Pr

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Séparation magnétique des plasmocytes dans le
cadre des myélomes multiples
Elodie DAVID Equipe Onco-hématologie en
cytogénétique
Prolonger votre offre de soins, jour après jour
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Sommaire

1. Le Myélome Multiple Définition

2. La purification des plasmocytes Pourquoi
?
3. La séparation magnétique Principe
4. Les outils de séparation Différents
appareils
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1. Le Myélome Multiple
3 stades (classification de Durie et Salmon)
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1. Le Myélome Multiple

• Signes cliniques
• Lésions osseuses
• Hypercalcémie
• Anémie
• Insuffisance rénale

• Diagnostic
• Mise en évidence dune gammapathie monoclonale
  sérique et/ou urinaire
• Mise en évidence dune prolifération
  plasmocytaire médullaire

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1. Le Myélome Multiple

• Anomalies cytogénétiques
• Hyperdiploïdie 48-74 chromosomes 3, 9,
  15, 19
• Hypodiploïdie
• t(414)
• Délétion totale ou partielle des chromosomes 13
  et 17

• Diagnostic et suivi

Cytogénétique conventionnelle vue densemble du
caryotype ? hyperdiploïdie
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2. Pourquoi une purification des plasmocytes?
Etude du Myélome Multiple étude des plasmocytes
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3. Séparation magnétique des plasmocytes
Plasmocytes CD138
Principe
1. Marquage spécifique des plasmocytes Ac
anti-CD138 couplé à une bille magnétique
2. Tri sur colonne magnétique
3. Création dun champ magnétique
4. Récupération des plasmocytes en cassant le
champ magnétique
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3. Séparation magnétique des plasmocytes

• VarioMACS et AutoMACS

9
3. Séparation magnétique des plasmocytes

• VarioMACS et AutoMACS

? Perte cellulaire dans le ficoll
- agrégations protéique et plasmocytaire
? Colonnes et valves souvent saturées
? Technique lourde (temps)
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3. Séparation magnétique des plasmocytes

• AutoMACS Pro

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3. Séparation magnétique des plasmocytes

• AutoMACS Pro

? Travail sur moelle totale Ac anti-CD138 plus
concentrés
? Adaptation du programme de séparation
? Tampons plus agressifs et filtres 40 µm
? Automatisation
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CONCLUSION
Séparation magnétique

• routine dans les bilans de myélome multiple

• si nécessaire préférée à la mise en culture

• support pour les études pangénomiques

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Remerciements
Léquipe donco-hématologie en cytogénétique,
CERBA Léquipe de FISH, CERBA Hossain MOSSAFA,
cytogénéticien à CERBA MILTENYI
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Annexe 1 Classification de Durie et Salmon
http//med2.pagesperso-orange.fr/import/CANCERO/CL
ASSIFICATION/MYELOME.htm
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Annexe 2 quelques anomalies cytogénétiques
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1er test 2007 Programme Possel-D avec
utilisation uniforme de 50µL dAc anti-CD138
Annexe 3 mise en place dun nouveau protocole
Patient Bone Marrow (ml) Total WBC Plasma cells slide Theoric Total plasma cells MicroBeads Control Purity by flow cytometry Obtened Total Labeled P cell Performance
07D0570753 4.8 mL 3.3106 c/mL 36   50 µL 94,60 5.3105  
07D0570753 4.8 mL 3.3106 c/mL 60 6.5106 50 µL 94,60 5.3105 8,15
07D0572733 6.2 mL 5.8106 c/mL 8   50 µL 93,4 5.6105  
07D0572733 6.2 mL 5.8106 c/mL 72.7 2.6107 50 µL 93,4 5.6105 2,15
07D0566314 4.3 mL 4.1106 c/mL 5   50 µL 68,40 10.9104  
07D0566314 4.3 mL 4.1106 c/mL 59.3 1107 50 µL 68,40 10.9104 1,10
07D0577164 5.8 mL 5.6106 c/mL 4   50 µL 72,80 1.7105  
07D0577164 5.8 mL 5.6106 c/mL 1 3.2105 50 µL 72,80 1.7105 53,13
07D0583892 3 mL 4106 c/mL 22   50 µL 88,40 2.5105  
07D0583892 3 mL 4106 c/mL 15 1.8106 50 µL 88,40 2.5105 13,90
07D0583530 5.3 mL 8.4106 c/mL 0   50 µL 65,50 5.2104  
07D0583530 5.3 mL 8.4106 c/mL 5 2.2106 50 µL 65,50 5.2104 2,36
07D0587071 2.7 mL 3106 c/mL 15   50 µL 88,70 1.8105  
07D0587071 2.7 mL 3106 c/mL 12 9.7105 50 µL 88,70 1.8105 19
07D0606916 6.1 mL 7.7106 c/mL 3   50 µL 31 7.4104  
07D0606916 6.1 mL 7.7106 c/mL 1 4.7105 50 µL 31 7.4104 15,70
07D0609147 6.8 mL 1.1106 c/mL 60   50 µL 54,10 1.5105  
07D0609147 6.8 mL 1.1106 c/mL 5 3.7105 50 µL 54,10 1.5105 40,50
07D0609191 6.3 mL 1.6107 c/mL 8   50 µL 65,50 1.8105  
07D0609191 6.3 mL 1.6107 c/mL 1 106 50 µL 65,50 1.8105 18,00

  of plasma cells reported by cytologist of plasma cells reported by cytologist of plasma cells reported by cytologist of plasma cells reported by cytologist of plasma cells reported by cytologist      
  and total plasma cells number determined by flow cytometry labelled by CD138/CD38 and total plasma cells number determined by flow cytometry labelled by CD138/CD38 and total plasma cells number determined by flow cytometry labelled by CD138/CD38 and total plasma cells number determined by flow cytometry labelled by CD138/CD38 and total plasma cells number determined by flow cytometry labelled by CD138/CD38 and total plasma cells number determined by flow cytometry labelled by CD138/CD38 and total plasma cells number determined by flow cytometry labelled by CD138/CD38  
Mauvais rendement adaptation de la quantité
dAc 50µL Ac pour 107 cellules
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Annexe 4 Comparaison des programmes de
séparation
Possel-DRinse Possel WBClean
Pas assez de noyaux pour réaliser une FISH