Techniques et m

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Techniques et méthodes d'analyse
anatomopathologique des implants de radiologie
interventionnelle
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Techniques Utilisées en Anatomie Pathologique

• Techniques histologiques standard
• d'inclusion en paraffine
• Microscopie optique
• Colorations "standard" (HES)
• Colorations signalétiques
• Techniques plus spécialisées
• Histochimie
• Immunohistochimie
• Histoenzymologie
• Hybridation in situ
• Microscopie électronique
• En transmission (TEM)
• En balayage (SEM)

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Colorations signalétiques et histochimie Exemple
s Mucosubstances PAS (acide
periodique-Schiff) Bleu alcian (à ?
Ph) Collagène Safran (/-) Trichrome de
Masson Rouge Sirius (quantification) Elastin
e Orcéine (quantification) Fer Réaction de
Perls
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Immunohistochimie Détection d'antigènes
tissulaires à l'aide d'anticorps monoclonaux ou
polyclonaux Antigènes conservés ou anticorps sp
d'espèce Etude des population inflammatoires
, de la différentiation cellulaire de
l'expression de certains gènes Contraintes
quand à la fixation souvent nécessité de
matériel congelé
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Hybridation in situ Présence dans les tissus de
gènes (ADN) ou d'ARN messagers (transcription
d'un gène) Sondes radioactives ou
enzymatiques Histoenzymologie Mise en évidence
d'activités enzymatiques tissulaires par leur
action sur un substrat chromogène Mise en
évidence de l'apoptose cellulaire Méthode
TUNEL Expression des caspases ... Quantification
(qs)
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Techniques Utilisées en Anatomie Pathologique

• Examen macroscopique
• première étape indispensable à l'étude de tout
  prélèvement
• sauf prélèvements instrumentaux de petite taille
• sa qualité peut conditionner l'interprétabilité
  des résultats
• description, photographies, repérage des lésions
• préparation des prélèvements
• repérage, orientation, étiquetage et
  identification
• choix du type de fixation ou de conservation
• Coopération avec l'anatomopathologiste

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La Fixation et les fixateurs
Définition Immobiliser et conserver les cellules
et larchitecture tissulaire, de façon aussi
proche que possible de leur aspect à létat
vivant et de les rendre capables de supporter
sans dommage les étapes techniques suivantes Le
choix du fixateur varie en fonction de la
technique d'étude envisagée de la taille du sujet
d'expérience de la taille des prélèvements Fixate
urs liquides "Fixation" par congelation Immunoh
istochimie Histoenzymologie Biologie
moléculaire
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La Fixation et les fixateurs
Les fixateurs liquides Solution de
formaldéhyde dit à 10 dilution 10 fois du
formol du commerce (30 à 40) Solution de
Karnovski Paraformaldéhyde glutaraldéhyde Liqu
ide de Bouin, etc Fixation par injection
(intravasculaire, intratrachéale) immersion taille
des prélèvements
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Histologie méthodes

• Fixation
• Mise en oeuvre rapide
• Durée adéquate (quelques heures à quelques jours)
• Choix du fixateur adéquat, fonction
• techniques complémentaires éventuelles
• taille du prélèvement..
• En quantité suffisante pour la taille du fragment

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Histologie méthodes

• Etapes après la fixation
• Formation dun bloc de paraffine contenant le
  prélèvement
• Mise en cassette
• Déshydration du prélèvement dans les alcools, et
  passage dans le toluène
• Enrobage dans la paraffine liquide chaude
• Mise en précelle, refroidissement
• Coupes au microtome, 4 µm
• Etalement sur lame

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(No Transcript)
12
(No Transcript)
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Histologie méthodes

• Colorations
• Affinités dun tissu pour un colorant
• Tous les constituants tissulaires peuvent être
  colorés, de façon différentes, et le rester
• Substances naturelles, extraites dinsectes
  (cochenille.), de végétaux (safran..),
  actuellement industrielles
• Les structures acides prennent les colorants
  basiques (basophiles) et, basiques les colorants
  acides,acidophiles
• Après élimination de la paraffine et
  réhydratation

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Automate à colorations
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Choix de la technique d'inclusion microscopie
optique
Caractéristiques du prélèvement Techniques utilisables
Mou tissus non osseux, implants peu durs Inclusion en paraffine ou coupes en congélation
Dur tissus osseux - Décalcification et incl. en paraffine - Inclusion en résine plastique
Dur implant métallique ou plastique dur - Inclusion en résine plastique - Ablation de l'implant et inclusion en paraffine
Soluble dans les solvants organiques - coupes en congélation - Inclusion en résine hydrophile - Inclusion en paraffine
Elastique ???
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Réaction tissulaire aux implants plastiques la
réaction inflammatoire

• Réaction fondamentale des organismes supérieurs
  aux agressions diverses
• très stéréotypée dans son déroulement
• Importance plus ou moins grande de ses diverses
  composantes (phases)
• En fonction de la cause de l'inflammation
• En fonction des conditions locales et générales

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• Phase précoce la réaction inflammatoire aiguë
• prédominance des phénomènes vasculaires
• congestion, œdème, exsudat fibrineux
• prédominance des polynucléaires neutrophiles (/-
  macrophages)
• Phase intermédiaire
• prédominance des cellules lymphoïdes et des
  macrophages
• Phase chronique ou cicatrisation
• en cas de persistance de la cause
• prédominance de la fibrose
• /- lymphocytes, macrophages et cellules géantes

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IBC inflammation aiguë puis réaction à corps
étranger prolongée
19
(No Transcript)
20
Matériau rapidement résorbable les mousses de
gélatine
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Mousse de PVA
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(No Transcript)
23
(No Transcript)
24
(No Transcript)
25
(No Transcript)
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Importance du calibrage et de l'aggrégabilité

• Ciblage du site d'embolisation
• Respect des collatérales d'importance
  fonctionnelle
• Modulation des effets tissulaires
• Risque d'oblitération proximale ou du cathéter

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Microsphères de Trisacryl/gélatine
28
(No Transcript)
29
Mise en évidence des lames élastiques, migration
transvasculaire
30
Etude d'éléments métalliques
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La quantification (1)comptage, mesures directes
32
Etude quantitative de la pénétration de
microsphères
1 artère ré nale branches 2 a.
interlobaires 3 jonction 4 corticale
profonde 5 corticale superf.
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Taille des vaisseaux occlus / localisation
p lt .0001 KW
1000
800
600
Mean 620 mum SD 300 mum Median 561 mum
Vessel diameter (micrometers)
Mean 484 mum SD 195 mum Median 456 mum
400
Mean 344 mum SD 117 mum Median 360 mum
Mean 259 mum SD 106 mum Median 242 mum
200
0
Interlobul. prof
Interlobul superf
Jonction
Interlobaire
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Diamètre vasculaire / taille MS
Plt .0001 KW
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Autre modèle Localisation des MS dans lutérus
plt.0001(chi2)
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Déformation
A
B
Déformation () (100 Length Width) /
Width Exemple L 120 mum W 100 mum
Déf 20
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Déformation ()
38
Déformation ()
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Test de compression / décompression
MS A
MS B
40
La quantification (2)
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Méthode de l'occulaire intégrateur
42
densitométrie
43
HES
CD2
CD4
CD8
CD14
CD21
Eosinophils but not LB
Analyse automatique basée sur la couleur des
pixels (immunohistochimie)
CD68
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Référence
Prototype
CD2
1w
3w
8w
45
(No Transcript)
46
(No Transcript)
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CD2
CD4
MW NS
MW p0,0048
MW NS
MW p0,0003
MW plt0,0001
MW p0,0411
CD8
CD21
MW NS
MW plt0,0001
MW NS
MW NS
MW plt0,0001
MW p0,0176
CD68
CD14
MW p0,0061
MW NS
MW p0,0001
MW p0,0215