SYBR Green ????????
  ??????? ? ??????? ? ??????????, ???????????
  ??????? ???????? ??????????? ? ?????????? ???????
  ????????????.
• ??????????
• ?????????? SYBR Green ??????????? ????? ???????
  ?????????? ? ????????????? ???????. ???
  ?????????? ????? ? ???? ??? ?????? ?????????
• ?????????? ???????? ?????????????
  ??????????????? ????????
• - ??? ????????????? ?????? ?????????? ?????
  ???????? ?????? ? ????? ???????? ? ?????
  ??????????? ????? (? ???????, ????????, ??
  TaqMan, ??? ????????????? ???? ? ?????
  ??????????? ????? ???????????? ??????????????
  ????????????? ??????????? ?????????????) ?, ???
  ????????? ??????????? ????????? ??????? ???,
  ??????????? ??????????? ???????? ???????????
  ????????????.

25
??? ? ???????? ???????. TaqMan ????????
TaqMan ??? ??????? ?? ?????????????
5'-?????????????? ?????????? ?????????? (Held et
al., 1996). ? ??????????? ????? ????????? 2
????????, ??????????????? ????????, ????????????
??????????????? ?????, ? ???-???? (?????),
???????? ?? 5'-????? ?????????????? ??????????
(?), ? ?? 3'-????? ????????? ????????????? (?).
???? ?????????????? ???????, ???????????? ??????
?????????. ???????? ????????? ???????????
?????????????? ?????? ?????????. ??? ?????? ????
??????????? ? ??????????????? ???????? ??? ??????
?????????. ?? ????? ?????? ????????? ??????????
??????????? ??????????????? ???? ??? ?, ????? ??
???????, ???????????????? ? ??????, ????????
??????-???? ??? ?? ???? 5'-??????????????
??????????. ? ?????????? ?????????????? ?????
?????????? ?? ????????, ? ?? ???????? ?????????
?????????????. ????? ???????, ??????????
?????????????????? ??????????????? ??????????
????? ??????????.

26
??? ? ???????? ???????. TaqMan ????????
???????? ??????????? ??????????, ?????????? ??
?????????????????? ??????????????? ????????
????????????????? ??????,? ?????????, TaqMan,
???????? ?????????? ??????? ?? ???????????
????????? ? SYBR Green. ??????? ????? ? ????, ???
??? ????????????? ?????????? TaqMan ???????
?????? ???????????? ?????????????? ??????? ?
??????? ?? ?????????? ???????????????????????????
?? ???????, ??? ???????? ??????????? ???????????
?????? ? ????????? ???????? ????????? ?????, ???
??? ?????? ??????????? ?????????
????????????. ??? ????????????? ? ????????
??????? ???????? ???, ? ?????, ? ???????????
????? ??????????? ???????? ??? ??????????????????
???????????? ? ? ????????? ??? ?? ?????? ?????
?????-?????? ?????? ????, ??????? ?????
????????? ? ???????? ??????????????? ???
??????????? ????????????.

27
??? ? ???????? ???????. Molecular Beacon Ligft
Cicler
Molecular Beacons ?????????? ?? TaqMan ???, ???
????? ????? (?? ??????? ?????????,
??????????????, ????? ? ???????? ?????????????)
?????????????? ???? ????? (Mhlanga, Malmberg,
2001). ? ??????????, ??? ??????????? ??????
????????? ??? ???????????? ? ???????? ?????????
???? "????? ??????????" (stem-loop), ??? ????
????????????????? ????? ? ?????????? ??????
????????? ? ?????. ??? ???????????? ????? ?
???????? ????????? ????????? ???????????,
?????????????? ????? ? ???????? ?????????? ?
?????? ??????? ? ????????????? ?? ????? ?????
???? ?????????????. LightCycler ??????????
???????? ?? ????????????? ???? ??????, ????????
?????????????? ?????? (Wittwer et al., 1997).
??????? ?????? ??????????? ? ???????? ??????? ??
?????? ??????????,???????????? ?? 3'-?????
??????? ????? (?), ?? ??????? ??????????,
???????????? ?? 5'-????? ??????? ????? (?),
??????? ?????????? ? ??? ??????, ????? ??????????
????? ???????????? ?????????? 1-3 ??????????. ???
????????? ?????????? ??????????? ??? ?? ?????????
??????????, ??? ? ?? ????. ????????????? ????
??????? ?????? ? ??????????? ?????? ?????? ?????
????? ?? ???????? ?????????.

28
??? ? ???????? ???????. ????????????? ???????????
Real-Time qPCR. ?????? ????? ??????? ?????????
???????? ??? ?????????????? ?????? ? ????????????
????????? ?????? ? ??????? (????????, ???
???????? ???????????? ???????????? ?????
??????????????? ? ?????? ???? ??? ????), ??? ?
???????????? ?????? ?? ?????????????? ?????????
(???????????????). ??? ????????????? SYBR Green
?????????, ??????????????????????? ??
?????????????? ????????? ?????????? ?????????
????????? ??????????, ??? ??????? ? ?????????????
??????? ? ????????????? ??????? ?????????
?????????? ???. ??? ?????? ??????????? ?????????
?????????? ? ????? ????????? ????????????
???????? ?????? ?????? ????????? ????????????
???-?????????. ? ??????????? ???????,
???????????? ??????????? ???????????, ?????????
?????? ??????????? ??????? ?????????????
????????????? ? ??????????? ?? ???????????
(-dl/dT), ???????????? ?????? ? ???? ?????,
?????????? ??????????? ????????? ??????????. ?
?????? ??????? ?????? ???? ???????
???????-???????? ???????? ???? ??????????
???????, ?. ?. ??????????????? ??????????. ????
???????????? ??? ????????? ????
??????????????????? ??? ????????????.

29
??? ? ???????? ???????. ????????????? ???????????

?????? ????????? ??????????????? (?????) ?
????????????? (??????) ?? ?????? QZag12 ????????
???? ????????? (?????????? ?????) ? ??
??????????????????? ???????.
??? ????????????? ??????? ?????? ????????? ???
???????????????, ??????? ????????? ????????
?????????? ??????????????? ?????????? ?
???-???????, ??????? ????? ?????? ?????? ????, ?
????? ??????? ??????????? ???????? ??????????
????????? ????????? ?????????. ??? ??????????
?????? ??????????, ?????????? ?????????? ???????
????? ?????????? 5-7 ?????????. ????????????
???????? ?? ????????? ????????????? TaqMan
?????????, ??????? ????????????? ??????????
??????, ??????? ????? ??????? ?????????
?????????. ??? ????????????? ?????????????
?????????? ?????? ? ???-?????, ??? ??????
?????????? ????????? ?????????? ????? ???
????????????? ???????? ?? ?????? ??????? (??????
?????? ????) ??????????? RealTime-????????????.
30
??? ? ???????? ???????. ????????????? ???????????

??????? ????????? ????????????? ??????? ???
???????????? ? ?????????????? ???????? ???
???????? ???? ????????? ???? ???? ? ???? TaqMan
?????????. ???????? ???????? 1 ??, 2 ??, 3
??.
????????????? ?????????? ??????????? ???????????
? ????????? ? ???????????? ?????????? ? ???? ???
????? ?????????????????????? ????? ?????? ??????
????, ?, ??????????????, ?????????? ?????????????
???????? ?????? ? ????? ???????????? ????????
???????. ? ?????????????? ?????????? ? ????
??????? ????? ??????????? ??????????? ?????? ????
????? (? ?????? ?????????? ??????) ?,
??????????????, ?????????? ??????? ??? ????
????????? ???? ???? ? ??????? ??????????.
31
??? ? ???????? ???????. ????????????? ???????????

32
??? ? ???????? ???????. ????????????? ???????????