Transposition

1

• Les documents présentés dans ce cours sont issus
  
• soit de travaux personnels
• soit de travaux présentés sur le web
• Ils sont à lusage exclusif des étudiants en
  dehors de toute exploitation
• commerciales
• D. LOCKER
• PR
• Génétique Orléans

• Les documents présentés dans ce cours sont issus
  
• soit de travaux personnels
• soit de travaux présentés sur le web
• Leur utilisation ne doit donner lieu à aucune
  exploitation commerciale
• D. LOCKER
• Professeur des Universités
• Spécialité Génétique
• Université dOrléans
• UFR/Faculté des Sciences

2
La recombinaison site-spécifique
Catalysée par des recombinases spécifiques, elle
se produit au niveau de séquences-signal de
petites tailles Exemples lintégration du phage
Lambda lassemblage des gènes dimmunoglobulines
3
Le cycle du bactériophage ?
4
Intégration du phage ?
5
LADN circulaire du phage est intégré dans lADN
bactérien par recombinaison réciproque aux site
attP et attB. Le prophage est excisé par
recombinaison réciproque aux site attL et attR
6
La coupure disymétrique dans la séquence commune
dattP et attB conduit aux crossing over
Crossing over
Alignement des séquences
ADN phage
ADN bactérien
Les jonctions sont liguées et génèrent le prophage
7
Coupure par lintégrase
8
Comment produire la diversité des anticorps Un
mammifère peut synthétiser gt 108 Ac différents.
9
Structure schématique dun anticorps
10
Les expériences de Tonegawa Démonstration du
remaniement des gènes dIgG dans les
cellules productrices danticorps
11
Les gènes des chaînes légères La région J
code des jonctions qui relient les régions V et C.
12
Un des 100 gènes variables est lié par
recombinaison à lune des 4 régions J. La
recombinaison V-J se produit au niveau dune des
bases situées à proximité du codon 95. Les
régions de jonction peuvent être utilisées dans
les 3 cadres de lecture
13
Les fragments recombinés VJ sont liés aux gènes
C à partir de lépissage de lARN
GT GT AG intron
transcription
Le doublet GU le plus à gauche est utilisé comme
site dépissage
14
Tous les gènes variables sont précédés dun
promoteur Un activateur stimule le promoteur le
plus proche des gènes C.
V V J
C
P
P
Activateur
15
Réarrangements des gènes IgG (chaine légère)
16
Les chaînes lourdes Il y a environ 15 segments,
100 régions VH et 5 gènes JH.
17
La séquence D se lie à la séquence JH puis la
séquence VH se lie à DJH. Une grande variété de
chaînes lourdes est possible car il y a
recombinaison de 3 séquences Les deux premières
régions de la partie variable sont codées par la
séquence VH la troisième est codée par les
séquences D et JH . Cette troisième partie est
la plus variable et présente une taille de 2 à 26
résidus.
18
(No Transcript)
19
Organisation des différentes chaines dIgG
20
Résumé des différents types de réarrangements
21
Mécanismes de la recombinaison
22
Les séquences V D et J sont entourées de
séquences de reconnaissance. Chaque séquence de
reconnaissance est formée de 7 pb séparées de 9
pb par un espacement. 5 CACAGTG----------------
ACAAAAAC 3 3 GTGTCAC----------------TGTTTTTG
5 espacement Lespacement est de
12 ou 23 pb. Les seuls appariements possibles
sont V-J, V-D et D-J
23
(No Transcript)
24
CG CG TA TA TA TA TA CG AT
9
12
23
Structure reconnue par les enzymes de
recombinaison
GC TA GC TA CG AT CG
7
C.O.
v?
GC TA GC TA CG AT CG
J?
7
23
12
CG CG TA TA TA TA TA CG AT
9
25
(No Transcript)
26
Recombinaison VDJ par des échanges
sites-spécifiques
27
Augmentation de la variabilité par la
recombinaison
28

• Augmentation de la diversité
• jonctions imprécises
• frame shift
• recombinaison intra-triplet
• Insertion de nucléotides au hasard par la
  terminal
• déoxynucléotidetransférase