Dra. Maria Rita Elmor Ara

1
Dra. Maria Rita Elmor AraújoHospital Sírio
Libanês

• Qualidade Geral em Métodos de Automação

2
Sistemas Disponíveis

• Sistema Vitek (bioMérieux)
• Vitek
• Vitek 2
• Sistema MicroScan (Dade Behring)
• AutoScan-4
• WalkAway 40 ou 96

3
Sistema Vitek
Sistema Vitek 2
Cartões
4
Sistema MicroScan
AutoSCAN - 4
Walkaway 40 e 96
Painel
5
Sistema Automatizado

• Vantagens
• Padronização dos resultados
• NCCLS atualizado
• Rapidez
• gt Número de provas bioquímicas
• Gerenciamento dados / Interface
• Sistema expert
• Arquivamento de cartões / cepas
• VITEK 2 e Walkaway 40 e 96 totalmente
  automatizado

6
Sistema Automatizado

• Limitações
• Custo elevado
• Banco de dados não abrange identificação de
  alguns patógenos
• Antibiograma não padronizado para germes como
  Stenotrophomonas maltophilia, Pneumomoco,
  S.viridans, Não fermentadores
• Falsa sensibilidade
• Falsa resistência

7
CQ - Vitek e MicroScan

• MANUTENÇÃO do EQUIPAMENTO
• SELADORA / LEITORA
• Preventiva ( seguir protocolo do Manual
• Corretiva

8
CQ - Vitek
COLORÍMETRO
Tubo c/ inóculo
Cristal violeta Caneta Pilot
Salina 0,45
100 T
0 T
Bateria
Botão de Leitura
9
Aferição da escala de McFarland ( Remel p/
Vitek )
3 NHI / ANI
2 YBC
1 GNI / GNS
0.5 GPI / GPS
10
CQ Vitek

• SALINA 0,45 estéril, pH 5,5 a 7,2
• Preparada ou Comercial
• Dispensador autoclavar a cd reposição de salina
• (ou 1x / mês)
• Controle esterilidade após o preparo e ao final
  de cada rotina (ou controle de pureza do inóculo)
• Averiguar periodicamente o volume de pipetagem
• (1,8 mL)

11
CQ - Vitek / MicroScan

• PAINÉIS ( CARTÕES )
• Recebimento temperatura de transporte adequada?
  
• ( 2 a 8 º C )
• Checar data de validade
• Armazenamento 2 a 8 º C / Não congelar
• Inspeção visual env. Alumínio
• Deixar atingir T.A . antes de abrir

12
CQ Vitek Identificação
GNI K. pneumoniae ATCC 13883 ATCC 700603
GPI E. faecalis ATCC 29212
NHI H. influenzae ATCC 9006
ANI Bacteroides vulgatus ATCC 8482
YBC Candida albicans ATCC 14053
UID NFC P. aeruginosa ATCC 27853
13
CQ Vitek Teste de Sensibilidade
GNS-655 E.coli ATCC 25922
P.aeruginosa ATCC 27853
E.coli ( inib. betalactamase ) ATCC 35218
E.coli( ESBL ) K.pneumoniae (ESBL) ATCC 51446 ATCC 700603
E.faecalis ( timidina - SFT ) ATCC 29212
14
CQ Vitek Teste de Sensibilidade
GPS-650 E. faecalis ATCC 29212
S. aureus ATCC 29213
E. coli (inib. betalactamase) ATCC 35218
E. faecalis (Van, Gen HL, Estrep HL) ATCC 51299
15
CQ VitekIdentificação
16
CQ - Vitek
17
CQ - Vitek / MicroScan

• Discrepância dos resultados
• Inspeção visual do cartão ou painéis bolhas,
  falhas preenchimento?
• Padrão McFarland utilizado?
• Outras ATCC X cartões fora do intervalo?
• Esterilidade da salina? (amostrar)
• Conc. salina adequada? (0,45)
• Padrão colorímetro ou turbidímetro?
• Subcultivo ATCCs? (?t prolongado. T.A . ) T.
  ambiente altera características)

18
CQ - Vitek / MicroScan

• Discrepância dos resultados
• Repetiu o teste c/ isolado fresco?
• ATCC correta ?
• Registrar nº lote, tipo cartão, microrganismo,
  resultado discrepante
• Se não resolvido, contatar fabricante

19
Processamento - Vitek

• Triagem da colônia
• Pura / recente ( lt 24h )
• Gram
• Escolha do painel / Cartão
• GNI Enterobacteriaceae, Não Ferm.,
  Vibrionaceae
• GNS-655 Enterobacteriaceae, Pseudomonas ( ? ),
  
• Acinetobacter ( ? )
• GPI Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus,
  
• alguns BGP (Erisipelothrix,
  Listeria, Coryne...)
• GPS-650 Staphylococcus, Enterococcus, alguns
  Strepto
• NHI Neisseria, Haemophilus, Kingella, Moraxella
• ANI Anaeróbios

20
Catalase Coagulase e b-hemólise
catalase coagulase
catalase coagulase -
catalase - b hemólise -
catalase - b hemolise
21
Processamento - Vitek

• Preparo do Inóculo
• Cepa isolada recente
• GNI / GNS, GPI/GPS até 24h
• YBC 24 48h
• NHI / ANI até 48 h
• Salina 1,8 mL
• Cepas de Gram - , oxidase , NF escala 2
  (ident.)
• Cepas de Gram , mucóides, muito pequenas ou
  crescimento lento (48 h) escala 1
• GNI GNS
• GPI GPS

50 uL
200 uL
22
Processamento - Vitek

• Cuidados na aspiração e vedação do cartão
• Evitar bolhas, falhas preenchimento
• Controle de pureza da colônia
• Sugestão repique do cabinho de aspiração em
  placas de AS divididas em 4 ou 6 partes.
• Incubação
• GNI 2 a 18 h / GPI 2 a 15 h / GNS e GPS 4
  a 15 h
• Leitura e Interpretação dos Resultados

23
Avaliação dos resultados

• IDENTIFICAÇÃO
• Critérios de Aceitabilidade
• Verificar de identificação

24
Avaliação dos resultados

• IDENTIFICAÇÃO
• Confirmar Fenótipos raros
• Microorganismos não habituais

25
Avaliação dos resultados

• IDENTIFICAÇÃO
• Realizar provas adicionais se necessário (de
  acordo com o recomendado pelo fabricante)
• Segundo notas do laudo de liberação para
  confirmação do isolado ou diferencial entre
  espécies propostas
• Ex Klebsiella pneumoniae / oxytoca
• Proteus vulgaris / penneri

26
Causas de Erros na Identificação
Estabelecida através de Bionúmeros 1 2 4
1 2 4 1 2 4 1 2 4
- - - - -
- 7 5 4
0 Portanto a viragem de uma reação pode
invalidar o resultado
27
Provas Bioquímicas
2 espécies de gt probabilidade
28
Causas de Erro na Identificação
29
Causas de Erro na Identificação

• Microrganismo não viável
• Todas as provas bioquímicas são negativas.
• Viabilidade pode ser testada pocinho do controle
  de crescimento ( GC ).

30
Causa de Erro na identificação

• Mensagem Microrganismo não identificado
• Muitos resultados positivos (contaminação)
• Poucos resultados positivos (cartão com pouco
  inóculo em salina ou cultura antiga resultando
  em inóculo metabolicamente inativo)
• Ausência no banco de dados ou biotipo raro.
• Cartão inoculado com isolado que não é
  uniformemente bem suspensa em salina.

31
Causas de Erro na Identificação

• Erro na inoculação do cartão
• Término após 1º leitura por inaceitável nível
  de transmissão da luz
• Turbidez excede a concentração de McF
  determinada
• Prazo de inoculação e incubação acima de 20min
• Problema da seladora.

32
Identificação

• VITEK

• para determinar a sensibilidade precisa da
  identificação

33
MIC calculada
34
Identificação de Burkholderia spp. e outras
bactérias. Quatro sistemas
Organismo B.cepacia B.gladioli R.pickettii
B.multivorans S.maltophilia P.aeruginosa

Nº Isol. 50 14 6 2 3 11
Sistema Vitek GNI Vitek NFC API
20NE MicroScan Vitek GNI Vitek NFC API
20NE MicroScan Vitek GNI Vitek NFC API
20NE MicroScan Vitek GNI Vitek NFC API
20NE MicroScan Vitek GNI Vitek NFC API
20NE MicroScan Vitek GNI Vitek NFC API
20NE MicroScan
Correta 45 (90) 34 (68) 45 (90) 34 (68) 0
(0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 6 (100) 4 (100) 4 (66) 6
(100) 2 (100) 2 (100) 2 (100) 2 (100) 3
(100) 2 (66) 3 (100) 3 (100) 11 (100) 10 (91) 11
(100) 11 (100)
Incomp. 0 (0) 0 (0) 3 (6) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0
(0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (17) 0 (0) 0 (0) 0
(0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0
(0) 0 (0) 0 (0)
Incorreta 0 (0) 11 (22) 1 (2) 16 (32) 6 (43) 9
(64) 14 (100) 14 (100) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0
(0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0
(0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0)
Incorreta 5 (10) 5 (10) 1 (2) 0 (0) 8 (57) 5
(56) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (17) 0 (0) 0
(0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (33) 0 (0) 0
(0) 0 (0) 1 (9) 0 (0) 0 (0)
JCM, .37 (7) 2158, 1999
35
Sensibilidade e Especificidade para Identificação
Patógenos e Sistemas Listeria sp. WalkAway
40 MIS Vitek S.aureus WalkAway
40 MIS Vitek B.cereus MIS Vitek C.jejuni
MIS Salmonella sp. WalkAway
40 MIS Vitek E.coli WalkAway 40 MIS Vitek
Sensibilidade 100 90 97,5
97,5 47,5 95 55 42,5 72,5 97,5 85 100
100 52,5 100
Especificidade 100 100 100 100 100
95 97,5 97,5 32,5 100 100 100 100
97,5 97,5
JCM, 37(4) 944, 1999.
36
Identificação Vitek Plesiomonas
shigelloides Enterobacter cloacae Enterobacter
sakazaki Proteus vulgaris Pantoea
agglomerans Providência rettgeri Citrobacter
farmeri Pseudomonas fluorescens Pseudomonas
aeruginosa Burkholderia cepacia Pseudomonas
aeruginosa Pseudomonas stutzeri C.meningosepticum
Pseudomonas stutzeri Stenotrophomonas
maltophilia Alcaligenes faecalis

• Identificação método convencional
• Serratia liquefaciens
• Citrobacter freundii
• Enterobacter cloacae
• Proteus penneri
• Escherichia vulneris
• Providência stuartii
• Escherichia coli indol positivo
• Pseudomonas aeruginosa
• Pseudomonas putida
• Stetrophomonas maltophilia
• Burkholderia pickettii
• Pseudomonas fluorescens
• Chryseobacterium indologenes
• Plesiomonas shigelloides
• Acinetobacter baumannii / calcoaceticus
• Pseudomonas aeruginosa

Causa provável de erro Oxidase Ornitina Sorbitol
Indol/esculina Lisina Adonitol/arabinose Lisina Ac
etamida Acetamida Manitol Arginina Arginina Manito
l Lisina Esculina Argimina
Principais causas de erro na identificação das
bactérias Gram-negativas fermentadoras e não
fermentadoras da glicose.
37
Principais causas de erro na identificação das
bactérias Gram-negativas fermentadoras e não
fermentadoras da glicose.
Identificação AutoScan-4 Salmonella sp Vibrio
parahaemolyticus Salmonella typhi Salmonella
paratyphi A Enterobacter agglomerans Serratia
rubidaea Hafnia alvei Vibrio fluvialis Não
identifica corretamente Não identifica
corretamente Não identifica corretamente Não
identifica corretamente

• Identificação método convencional
• E. coli, indol negativo
• Edwardsiella tarda
• Salmonella choleraesuis
• Salmonella arizonae
• Citrobacter freundii
• Citrobacter freundii
• Yersinia ruckeri
• Enterobacter agglomerans
• Pasteurella sp
• Pseudomonas fluorescens
• Pseudomonas stutzeri
• Pseudomonas putrefaciens

Causa provável de erro H2S H2S e indol Sucrose
e descarboxilase Malonato H2S e vários açúcares
negativos Voges-Proskauer Voges-Proskauer Vários
testes de leitura negativo
38
Principais causas de erro na identificação das
bactérias Gram-negativas fermentadoras e não
fermentadoras da glicose.

• Identificação método convencional
• Citrobacter freundii
• Klebsiella ornithinolytica
• Klebsiella rhinoscleromatis
• Shigella dysenteriae
• Serratia liquefaciens
• Proteus mirabilis
• Proteus vulgaris
• Escherichia coli indol negativo
• Stenotrophomonas maltophilia
• A .baumannii/haemolyticus
• Pseudomonas aeruginosa
• C.meningosepticum
• Burkholderia pseudomallei
• Vibrio alginalyticus
• Chryseomonas luteola

Identificação WalkAway Enterobacter
cloacae Klebsiella pneumoniae/oxytoca Klebsiella
ozaenae Salmonella paratyphi A Serratia
marcescens Proteus vulgaris Morganella
morganii Salmonella / Arizona Burkholderia
cepacia Acinetobacter lwoffii Ps.
fluorescens/pútida Chryseobacterium
indologenes Burkholderia cepacia Vibrio
cholerae Flavimonas oryzihabitans
Causa provável de erro Ornitina Ornitina Malonato
Ornitina Arabinose Ornitina/Indol Ornitina H2S Ma
nitol Arginina Acetamida Manitol Manitol Citrato E
sculina/ONPG
39
Avaliação dos resultados

• SENSIBILIDADE
• Limitações (não indicação)
• Erros de leitura
• Alertas (software)
• Perfis incompatíveis
• Necessidade de testes confirmatórios e
  complementares.

40
Número de erros - Ciprofloxacina e Ofloxacina
Referência - Microdiluição em caldo (195)
Ofloxacina
Ciprofloxacina
Minor (n 195) 24 (12,3) 33 (16,9) 40 (20,5) 28
(14,4)
Minor (n 195) 16 (8,2) 32 (16,4) 27 (13,8) 36
(18,5)
Very Major (n 110) 0 0 0 0
Método Diluição em agar Disco
difusão MicroScan Vitek (MICs)
Major (n 54) 0 1 (1,9) 2 (3,7) 2 (3,7)
Very Major (n 110) 1 (0,9) 0 0 3 (2,7)
Major (n 54) 0 0 2 (3,7) 0
JCM, 37(3) 544, 1999.
41
RELATÓRIOS

• Perfis de Sensibilidade
• Relatórios de Tendências

42
Relatório Data Trac Vitek system
Selecionar
Classificar
Gerar relatório
43
Relatório por amostras
Amostra
44
Relatório de perfil de sensibilidade

45
Relatório de Tendências
46
Relatório Cumulativo por categoria
47
Relatório Cumulativo por CIM
48
Relatório Epidemiológico
Tipos de relatórios
Imprimir ou visualizar o relatório
49
SISTEMA Expert

• Pode detectar
• Identificação de microrganismo incompatível com o
  resultado de sensibilidade
• Erros técnicos
• Fenótipos raros ou improváveis
• Expressão de resistência incompatível
• Resistência cruzada

50
SISTEMA Expert

• Permite o usuário ter regras
• 1. não habilitadas
• 2. habilitadas manualmente
• 3. habilitadas automaticamente

51
Expert

• Erros Técnicos (nível1)
• Fenômeno Raro (nível2)
• Mecanismos de Resistência (nível 3)

52
Sistema Expert

• Grupo de Antimicrobianos
• Família (ex beta-lactâmicos)
• grupo (ex penicilinas)
• sub-grupos (ex aminopenicilinas)
• Grupo de Bactérias
• Família (ex Enterobacteriaceae)
• Gênero (ex Escherichieae)
• Espécie (ex E.coli)
• Fenótipo de Resistência
• Natural (intrínseca)
• Resistência adquirida
• Fenótipo não usual ou improvável

53
Finalidade do Expert

• DETECTAR
• erros técnicos.
• correlação inadequada entre identificação e teste
  de sensibilidade.
• baixo nível de resistência.
• Fenótipo de resistência característico

54
Identificação
Ativação de Regras do Expert
Regras do expert
Sensibilidade
55
LabPro Alert System

• Sistema complementar ao LabPro Information
  Management.
• Para melhorar a eficiência de forma automatizada
  na detecção de resultados atípicos de
  identificação e testes de sensibilidade

56

• acima de 75 regras universalmente aceitas no
  campo da microbiologia clínica
• LabPro Alert System

57

• Permite personalizar as regras de acordo com as
  necessidades do laboratório
• LabPro Alert System

58

• personalizar regras de acordo com variáveis
  locais
• permite criar regras condicionais do tipo
• Se....... Então...... (If ....
  Then...)
• LabPro Alert System

59
PERFIS DE RESISTÊNCIA

• Resistência Heterogênea em MRSA
• ESBL em enterobactéria
• Resistência de alto nível para aminoglicosídeos
  em Enterococos
• Triagem para VRE
• Penicilinases em estafilococos

60
AUTOMAÇÃO EM MICROBIOLOGIA

• IMPLANTAÇÃO DA REDE NACIONAL DE MONITORAMENTO DA
  RESISTÊNCIA MICROBIANA EM SERVIÇOS DE SAÚDE