Thrombophilia Testing

1
Thrombophilia Testing

• Robert Gosselin
• MT (ASCP), CLS

2

• D-dimer-ul
• Indica formarea cheagului
• Indica degradarea cheagului
• Testul D-dimer este de obicei folosit pentru a
  elimina suspiciune de
• Embolism pulmonar
• Tromboza venoasa profunda
• Coagulopatie de consum
• Disectie acuta de aorta

3
D
E
E
E
D
D
FIBRINA
D
D
D
D
tPA
D-dimer
Plasminogen
Plasmina
uPA
FIBRINOGEN
D
D
E
E
D
D
E
Fragmentul Y
Fragmentul X
D
Fragmentele D si E
Fragmentul D
4
XDP ()
Anticorpul anti-uman conjugat XDP
Test cromogenic ?
Spalare
Spalare
Microrezervor ce contine anticorpul-tinta XDP


Colorare




?
?
?









Cantitatea de culoare este proportionala cu
cantitatea de XDP prezenti. Rezultatul cantitativ
se extrapoleaza de la curba de calibrare
Incubare
Incubare
Reagenti acoperiti cu anti-XDP
XDP ? al pacientului
Citirea instrumentului modificari în densitatea
optica
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
Cantitatea de lumina ce disperseaza particulele
este proportionala XDP prezenti. Rezultatul
cantitativ se extrapoleaza de la curba de
calibrare
?
?
?
?
?
Incubare
Rezervor de testare
5
Sensibilitate
Real Pozitiv Reale Pozitive False Negative
Specificitate
Real Negativ Reale Negative False Pozitive
Valoare Predictiva Negativa
Reale Negative Toate Negative
6
Probabilitate Clinica pentru PE (embolism
pulmonar)

• Semnele clinice si simptomele DVT 3
• Rata batailor inimiigt100/min 1.5
• Hemoptizia 1
• Cancer avansat 1
• Pacient tintuit la pat (gt3 zile) sau mai mult
  (gt12 saptamâni)
  1.5
• Manifestari anterioare de DVT sau PE 1.5
• Probabilitatea diagnozei de PE 3

Scor Scazut lt2 Moderat 2-6 Ridicat gt6
Wells PS, et al Thromb Haemost 2000 83416-20.
7
Probabilitatea clinica pentru DVT (tromboza
venoasa profunda)

• Cancer avansat 1
• Paralizie, paresis, recent mulaj de gips la
  picior 1
• Pacient tintuit la pat (gt3 zile) sau mai mult
  (gt12 saptamâni) 1
• Întreg picior este umflat 1
• Umflatura la gamba (gt3cm) în comparatie cu
  celalalt picior 1
• Edema profunda mai mare decât în piciorul
  simptomatic 1
• Vene colaterale superficiale (nonvaricoza)
  1
• Sensibilitate localizata de-a lungul sistemului
  venos profund 1
• Manifestari anterioare ale DVT
  1
• Dx alternativa de DVT (sau probabilitate)
  -2
• Scor DVT improbabilitate lt2 DVT
  probabilitate gt2

Wells PS, et al Lancet 1997 3501795-98 N Engl
J Med 2003349 1227-35
8
Algoritmul DVT
Comprimare via US (ultrasonografie)
Pozitiva
Negativa
Probabilitate scazuta
CUS în Serie (5-8 zile)
Prob Mod sau Ridicata
3 luni de tratament
Pozitiva
Negativa
VTE Pozitiv
VTE Negativ
DVT Pozitiva
DVT Negativa
9
Algoritmul PE
Spiral CT sau Angiograma
Pozitiv
Negativ
3 luni de tratament
VTE Pozitiv
VTE Negativ
PE Pozitiv
PE Negativ
10
3.7
Innovance D-dimer mg/L
0.8
Absenta VTE
Prezenta VTE
11
Probabilitate de PE
Probabilitate de DVT
Innovance D-dimer, mg/L
Scazut
Mod
Ridicat
Improbabil
Probabil
12
Testul D-dimer pearls

• Nu e metoda cea mai eficienta (silver bullet)
• Metoda presupune sensibilitate extrema
• Metoda trebuie sa foloseasca instrumente clinice
  de determinare a probabilitatii
• Nu e utila în determinarea probabilitatii
  ridicate
• Nu are capacitate de a determina VTE la pacienti
  în baza de OAC
• Rx Heparina poate rezulta în fals negativ
• Majoritatea studiilor exclud Hx anterior
• Existenta unui numar minim de studii privind
  Disectia acuta de aorta

13
Testul obisnuit pentru Trombofilie

• Proteina C de preferinta-functionala
• Proteina S de preferinta-functionala
• Antitrombina de preferinta-functionala
• V Leiden (sau testul de rezistenta APC)
• Mutatia 20210G (protrombina)
• MTHFR
• APS--- ulterior!
• Factorul VIII si Fibrinogenul (altele??)
• Altele

Testarea moleculara
Plasminogen, PAI-I, emitere de tPA, HCFII, TAFI,
trombocite, etc
14
Proteina C-Amidolitica
Venin de Viperidae si Sarpe cu clopotel
Proteina C
Proteina C Activata
pNA-Peptida
Peptide pNA
15
Proteina C-Amidolitica -Interferente
Aprotinina inhiba aPC Fals ?
Venin de Viperidae si Sarpe cu clopotel
Proteina C
Proteina C Activata
pNA -Peptida
Peptide pNA
Trombolitica Fals ?
16
Proteina C - Coagulare
Venin de Viperidae si Sarpe cu clopotel
Proteina C
Proteina C Activata
Plasma saraca în Proteina C
aPTT
Prelungirea timpului de coagulare
Inhibitia Factorilor Va si VIIIa
17
Proteina C Coagulare Interferente
Aprotinina inhiba aPC Fals ?
Venin de Viperidae si Sarpe cu Clopotel
Pre-analitic
Proteina C
Proteina C Activata
Plasma saraca în Proteina C
Fbg sau Factorul VIII marite Fals ?
aPTT
Prelungirea timpului de coagulare
Inhibitia Factorilor Va si VIIIa
Heparina DTI Fals ?
LA Fals ?
Mutatia V Leiden Fals ?
18
Proteina S Coagulare
Factorul Va aPC
Proteina S
Inhibitia Factorului Va
Plasma saraca în Proteina S
Incubare
CaCl2
Prelungirea timpului de coagulare
19
PS Functionala-Interferente
Aprotinina inhiba aPC Fals ?
Pre-analitic
Factorul Va aPC
Proteina S
Inhibitia Factorului Va
Plasma saraca în Proteina S
Incubare
Fbg sau Factorul VIII marite Fals ?
Heparina DTI Fals ?
CaCl2
Prelungirea timpului de coagulare
Mutatia V Leiden Fals ?
LA Fals ?
20
Proteina S sau Proteina C ()
Anticorpul anti-uman conjugat al PC sau PS
Test cromogenic ?
Spalare
Spalare
Microrezervor ce contine Ab captat
Anti-PC Anti-PS





Colorare

?
?
?









Cantitatea de culoare este proportionala
cantitatii de PC sau PS prezente. Rezultatul
cantitativ se extrapoleaza de la curba de
calibrare
Incubare
Incubare
Pentru PS Totala si Independenta (PEG
pre-tratare a mostrelor ca sa se precipite în
afara PS)
PS ? a pacientului
Reagenti acoperiti cu C4b
PS anti-uman
Citirea instrumentului modificari în densitatea
optica
?
?
?
?
?

?
?
?
?
?
?
?
?
Cantitatea de lumina ce disperseaza particulele
este proportionala cantitatii de PS independenta
prezenta. Rezultatul cantitativ se extrapoleaza
de la curba de calibrare

?
?
?
?
?
Incubare
Rezervor de testare
21
Testarea Antitrombinei
AT Heparina
Complexul ATHep
Factor de exces activat (sau Xa sau trombina)
Cantitatea de culoare este invers proportionala
cantitatii de AT prezenta. Rezultatul cantitativ
se extrapoleaza de la curba de calibrare
Complexul ATHepXa Xa rezidual
S2765
Peptide pNA
22
Testarea AT Interferente
AT Heparina
Complexul ATHep
DTI Fals ?
Factor de exces activat (sau Xa sau trombina)
Cantitatea de culoare este invers proportionala
cantitatii de AT prezente. Rezultatul cantitativ
se extrapoleaza de la curba de calibrare
Complexul ATHepXa Xa rezidual
S2765
Heparina Rx Fals ?
Peptide pNA
23
Cauzele ? ? PS sau PC

• Tromboza în faza acuta
• Afectiuni ale ficatului
• Antagonisti ai vitaminei K (analize functionale)
• Sindromul Nefrotic
• Starile inflamatorii (PS)
• Graviditate
• Rx Hormonal
• Rx L-asparaginaza
• Impactul medicamentos
• APA
• Activitate ? a factorilor

Considerente Pre-analitice
24
Testul de rezistenta a APC

• aPTT modificat
• Plasma saraca în Factorul V contribuie la
  sporirea specificitatii si sensibilitatii

aPTT
Plasma Plasma saraca în FxV
Timp de coagulare 1
CaCl2
aPTT
Plasma Plasma saraca în FxV
Timp de coagulare 2
CaCl2 APC
CT2
Raport
Raportul normal de obicei e gt2.0
CT1
25
Rezistenta APC Interferente
Pre-analitic
aPTT
Plasma Plasma saraca în FxV
Timp de coagulare
CaCl2
Ca regula, deviaza sistematic tendinta spre
raporturi mai mici cu APA. Pacientul ce
administreaza Xigris poate obtine rezultate
aPTT
Plasma Plasma saraca în FxV
Timp de coagulare 2
CaCl2 APC
CT2
Raport
Raportul normal de obicei e gt2.0
CT1